氨基酸自动分析仪测定燕窝氨基酸组成

◎黄永连，陈晓嘉，韩秋珍（1.广东省食品工业研究所，广东 广州 510308；2.广东省质量监督食品检验站，广东 广州 510308）

氨基酸自动分析仪测定燕窝氨基酸组成

◎黄永连1，2，陈晓嘉1，2，韩秋珍1，2
（1.广东省食品工业研究所，广东 广州 510308；2.广东省质量监督食品检验站，广东 广州 510308）

本文通过盐酸水解法处理燕窝样品，通过日立L-8900氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量，分析不同燕窝中氨基酸的含量及其组成。结果显示：干燕窝的氨基酸总含量大概在43 g/100 g～49 g/100 g，新鲜的冷冻燕窝在8 g/100 g左右，燕窝中氨基酸组成相对稳定，其氨基酸比值的极差均小于1.0％。因此，氨基酸含量和氨基酸比值可为建立系统的氨基酸监测技术体系提供理论依据。

燕窝；氨基酸；氨基酸自动分析仪

多年以来，燕窝一直被认为是高档滋补品，在一些燕窝出产地区，由于对燕窝的采摘，造成金丝燕濒临灭绝，加上现在环境破坏，燕子种类和数量都在减少，燕窝产量也就越来越少，物以稀为贵，造成燕窝价格高，为了牟取更多利益，有些商家在燕窝中掺杂使假、以次充好，使燕窝质量参差不齐，给市场和消费者造成了一定的混乱［1-4］。因此，有必要建立一个有效的手段对燕窝品质进行监控。

由于氨基酸是组成蛋白的基本单位，相同类型的物质蛋白和氨基酸具有相似性，通过检测燕窝中的氨基酸，分析其中的规律建立质控的方法。氨基酸自动分析仪测定不同产地燕窝中氨基酸组成的方法的研究，本法操作简单、灵敏度高、专一性强，可适用性强［5-7］。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂

日立L-8900氨基酸自动分析仪、AG204电子天平、HHS-2电热恒温水浴锅以及电热恒温干燥烘箱等。浓盐酸、苯酚、茚三酮等：均为分析纯。

1.2色谱条件

色谱柱规格：4.6×60 mm，填料为3 μm磺酸型阳离子树脂分离柱，泵1流速0.40 mL/min，泵2流速0.35 mL/min，柱温57 ℃，检测器温度135 ℃，检测波长：第一通道570 nm，第二通道440 nm，进样量20 μL，每个样品分析时间约53 min。

1.3实验方法-氨基酸的测定

（1）样品前处理。准确称取0.5 g（精确至0.000 1 g）燕窝样品于水解管中，加6 mol/L盐酸10～15 mL（视试样蛋白质含量而定），加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5 min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 Pa），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复3次后，在充氮气状态下封口，将已封口的水解管放在（110±1）℃的恒温干燥箱内，水解22 h后，取出冷却。

打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50 mL容量瓶内用去离子水定容。吸取滤液2 mL于50 mL烧杯中，水浴蒸干，残留物用1～2 mL水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用10 mL pH 2.2的缓冲液溶解，混匀压滤，供仪器测定用。

（2）定量分析。准确吸取0.200 mL混合氨基酸标准，用pH 2.2的缓冲液稀释到5 mL，此标准稀释液浓度为2.0 nmol/20 μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样测定液的氨基酸含量。

2 结果与分析

2.1标准曲线绘制

精确吸取18种氨基酸混合标准溶液（2.5 μmol/mL）20、40、80、160 μL和320 μL分别加入到5 mL容量瓶中，用0.02 mol/L盐酸溶液定容至刻度，氨基酸分析仪分析，以峰面积和浓度绘制标准曲线可知：以蛋氨酸（Met）为例，线性回归方程y=1.5×106x+15 848；相关系数：R2=1.000 0。其他16种氨基酸相关系数R2均在0.999 0～1.000 0。在氨基酸浓度为0.2～3.2 nmol/20 μL范围内，氨基酸的质量浓度与峰面积之间具有良好的线性关系，其最低检出限为10 pmol（见图1）。

