河南省中医院血培养分离菌的分布及耐药性分析

胡 玥，张小倩，李永伟

河南省中医院血培养分离菌的分布及耐药性分析

胡 玥，张小倩，李永伟

目的 了解河南省中医院近年来血培养阳性标本中分离菌的分布及耐药性，为临床合理选择用药提供依据。 方法 回顾性分析2012年1月—2014年12月该医院各科室送检的血培养阳性结果，药敏数据用WHONET 5.6软件进行分析。结果 共收集住院患者血培养标本3 634份，培养阳性291份，阳性率为8.0 %。291份阳性标本中，革兰阳性菌139株，占47.8 %；革兰阴性菌120株，占41.2 %；真菌32株，占11.0 %。139株革兰阳性菌中前3位的是凝固酶阴性葡萄球菌（72株）、金黄色葡萄球菌（34株）和肠球菌属（21株）；120株革兰阴性菌前3位的是大肠埃希菌（54株）、铜绿假单胞菌（28株）和肺炎克雷伯菌（25株）；32株真菌中前3位的是近平滑念珠菌（14株）、白念珠菌（10株）和季也蒙念珠菌（5株）。未发现耐万古霉素和利奈唑胺的葡萄球菌和肠球菌。结论 临床医师应高度重视并及时送检血培养，以便尽早确定病原菌，报告药敏结果，为临床医师提供准确的诊断与治疗依据，有效控制血流感染。

血培养； 病原菌； 抗菌药物； 耐药性

血流感染是非常严重的感染性疾病，病死率高达30 %以上［1］，在临床各科都有发生。特别是一些长期住院、免疫力低下的患者，更应该及时采集血培养，尽早确定病原菌，报告药敏结果，为临床医师提供准确的诊断与治疗依据，有效控制血流感染。本文就河南省中医院3 634份血液标本进行培养，对检出主要病原菌的构成及耐药性进行回顾性分析，报道如下。

1　材料与方法

1.1标本来源

2012年1月—2014年12月我院门诊及住院患者（以住院患者为主）的血培养标本3 634份，其中阳性标本291份。

1.2仪器与试剂

全自动血培养仪器（BACT/ALERT 3D）及配套血培养瓶和VITEK 2-Compact细菌鉴定系统及配套药敏卡为法国生物梅里埃公司生产；各种培养基来自河南安图绿科生物科技有限公司；抗菌药物的纸片来自英国OXOID公司。念珠菌药敏板为法国生物梅里埃公司的ATB Fungus 3。

1.3标本采集及处理

成人为1套（需氧瓶和厌氧瓶各1个），采血量为每瓶8～10 mL，儿童为1个黄色的抗生素中和瓶，采血量为2～5 mL。临床严格按照标准的无菌操作采集血标本，之后立即送检。如不能及时送检，应室温保存且不得超过12 h。送检的血培养瓶及时放入血培养仪中进行培养，培养过程中仪器报警有阳性时，立即涂片镜检，把镜检结果报告给临床并转种相应的培养基中培养至少18～24 h，仪器5 d未报警，转种血平皿和巧克力平皿培养至少18～24 h，并作涂片染色，无细菌生长或染色未见细菌者则判读为阴性。

1.4细菌培养鉴定及药敏试验

严格按照《全国临床检验操作规程》及仪器试剂说明书操作，药敏试验结果采用CLSI 2014年版标准判断。

1.5质控菌株

金黄色葡萄球菌（金葡菌）ATCC 25923、大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853由卫生部临床检验中心提供。

1.6统计学分析

同一患者重复分离菌株，仅取初次分离菌株进行分析。采用世界卫生组织耐药监测中心提供的WHONET 5.6软件进行统计分析。

2　结果

2.1血培养阳性率及菌株分布

3 634份血培养标本共分离出病原菌291株，阳性率为8.0 %，其中革兰阳性菌139株，占47.7 %；革兰阴性菌120株，占41.2 %；真菌32株，占11 .0%。其分布及构成比见表1。表中所列72株凝固酶阴性葡萄球菌中，50株根据其临床症状、报阳时间及瓶数、次数，确定为致病菌，13株为污染菌，另9株不定。

表1　291株分离菌的分布及构成比Table 1 Species distribution of 291 strains of microorganisms isolated from blood stream

