骨痹止痛液对兔膝骨性关节炎软骨中相关因子表达影响的研究

姚兴璋，李兴勇，李喜香，庞增林，麻　虎，宋　敏甘肃省中医院，甘肃 兰州 70050；甘肃省第三人民医院；张家川县中医医院；甘肃中医药大学

骨痹止痛液对兔膝骨性关节炎软骨中相关因子表达影响的研究

姚兴璋1，李兴勇2，李喜香1，庞增林2，麻虎3，宋敏4
1甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；2甘肃省第三人民医院；3张家川县中医医院；4甘肃中医药大学

目的：研究骨痹止痛液对动物模型膝关节软骨中白细胞介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子α （TNF-α）的影响。方法：将30只新西兰大白兔随机分为骨痹止痛液组（A组）、盐酸氨基葡萄糖片组（B组）、模型组（C组）3组，每组10只。建立膝骨性关节炎模型后，分别给予骨痹止痛液、盐酸氨基葡萄糖片、生理盐水灌胃，连续8周。于8周后取样，采用肉眼观察形态学改变、HE染色、RT-PCR检测软骨中IL-1、TNF-α因子表达等指标。结果：肉眼观察：A组及B组较给药前无明显变化，C组关节软骨破坏较为严重，甚至出现糜烂。RT-PCR：A组、B组与C组比较，A组、B组兔软骨标本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表达量明显降低（P＜0.05）。兔软骨标本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表达量A组较B组减低（P＜0.05）。结论：骨痹止痛液通过减少促炎因子（IL-1、TNF-α）的表达来抑制炎症反应，从而减缓关节损伤。

骨痹止痛液；骨性关节炎，膝关节；白细胞介素-1；肿瘤坏死因子α

膝关节骨性关节炎（k n ee osteoart h r i t i s，K OA）是一种慢性退行性疾病，好发于老年人群［1］。K OA发病机制尚未明确，细胞因子是引起K AO发病的关键因素。本研究通过观测骨痹止痛液对兔K OA模型关节软骨中白细胞介素-1（I L-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响，为临床上使用骨痹止痛液提供客观依据。

1　材料与方法

1.1实验动物与分组清洁级新西兰大耳兔30只，雌雄不限，体质量为（2.5±0.3）k g，采用随机数字表分为3组，分别为骨痹止痛液组（A组）、盐酸氨基葡萄糖片组（B组）、模型组（C组），每组10只。

1.2动物造模所有实验动物实验性饲养1周，然后按照文献［2］描述方法造模：采用外科手术打开兔膝关节后，切断其前交叉韧带、内侧副韧带及取出内侧半月板。术后每只动物给予青霉素40万U/d，持续7天。造模后7天每日驱赶实验动物活动半小时，驱赶4周后K OA造模成功。

1.3给药参照《药理实验方法学》，按体表面积换算后，分别喂6mL骨痹止痛液，150mg/k g盐酸氨基葡萄糖片，生理盐水。结合体质量按相应剂量蒸馏水稀释成20 mL后连续灌服8周后处死白兔。

1.4观察指标H E染色光镜观察及R T-PC R测定I L-1m R N A、I L-1、TNF-αm R N A表达量。

1.5统计学方法应用S P SS 19.0统计软件包进行统计处理，所有实验数据以（±s）表示，统计方法对各时段采用单因素方差分析（A N O V A），以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1HE染色光镜观察8周后A组、B组软骨细胞排列不规则现象在部分区域仍可见，但相比C组明显少见，各层界限欠清楚，镜下个别区域有簇集现象，潮线个别不完整；C组软骨组织表层变薄甚至部分消失，表面粗糙，可见一些裂隙或者剥脱；软骨细胞密度分布不均一，存在细胞簇集现象，软骨细胞无明显排列顺序，潮线多不完整。见图1。

图1　各组关节软骨变化（HE染色）

2.2IL-1mRNA、TNF-αmRNA表达量A组、B组与C组比较，A组、B组兔软骨标本中I L-1m R N A、TNF-αm R N A表达量明显降低（P＜0.05）。A组与B组比较，A组兔软骨标本中I L-1m R N A、TNF-αm R N A表达量减低（P＜0.05）。见表1。