图1　蛋氨酸（Met）浓度与峰面积曲线图

2.2仪器精密度

配制氨基酸标准溶液2.0 nmol/20 μL，连续进样6次。峰面积RSD％均≤1.02％，符合仪器要求。

2.3试验方法精密度

取适量的燕窝样品，按1.3的方法处理，分别测定其氨基酸的含量，结果见表1。

表1　精密度实验表

2.4燕窝中氨基酸的分析研究

先对燕窝样品进行酸水解，再通过氨基酸自动分析仪对天冬氨酸（Asp）、苏氨酸（Thr）、丝氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、脯氨酸（Pro）、甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Try）、苯丙氨酸（Phe）、赖氨酸（Lys）、组氨酸（His）和精氨酸（Arg）等16种氨基酸进行测定，并算出氨基酸总量。图中VIS2（440 nm）用于检测脯氨酸，VIS1（570 nm）用于检测除脯氨酸以外的其他氨基酸（见图2和图3）。

图2　18种氨基酸混标的分离色谱图

图3　燕窝中各氨基酸的分离色谱图

在图2中，将原装氨基酸液体混标稀释后直接上机测定，可使其中的18种氨基酸（包括NH3）在32 min内得到十分理想的分离效果。在图3中，燕窝经盐酸水解后，其待测液中几乎没有杂质干扰，且各氨基酸的峰形良好，出峰时间与峰形与标准均较一致，且各种氨基酸的分离效果良好，说明此法可以较准确地获得各种水解氨基酸含量。利用氨基酸自动分析仪对盐酸水解后的8个样品进行分析测定，对其获得的结果进行整理，得到燕窝中各种氨基酸含量占氨基酸总量的比值及比值范围，干燕窝的氨基酸含量大概在43 g/100 g～49 g/100 g，新鲜的冷冻燕窝在8 g/100 g左右。在各氨基酸组分中，天冬氨酸的含量最高，约占总量的11％；蛋氨酸的含量最低，约占0.8％；其他氨基酸的含量均在3％～9％的范围里［5］（见表2和表3）。

表2　燕窝样品中各氨基酸含量及总量表

表3　燕窝样品中各氨基酸含量占氨基酸总量的比值及范围表

3 结论

干燕窝的氨基酸总含量大概在43～49 g/100 g，新鲜的冷冻燕窝在8 g/100 g左右，因此可以通过检测燕窝中氨基酸的含量初步判断燕窝中是否添加非蛋白成分，过低或过高的含量都说明存在异常情况。燕窝中各氨基酸比值的极差均小于1.0％，说明燕窝中氨基酸组成相对稳定。因此可以根据燕窝中各氨基酸的比值判断燕窝中是否添加其他氨基酸或者蛋白质成分。

［1］中华人民共和国卫生部.GB/T 5009.124-2003 食品中氨基酸的测定［S］.北京：中国标准出版社，2003.

［2］冯志强，周兴起，庄俊钰.氨基酸分析仪测定含乳饮料中游离甘氨酸的方法研究［J］.现代食品科技，2007，23（7）：89-91.

［3］王洪健，周兴起，冯志强，等.氨基酸自动分析仪测定食品中牛磺酸的方法建立［J］.现代食品科技，2012，28（3）：348-350.

［4］林洁茹，周 华，赖小平.燕窝研究概述［J］.中药材，2006，29（1）：85-90.

［5］朱春红，雍 韦，徐 厉，等.燕窝真假鉴定技术研究［J］.中国食品卫生杂志，2007，19（3）：206-208.

［6］冯志强，许银叶，黄永连，等.氨基酸自动分析仪测定胶原蛋白保健品中羟脯氨酸的含量［J］.食品工业，2014，35（5）：248-250.

［7］林 丹，庄俊钰，黄永连，等.白燕窝的氨基酸指纹图谱构建及识别研究［J］.食品工业，2014，36（7）：269-272.

Comparative Studies of Protein and Amino Acid Composition in the Cubilose

Huang Yonglian1，2， Chen Xiaojia1，2， Han Qiuzhen1，2
（1.Guangdong Food Industry Institute， Guangzhou 510308， China；2.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station， Guangzhou 510308， China）

This article through the hydrochloric acid hydrolysis method to deal with samples of the cubilose by Hitachi L-8900 automatic amino acid analyzer to determine the amino acid content， analysis of different amino acid content in the cubilose and its composition. The res μLts showed that the total amino acid content of dry cubilose around 43 g/100 g ～49g/100 g， fresh frozen cubilose is controlled in 8 g/100 g，cubilose is relatively stable， the amino acid composition of the amino acid ratio， the poor are less than 1.0％. Therefore， the amino acid content and amino acid ratio can provide theoretical basis for the establishment of the system of amino acid monitoring technology system.

Amino acid； Protein； Cubilose

TS252.7

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.12.036