南北疆部分地区马驽巴贝斯虫病血清学调查

李永畅,恩克博力德,哈西巴特,刘进,邓海峰,巴音查汗

(1.新疆农业大学动物医学院,新疆乌鲁木齐830052;2.巴音郭楞蒙古自治州和静县兽医站,新疆和静841300;3.新疆伊犁昭苏种马场/军马场,新疆伊犁835500)

南北疆部分地区马驽巴贝斯虫病血清学调查

李永畅1,恩克博力德2,哈西巴特2,刘进3,邓海峰3,巴音查汗1

(1.新疆农业大学动物医学院,新疆乌鲁木齐830052;2.巴音郭楞蒙古自治州和静县兽医站,新疆和静841300;3.新疆伊犁昭苏种马场/军马场,新疆伊犁835500)

为了解南北疆养殖马区域马匹感染驽巴贝斯虫情况,笔者采用竞争性酶联免疫吸附试验(cELISA)与血涂片镜检法相结合的试验法,对伊犁和巴州两地区马匹随机抽样(N=454),进行驽巴贝斯虫病血清学调查.经c-Elisa调查发现,驽巴贝斯虫状况(呈抗体阳性)总感染率为33.2%;其中北疆4县马驽巴贝斯虫感染率分别15.8%、7.9%、5.7%和2.6%;南疆和静县感染率为0.4%.经血液涂片检查发现极少部分抗体阳性全血发现虫体,其总阳性率6.6%.无临床症状的马匹血清抗体阳性率高说明该地区存在'传染源'、传播蜱虫,故加以防范.

马驽巴贝斯虫病;补体-酶联免疫吸附试验测定;血清学调查

驽巴贝斯虫(Babeisia caballi)病是一种蜱传性疾病,对中国乃至世界马属动物养殖业有着严重危害(Avarzed等,1997)[1];临床主要以发热、贫血、黄疸为主要症状(DeWaal,1990);广泛分布于热带、亚热带地区(Pres-ton,2001)[2].本病由蜱传播,呈全世界分布状态,如未进行准确的诊断和及时有效的治疗,往往可造成发病马属动物的死亡.一直以来,我国北方地区[3-5]关于新疆地区

马驽巴贝斯病的研究报道较少.为调查了解本地马属动物疫病区和马属动物养殖主要地区的马驽巴贝斯虫病流行和分布情况,对马驽巴贝斯虫病(采集的均是无临床症状的马匹血液样品)调查,此次运用了竞争ELISA(c-ELISA)试剂盒,对伊犁新源县、尼勒克县、昭苏县、特克斯县和巴州和静县疫区马匹进行了血清学抽样调查,为当地马属动物梨形虫的综合防治奠定基础.

1　材料与方法

1.1调查时间和对象2013年5月至2014年4月,分别对伊犁新源、尼勒克、昭苏、特克斯和巴州和静5个地方的放牧马匹(N=454)进行了抽样调查,并采集其样品进行马驽巴贝斯虫cELISA检测.

1.2血液样品来源血清:按常规方法,共采集454份血液样品(N=454),-20℃保存待用.

全血和血液涂片:对所有被检马匹(N=454)进行颈静脉采血,现场进行血液涂片、固定后带回实验室进行涂片染色,镜检.

1.3检测试剂和仪器马驽巴贝斯虫抗体c-ELISA试剂盒,均购自美国VMRD公司,P130111-001;KHB ST-360酶标仪.

1.4调查方法主要以临床观察和实验室检测为主,其中实验室检验以全血涂片镜检结合cELI⁃SA检测为主(均参照试剂盒说明书进行);涂片镜检步骤参考世界动物卫生组织(OIE)《陆生动物诊断试验和疫苗手册》[6]有关步骤进行.