2.2耐药分析

2.2.1葡萄球菌 血培养中耐甲氧西林金葡菌（MRSA）和凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为47.0 %和78.4 %。金葡菌对青霉素、红霉素均高度耐药；凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素、红霉素及喹诺酮类抗菌药物亦高度耐药。药敏试验结果见表2。

2.2.2肠球菌属 屎肠球菌对高浓度氨基糖苷类耐药率为60.0%，对其他常用抗菌药物亦呈高度耐药，未发现对喹奴普丁-达福普汀、替加环素、利奈唑胺和万古霉素耐药的菌株；粪肠球菌对高浓度氨基糖苷类药物的耐药率略低于屎肠球菌，对其他常用抗菌药物保持较高的敏感率，亦未发现对替加环素、万古霉素和利奈唑胺耐药的菌株。见表3。

表2　葡萄球菌属对常用抗菌药物的耐药率和敏感率Table 2 Susceptibility of Staphylococcus to commonly used antimicrobial agents （%）

表3　肠球菌属对常用抗菌药物的耐药率和敏感率Table 3 Susceptibility of Enterococcus species to commonly used antimicrobial agents （%）

2.2.3主要革兰阴性杆菌 肠杆菌科细菌中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBL分别达到了58.8 % 和43.0 %。大肠埃希菌对多种抗菌药物均高度耐药，仅哌拉西林-他唑巴坦、碳青霉烯类、阿米卡星和头孢替坦的敏感率较高，均＞80 %。肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率较大肠埃希菌稍低，但肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类（亚胺培南和美罗培南）的耐药率略高于大肠埃希菌。铜绿假单胞菌对常用抗菌药物哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、阿米卡星和喹诺酮类的耐药率均＜20 %。但铜绿假单孢菌对碳青霉烯类的耐药率（39.1 %）较大肠埃希菌（3.3 %）和肺炎克雷伯菌（7.8 %）要高得多，见表4。

表4　主要革兰阴性菌对常用抗菌药物的耐药率和敏感率Table 4 Susceptibility of gram negative bacteria to commonly used antimicrobial agents （ %）

2.2.4真菌 真菌对常用5种抗真菌药物均高度敏感，见表5。

表5　真菌对常用抗真菌药物的耐药率和敏感率Table 5 Susceptibility of fungal isolates to commonly used antifungal agents （ %）

3　讨论

本次监测结果显示，我院2012-2014年血培养分离病原菌种类较多，且分布广泛。革兰阳性菌的检出率略高于革兰阴性菌。有文献报道，在抗生素时代初期，血流感染的主要病原菌为革兰阴性杆菌［2］，近年来革兰阳性球菌已成为主要病原菌，特别是免疫损伤人群的血流感染。我院血培养病原菌的分布与文献报道基本一致。革兰阳性菌主要为葡萄球菌属，其中凝固酶阴性葡萄球菌共检出72株，占24.7 %，与文献报道一致［3］。凝固酶阴性葡萄球菌的检出是否致病一直以来颇有争议，因为凝固酶阴性葡萄球菌不产生血浆凝固酶，毒力较弱，再加上凝固酶阴性葡萄球菌感染需要特定的侵入途径，才能引发血流感染，所以以往都被认为是极少引起感染的条件致病菌，但近年有文献报道［4］，凝固酶阴性葡萄球菌能产生多糖胞间黏附素等致病因子，有一定的致病能力，特别是对儿童等免疫力低下人群。因此，血培养如分离出表皮葡萄球菌等凝固酶阴性葡萄球菌时应根据其报阳的时间及瓶数，及时与临床医师沟通，全面了解患者临床症状及病情发展，以便更准确判断该菌是否为致病菌。另一方面，通过严格执行标本采集的标准化操作，推行双侧双套送检，降低污染的发生率。34株金葡菌16株为MRSA，临床应引起高度重视［5］，MRSA的多重耐药给临床治疗带来一定困难，但万古霉素治疗MRSA的效果较好，可优先考虑。未检出耐万古霉素和利奈唑胺的葡萄球菌和肠球菌。

革兰阴性菌中常见的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBL的检出率分别为58.8 %和43.0 %。肠杆菌科中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的耐药率均＜10 %，所以我院的碳青霉烯类药物已成为临床经验治疗重度肠杆菌科细菌血流感染的首选。但由于近年在细菌中出现了碳青霉烯酶［5］，使得碳青霉烯类药物在临床中应用时需格外慎重，临床应严格监测药敏结果，并密切关注应用疗效。其他药物如哌拉西林-他唑巴坦和阿米卡星的耐药率均在20 %以下，也可供临床选择。

