金银花提取物的体外抑菌试验

阮武营，张俊婷，黄宗梅，刘守川

（1.开封市动物疫病预防控制中心，河南　开封　470002；2.开封市第二人民医院；3.河南农业大学；4.洛阳普莱柯生物工程股份有限公司）

金银花提取物的体外抑菌试验

阮武营1，张俊婷2，黄宗梅3，刘守川4

（1.开封市动物疫病预防控制中心，河南开封470002；2.开封市第二人民医院；3.河南农业大学；4.洛阳普莱柯生物工程股份有限公司）

分别用药敏片法、管碟法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌种的抑菌效果。结果表明：金银花黄酮类、绿原酸类提取物对鸭巴氏杆菌、猪链球菌抑菌效果明显，对猪沙门氏菌抑菌效果次之。

金银花；黄酮类；绿原酸类；抑菌效果

现代医学，特别是化学药物，面临着越来越多的问题，例如，毒副作用、抗药性、病症不能彻底根除等等。随着人们医疗保健意识的增强，人们越来越追求绿色食品，纯天然制品。“回归自然”，崇尚天然药物，已经成为一种世界性的潮流。金银花的主要化学成分是绿原酸、异绿原酸、白果酸、咖啡酸、本樨草素、木樨草素-7-葡萄甙、β-谷甾醇、豆甾醇、p-谷甾醇-D-G甙、豆甾醇-D-D甙及挥发油等，这些化学成分均具有强的抗菌作用。据报道，银花醇浸液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎杆菌、脑膜炎双球菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、百日咳杆菌、绿脓杆菌、结核杆菌、霍乱杆菌等多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有一定的抑菌作用，服用后，具有无毒、无害、无残留、无耐药性的优势。试验分别采用了药敏片法、管碟法来测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对鸭巴氏杆菌、猪链球菌、猪沙门氏菌的抑菌环大小，来分析判定黄酮类、绿原酸类的抑菌效果，为应用于临床实践，预防和治疗几种常见的细菌性疾病提供理论依据，现将试验结果报告如下：

1　材料与方法

1.1黄酮类、绿原酸类

金银花的黄酮类、绿原酸类提取物由河南省动物性食品安全重点实验室提供，药品均为无菌。

1.2供试菌种

猪链球菌（Porcine streptococcus）、猪沙门氏菌（PrcineSalmonella）、鸭巴氏杆菌（Duck pasteurella）均系开封市动物疫病预防控制中心保存菌种。

1.3药敏片法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌的抑菌作用

首先取15 ml琼脂培养基倒入无菌培养皿内，冷却后，将各种供试菌悬液取1 ml注入培养基内摇均匀，再用酒精棉球吸取多余的菌悬液，制成含菌平板，然后用无菌镊子夹取含有黄酮类、绿原酸类的药敏片贴在含菌平板上，每皿贴4片，每菌作3次重复，细菌培养箱中37℃培养24 h，测量药敏片周围抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。

1.4管碟法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌的抑菌作用

首先取15 ml琼脂培养基倒入无菌培养皿内，冷却后，将各种供试菌悬液取1 ml注入培养基内摇均匀，再用酒精棉球吸取多余的菌悬液，制成含菌平板，然后用无菌镊子夹无菌牛津杯放在含菌平板上，用镊子轻按一下，每皿放3个牛津杯，每菌作3次重复，加入200 μl金银花提取液（原液含量为200 μg/ml），放在4℃冰箱扩散24 h后，在细菌培养箱中37℃培养24 h，测量抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。

2　结果与分析

2.1药敏片法测定金银花黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌种的抑菌效果

金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对鸭巴氏杆菌、猪链球菌有明显的抑菌作用；对猪沙门氏菌抑制作用次之；绿原酸类对细菌的抑菌作用略强于黄酮类对细菌的抑菌作用。结果见表1。

表1　药敏片法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌种的抑菌环直径（mm）

2.2管碟法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌种的抑菌效果

试验结果与药敏片法基本一致，金银花的黄酮类，绿原酸类提取物对鸭巴氏杆菌、猪链球菌有明显的抑菌作用；对猪沙门氏菌抑制作用次之；绿原类对细菌的抑菌作用略强于黄酮类对细菌的抑菌作用，结果见表2。

表2　管碟法测定金银花的黄酮类、绿原酸类提取物对供试菌种的抑菌环直径（mm）

3　小结与讨论

金银花的化学成分主要有黄酮类化合物、木樨草素、绿原酸、异绿原酸和一些挥发油。其中抗菌有效成分以绿原酸和异绿原酸以及黄酮类化合物为主。现代药理学研究证明，植物金银花内含有木樨草素、肌醇、皂贰IV等有效成分，因其含有大量的还原基团，所以对多种致病菌具有抑制作用。抑菌试验证明，中药金银花提取物对巴氏杆菌、链球菌、沙门氏菌具有良好的抗菌活性，从各菌种的抑菌环大小来看，金银花黄酮类、绿原酸类提取物对鸭巴氏杆菌、猪链球菌抑菌效果明显，对猪沙门氏菌抑菌效果次之。标准绿原酸对供试菌周围无抑菌环，经查资料可知，金银花提取物中抑菌成分除绿原酸和异绿原酸不耐高温外，其他抑菌成分能耐高温，因此，可能是由于保存或干燥过程中破坏了其有效成分。绿原酸类、黄酮类制成的药敏片，用无真空干燥的比用真空干燥的抑菌效果明显，说明温度对绿原酸类、黄酮类有影响。

临床资料表明，金银花提取物对多种细菌所致的感染性疾病有良好的治疗效果。现代试验研究显示，金银花提取物能抑制细菌的糖、蛋白质、核酸代谢，抑制细菌繁殖，提高巨噬细胞、中性白细胞吞噬功能。该试验所用金银花的黄酮类、绿原酸类提取物具有清热解毒作用，对试验提供的常见菌种都有不同程度的抑菌作用，可为预防和治疗几种常见的细菌性疾病提供理论依据，如传染性浆膜炎是由鸭疫巴氏杆菌（PA）引起鸭或其他禽类的一种败血性疾病，此病对2～3周龄的雏鸭易感性很强，感染率可达90%，死亡率在5%～8%，是造成养鸭业经济损失最主要的疾病之一；沙门氏菌引起的猪副伤寒，是肠道的重要致病菌，其侵害肠道，可引起肠炎。该试验结果也可为开发金银花的黄酮类、绿原酸类提取物作为治疗鸭疫巴氏杆菌、猪副伤寒、猪链球菌感染的药物提供基础研究数据。

［1］刘辉，侯殿东.抗菌织品抑菌效果检测及其方法研究［J］.中国消毒学杂志，2006，23（2）：143

［2］刘颖熠译，王嘉德校.可填压复合树脂表面抗菌性能［J］.原载Quintessence Int，2004，35（5）；189-193（英文）

［3］林丽英，梁艺.湿热片抑菌实验［J］.中药材，2003，26 （lO）：748

［4］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1998.1791-1794.

［5］Fayer R，Santin M，Xiao L.Cryptosporidium bovin.sp. （Apicomplexa：Cryptosporidiidae）in cattle（Bos taurus）［J］. J Parasitol.2005，91（3）：624～629.

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