2　试验结果

2.1马驽巴贝斯虫病抗体血清学(cELISA)检测结果

2.1.1北疆4县马驽巴贝斯虫病cELISA检查结果

采自于伊犁地区新源县、尼勒克、昭苏和特克斯,其采样马匹数分别为109匹、72匹、43匹,以及40匹.进行cELISA试验,其结果显示,新源、尼勒克、昭苏和特克斯,分别检出阳性率为66.1% (72/109)、50.0%(36/72)、60.5%(26/43)、37.5% (15/40),详见表1;本试验结果表明,驽巴贝斯虫病在伊犁地区感染较为严重.

表1　北疆伊犁部分地区马驽巴贝斯虫病血清学感染情况

2.1.2南疆和静县马驽巴贝斯虫病cELISA检查结果采自于南疆和静县,巴音郭楞乡、额勒再特乌鲁乡、巴伦台镇、巩乃斯乡和巴音布鲁克草原共190匹马匹,进行cELISA试验,其结果显示, 2份阳性血清,阳性率为1.1%(2/190),见表2.

表2　南疆巴州和静县马驽巴贝斯虫病血清学感染情况

经SPPS20.0软件分析所采样区域驽巴贝斯虫感染率发现,巴州和静县、伊犁新源县和尼勒克县所采集的样品驽巴贝斯虫阳性率差异极显著(P≤0.01),特克斯县呈差异显著(P≤0.05);而伊犁新源县,尼勒克县,昭苏县、特克斯县样品驽巴贝斯虫阳性率差异不显著(P>0.05).分析说明南北疆地区马驽巴贝斯虫感染存在差异性.

2.1.3马驽巴贝斯虫抗体阳性率强度分析根据c-ELISA试剂盒说明书,运用SPPS20.0软件统计数据,计算其阴阳性判定标准;其阴性平均值为0.421,即OD值小于0.421为驽巴贝斯虫病阳性, OD值大于0.421则为驽巴贝斯虫病阴性.

2.1.4不同马场(群)B.caballi感染情况调查结果

通过cELISA方法对采集的33个不同放牧马群进行马驽巴贝斯虫病流行病学调查分析.结果表明,马驽巴贝斯虫感染率最高达100%,感染率最低为0%,不同马群B.caballi感染率差异极显著(P<0.01).按照感染率的范围将马群分为5组,马群B.caballi感染率X≥40的为51.1%,未感染马群的为24.2%(表3).

表3　不同马群B.caba lli阳性率分布情况

2.1.5不同年龄马匹(群)B.caballi感染情况此次对巴州和伊犁部分地区不同年龄的马匹进行了驽巴贝斯虫抗体的感染情况,结果表明,各年龄段中4-6岁马感染较为严重,均高于其他3个年龄段的马匹.详见表4.

2.2马驽巴贝斯虫病cELISA检查结果与血液涂片检测结果对比经血液涂片检查发现极少部分抗体阳性全血发现血液型虫体,其总阳性率6.61%(30/454),伊犁新源、尼勒克、昭苏、特克斯以及巴州和静县,其平均感染率分别为12.8%(14/ 109)、5.56%(4/72)、18.6%(8/43)、12.5%(3/24)以及0(0/190),其结果与cELISA方法对比,发现其阳性感染率远低于血清学调查结果.

表4　不同年龄段马驽巴贝斯虫病感染情况

3　讨论与小结

有关马梨形虫病的传播媒介,两种巴贝斯虫分别在1901年和1903年被Theiler和Laveran命名为马巴贝斯虫(B.equi)和弩巴贝斯虫(B.caballi).我国已查明草原革蜱、森林革蜱和银盾革蜱等[6],驽巴贝斯虫一般从每年的2月下旬开始出现,3～ 4月达到高峰,5月下旬以后逐渐停止流行,病马体温升高,有黄疸现象,心力衰竭,严重者可死亡,该病严重地影响养马业和马术比赛的发展,因此,美国、加拿大、澳大利亚、日本等世界上许多国家都十分重视本病的防控工作,新疆伊犁河谷地区以及巴州地区等主要养马区域防治本病刻不容缓.