表1　各组动物软骨标本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表达量的比较

3　讨论

细胞因子在K OA发病中的作用备受关注，其中I L-1、TNF-α在K OA发病中起着重要的介导作用［3-4］。研究认为I L-1、TNF-α可以促使破骨细胞分泌多种金属蛋白酶和其他酶类，从而引起软骨细胞及其基质、软骨下骨等结构降解和破坏，并可刺激成骨细胞样细胞增殖，导致关节骨、软骨增生性改变［5］。Y a n g L等［6］采用E LL S A对K OA患者膝关节关节腔内滑液测定发现，K OA患者滑液中I L-1β含量明显高于正常人。

西医对K OA的治疗没有特别有效的方法，药物口服治疗、关节内注射药物治疗、手术治疗等远期疗效不容乐观，而且有较多的副作用［7-11］。而基于现代医学的以促进软骨细胞和细胞外基质的生长为目的的方法，大多在临床上较难实施，价格也比较昂贵。近年来，中药对K OA治疗实验方面的研究越来越多。研究显示［12-18］，很多中成药或者经验方剂都可以从关节软骨、细胞因子、骨内压、自由基、细胞凋亡、降低血清透明质酸、滑膜、金属蛋白酶、雌激素等方面修复被破坏的软骨细胞，改善膝关节疼痛、恢复膝关节功能。骨痹止痛液是甘肃省中医院老一辈医务工作者在中医辨证论治、因地制宜的基础上，针对甘肃特殊的地理面貌、气候特征，集其临床经验而成。主要由制川乌、杜仲、独活、羌活、穿山甲、川芎、当归尾、肉桂等10余味药物组成，具有补肝肾、通经脉、散瘀血、止痹痛、祛风湿的功效［9］。本研究结果表明，骨痹止痛液可通过减低I L-1m R N A、TNF-α m R N A表达量来减少炎性反应、缓解疼痛症状，为临床使用骨痹止痛液提供了理论依据。

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Study on the In fluence of GuBi ZhiTong Liquid on Cartilage-related Factors Expressions of the Rabbitsw ith KneeOsteoarthritis

YAO Xingzhang1，LIXingyong2，LIXixiang1，PANG Zenglin2，MA Hu3，SONGMin4
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Gansu Province the Third People′s Hospital；3 Zhangjiachuan County TCM Hospital；4 Gansu University of Traditional Chinese Medicine

Objective：To study the influence of GuBi ZhiTong liquid on IL-1 and TNF-αin knee cartilage ofthe animalmodel.Methods：Thirty rabbitswere random ized into the group of GuBi ZhiTong liquid（A），the group of glucosam ine hydrochloride tablets（B）and themodelgroup（C），ten rabbitseach group.The rabbit received intragastric administration of GuBi ZhiTong liquid，glucosamine hydrochloride tablets and physiological saline for eight weeks consecutively after establishing the rabbitmodel w ith knee osteoarthritis.Morphological changes were observed by the naked eyes，the expressions of IL-1 and TNF-αin the cartilage were detected by HE staining and RT-PCR after the sampleswere taken in eightweeks.Results：The observation under the naked eyes：therewas no obviouschange in the comparison of A and B between before and aftermedication，the damage of jointcartilagewas severe in group C，even erosion.RT-PCR：when A and Bwere comparedw ith C，theexpressionsof IL-1mRNA and TNF-αmRNA lowered obviously in A and B（P＜0.05）.The expressionsof IL-1mRNA and TNF-αmRNA in the rabbitcartilageof A were lower than these of B（P＜0.05）.Conclusion：GuBi ZhiTong liquid could inhibit inflammatory reaction by reducing the expressionsof IL-1 and TNF-α，therefore，to relieve jointdamage.

GuBi ZhiTong liquid；osteoarthritis；knee；IL-1；TNF-α

R285.5

A

1004-6852（2016）04-0029-03

2015-10-21

姚兴璋（1987—），男，硕士学位，医师。研究方向：骨伤科疾病的中医药诊治。