真菌的检出率达10.7 %，主要分布在重症医学科、肿瘤科和血液科。可能与患者大量使用广谱抗生素、长期使用激素、化疗和侵袭性操作有关。另外第三代头孢菌素、碳青霉烯类等广谱抗菌药物的长期应用，也易导致菌群失调，继发真菌血症。本次监测中真菌对抗真菌药物氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的敏感率非常高，与文献报道一致［6］。

血流感染是临床常见、严重的感染性疾病，病因多样，临床表现复杂，具有起病急、变化迅速、病死率高的特点。引起血流感染的病原菌种类繁多，且耐药率不断升高，3年中，本院微生物室从血培养中分离出马耳他布鲁菌3株、二氧化碳嗜纤维菌1株，还有从儿科和新生儿病房分离出的流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和无乳链球菌等具有典型意义的病原菌，及时给临床医师提供了明确的用药方向，患者的症状很快得到了控制。因此，临床血培养合格送检率的提高和检验科室及时准确地检出血培养中的病原菌并应用药敏结果报告对指导临床合理用药尤为重要。

［1］韩福禄，王文艳，庞莉.血培养常见病原菌分布及耐药性分析［J］.中华医院感染学杂志，2012，（3）：630-631.

［2］陈世敏，黄象娟，王凯，等. 血培养检出细菌的变迁及耐药性分析［J］. 中华检验医学杂志，2003，26（2）：114.

［3］谢服役.血培养标本病原菌分布及耐药性分析［J］.中华医院感染学杂志，2013，23（1）：222-224.

［4］谢琳卡，杨道锋，余贻汉. 凝固酶阴性葡萄球菌血流感染临床分析及耐药性监测［J］. 内科急危重症杂志，2007，13（6）：302-304.

［5］胡付品，叶信予，吴培澄，等.2005年上海华山医院细菌耐药性监测［J］.中国感染与化疗杂志，2007，7（4）：233-237.

［6］李娟，冯锴，李艳，等.血培养病原菌种类分布和耐药性分析［J］.国际检验医学杂志，2012，33（1）：79-81.

Distribution and antibiotic resistance of the microorganisms isolated from bloodstream

HU Yue，ZHANG Xiaoqian，LI Yongwei. （Microbiology Team，Department of Laboratory Medicine，Henan Province Hospital of TCM，Zhengzhou 450002，China）

Abstract To understand the distribution and antibiotic resistance of the microorganisms isolated from bloodstream in Henan Province Hospital of TCM for rational antimicrobial therapy. Methods A retrospective analysis was conducted on the positive results of blood cultures of clinical specimens from January 2012 to December 2014. Antimicrobial susceptibility data were analyzed by WHONET 5.6 software. Results From January 2012 to December 2014，of the 3 634 blood samples submitted for culture of microorganisms，291 （8.0 %） were positive，including 139 （47.8 %） strains of gram positive bacteria，120 （41.2 %） strains of gram negative bacteria，and 32 （11.0 %） strains of fungi. The most common gram positive bacteria were coagulase-negative Staphylococcus （72 strains），Staphylococcus aureus （34 strains），and Enterococcus （21 strains）. The most common gram negative bacteria were Escherichia coli （54 strains），Pseudomonas aeruginosa （28 strains），and Klebsiella pneumoniae （25 strains）. The top three fungal species were Candida parapsilosis （14 strains），Candida albicans （10 strains），and Candida guilliermondii （5 strains）. Neither Enterococcus nor Staphylococcus strains were found resistant to vancomycin or linezolid. Conclusions Clinicians should pay more attention to blood culture and antimicrobial susceptibility testing for appropriate antimicrobial therapy and proper control of hospital infections.

blood culture； pathogenic bacterium； antibacterial agent； antibiotic resistance

R378

A

1009-7708（2016）04-0468-05

10.16718/j.1009-7708.2016.04.016

河南省教育厅科学技术重点项目（14A320028）。

河南省中医院检验科微生物室，郑州 450002。

胡玥（1984—），女，本科，主管技师 ，主要从事微生物学实验及临床细菌耐药研究。

李永伟，E-mail：liyw71@126.com。

2015-07-23

2016-01-12