2013年至2014年分别对新疆巴州和伊犁部分地区进行了驽巴贝斯虫病血清学调查.结果表明,驽巴贝斯虫病在伊犁地区感染较为严重,经SPPS20.0软件分析,巴州和静县驽巴贝斯虫感染与伊犁新源县,尼勒克县差异极显著(P≤0.01),与特克斯县差异显著(P≤0.05).而伊犁4县之间驽巴贝斯虫感染率差异并不显著(P>0.05).分析说明南北疆地区马驽巴贝斯虫感染存在差异性,而伊犁各地方之间差异不显著.在对不同年龄马匹马驽巴贝斯虫感染情况调查中发现,被检1-3岁马驹中感染率为27.3%、均低于4-6岁、7-9岁以及10岁以上年龄马匹,这可能与幼驹的母源抗体或未接触传播蜱等原因有关;经SPPS20.0软件分析,各年龄阶段差异不显著(P>0.05).血液涂片检查其结果与cELISA方法对比,发现其阳性感染率远低于血清学调查结果.这可能与马匹感染驽巴贝斯虫后,大多呈隐性感染或慢性携带虫体产生相应抗体,从而其血清学检测为阳性,而大多血液涂片为阴性.本次检测抗体阳性马的血涂片中未发现虫体和未出现任何临床症状,这结论与Avarzed A[1]的"马耐过马驽巴贝斯虫病后带虫免疫可长达7年之久"相一致.可以初步认为上述抗体阳性马属动物可能曾经感染过马驽巴贝斯虫.

[1]Avarzed A,De Waal D T,Igarashi I,et al.Prevalence of equine piroplasmosis in central Mongolia[J].Vet Res,1997,64:141-145.

[2]Preston P M.Theileriosis.In:Service MW(ed)Encyclopedia of ar⁃thopod-transmitted infections of man and domestic animals[M]. CABI Wallingford,2001:487-502.

[3]许应天,梁晚枫,宋建臣,等.用EMA-1基因重组蛋自对马巴贝斯虫病的血清学调查[J].动物医学进展,2003,24(6): 108-109.

[4]Andv Alhassan,Wilawan Ptnnidontning,Masashi Okatnttra,et al.Developtnent of a single-round and multiplex PCR method for the simultaneous detection of Babesia caballi and Babesia equi in horse blood[J].VetParasi,2005,129(1-2):43-49.

[5]沈丹,薛红,张海明,等.广州及其周边地区马梨形虫病血清流行病学调查[J].广东畜牧兽医科技,2012,37(5):17-19.

[6]李德昌,陈启军.我国马梨形虫病及其传播者一蜱的地理分布[J].中国人民解放军兽医大学学报,1994,6(14):202-206.

The Serological survey of Babesia caballi in part Southern and Northern of Xinjiang

LI Yong-chang1,Enkebolide2,Haxibate2,LIU Jin3,DENG Hai-feng3,Bayinchahan1
(1.Xinjiang Agricultural University School of Medicine,Urumqi 830052,China;2.Bayinguoleng Mongol Autonomous Prefecture and static County Veterinary Station,Hejing 841300,China;3.Yili Zhaosu stud farm/horse farm,Yili 835500,China)

In the present study,the authors used the Combination of competitive enzyme-linked immunosorbent assay(cELI⁃SA)test and blood smear to analyze the horses that might be infected with Babesia caballi in the southern and northern regions, Xinjiang.A total of 454 samples were random ly collected in those areas.The total infection rate confirmed by cElisa was 33.2%,and the Babesia caballi infection rates were 15.8%,7.9%,5.7%and 2.6%in 4 counties in the northern state,respectively,and thein⁃fection rate was 0.4%in Hejing county from the southern region.The total positive blood smear rate was 6.6%.Some horses were an⁃tibody-positive,but had no clinical symptoms,suggesting that there exists'source of infection'.

Babesia caballi;cElisa;antibody detection

Bayinchahan

S852.71

A

0529-6005(2016)02-0006-03

2014-10-31

国家自然科学基金委-NSFC-新疆联合基金(U14 03282)

李永畅(1991-),男,硕士生,主要从事动物寄生虫病研究,E-mail:1121434514@qq.com

巴音查汗,E-mail:bynch@hotmail.com