CD24蛋白表达在术后放疗宫颈癌患者预后中的意义

周发为，杨年红，游文忠（湖北民族学院附属民大医院.检验科，.妇科，.病理科，湖北 恩施 445000）

CD24蛋白表达在术后放疗宫颈癌患者预后中的意义

周发为1，杨年红2，游文忠3
（湖北民族学院附属民大医院1.检验科，2.妇科，3.病理科，湖北 恩施 445000）

目的评价CD24蛋白表达在术后放疗宫颈癌患者中的预后意义。方法免疫组织化学法检测140例术后放疗的宫颈癌患者癌组织中CD24蛋白的表达情况。结果59例（42%）宫颈癌患者中CD24蛋白表达阳性，单因素分析表明，CD24阳性表达与局部区域无失败生存率（P=0.022）、无远处转移生存率（P=0.000）和总生存率（P=0.005）呈显著相关性。多元回归分析发现CD24阳性表达与无远处转移生存率（P=0.025）和总生存率（P=0.045）呈显著相关性。单独R T组CD24表达与LR FFS（P=0.020）呈显著相关性，CR T组CD24表达与DMFS（P=0.000）呈显著相关性。结论CD24表达是术后放疗宫颈癌患者的独立预后标志物，且在术后辅助CR T和单独R T治疗中预后意义不同。制定宫颈癌患者个性化治疗方案需参考患者CD24表达情况。

宫颈癌；放疗；化疗；手术；CD24

宫颈癌是全球女性第2大最常见的恶性肿瘤，其治疗方案主要是外科切除结合放疗（radiotherapy，RT）和放化疗（chemoradiotherapy，CRT）[1]。尽管子宫切除术能够控制盆腔疾病进展，提高患者生存率，但仍有难以治愈的病例，出现局部复发和或远处转移，导致患者死亡。因此，早期筛选难以治愈宫颈癌患者，并进行针对性处理，这对宫颈癌治疗具有十分重要的意义。p53状态、血管内皮生长因子表达、人乳头状瘤病毒DNA状态、c-Met/HGF受体过表达、环氧合酶-2过表达、磷酸化AKT表达、肿瘤内氧化（tumor oxygenation）状态和低氧诱导因子1α等因素均与宫颈癌预后密切相关[2-4]。

CD24最初被认为是人体内连接糖基化磷脂肪酰肌醇的B细胞相关抗原，也被用作B细胞和胸腺细胞标志物。随后研究发现CD24在卵巢癌、食道癌、结肠癌、胆管癌、肺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、子宫内膜癌和乳腺癌等多种人类癌症中异常表达，且与患者生存率较短相关[5-6]。Kwon等[7]研究表明，CD24蛋白表达是单独接受根治性放疗的子宫颈鳞状细胞癌（cervical squamous cell carcinoma，CSCC）患者无远处转移生存率（distant metastasis-free survival，DMFS）的独立预后因子。但目前尚未见CD24蛋白表达在术后放疗的宫颈癌患者预后中意义的研究报道。

1　资料与方法

1.1研究对象

2005年1月-2012年12月间在湖北民族学院附属民大医院住院治疗的早期宫颈癌患者177例。患者行根治性子宫切除术后进行RT或CRT治疗。37例患者石蜡块因保管不善而不能使用，其余140例患者组织均被纳入本次研究。所有患者均行根治性子宫切除术及双侧盆腔淋巴结清扫术。术后54例患者(39%)接受CRT，86例患者(61%)接受RT治疗（见表1）。

1.2术后治疗

子宫切除术后，所有患者均接受全盆腔放疗（whole pelvic radiotherapy，WpRT）。WpRT采用盆腔四野(前/后及左/右野)盒式照射，共照射25～28次，总剂量45.0～50.4Gy。盆腔淋巴结转移、切缘癌阳性、宫旁受累和肿块直径大的患者接受辅助化疗。54例接受CRT的患者中，15例在RT过程中每周服用顺铂，连续6个疗程；17例每3周服用氟尿嘧啶和顺铂，持续3个疗程；22例在RT治疗前每4周服用氟尿嘧啶加环磷酰胺，持续3个疗程。

1.3免疫组织化学

CD24鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，免疫组织化学Sp试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用辣根-过氧化酶连接（Sp二步法）法对140例宫颈癌组织进行免疫组织化学检测，DAB免疫组织化学显色试剂盒显色。CD24一抗稀释浓度为1∶50，以PBS代替1抗作为阴性对照，以已知阳性宫颈癌切片为阳性对照。以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞。按照细胞着色强度和阳性细胞数建立评定方法，随机计数5个高借视野，每例标本至少评价1000个细胞，染色强度：轻度着色1分，中度着色2分，强染色3分，阳性细胞<10%为1分；l0%≤阳性细胞<50%为2分；50%≤阳性细胞<80%为3分；≥80%为4分。将染色强度与阳性细胞数比率相乘得到每个病例染色的总分，总分1~3分为阴性，总分4~12分为阳性。

表1　子宫切除术后CRT治疗组和RT治疗组患者一般资料

1.4统计学方法

使用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，χ2检验或Fisher精确检验计算统计显著性。数据用均值±标准差（±s）表示，独立样本t检验或Mann-WhitneyU检验比较组间平均值差异。局部复发是指局部或区域性复发和/或因肿瘤而死亡。Kaplan-Meier法预测生存率，并使用时序检验法对数据进行比较。所有统计均为双侧检验，P<0.05为有差异统计学意义。

2　结果

2.1免疫组织化学结果

140例宫颈癌患者中，59例(42%)患者CD24阳性表达（图1）。CD24表达与宫旁受累（P=0.022）及盆腔淋巴结转移（P=0.031）显著相关，而与患者年龄（P=0.473），肿瘤直径（P=0.582），FIGO分期(P= 0.367)，切缘受累（P=0.266）或淋巴管浸润（P= 0.315）无相关性（见表2）。

图1　CD24蛋白在宫颈癌组织中的表达 （×100）

2.2患者生存率

表2　不同临床特征CD24表达阳性率的比较　例（%）

表3　宫颈癌患者预后影响因素的单因素分析

随访期间共16例患者死亡（平均84.1月；范围14～161个月）。9例(6%)患者局部复发，20例患者远处转移（14%）。10年局部区域无失败生存率（improve locoregional failure-free survival，LRFFS）、DMFS率和总生存率（overall survival，OS）分别为93%、84%和86%。宫旁受累（P=0.000）、切缘（P= 0.001）和CD24阳性（P=0.022）与LRFFS呈显著相关性。宫旁受累（P=0.000）、淋巴管浸润（P=0.013）、盆腔淋巴结转移（P=0.000）及CD24阳性（P=0.000）与DMFS显著相关。宫旁受累（P=0.011），盆腔淋巴结转移（P=0.021）及CD24阳性（P=0.005）与OS呈显著相关性（见表3）。Cox多元回归分析表明CD24阳性与DMFS（P=0.025）和OS（P=0.045）呈显著相关性，但CD24阳性与LRFFS（P=0.253）之间无相关性（见表4）。

2.3CD24蛋白表达在不同术后治疗方式患者中预后价值的比较

根据术后治疗方式（CRT与单独RT）将患者分为两组。CRT组中26例（48%）患者CD24阳性表达，单独RT组中33例（38%）患者CD24阳性表达，CRT组和单独RT组间CD24表达差异无统计学意义（P=0.254）。Kaplan-Meier生存曲线分析表明，CRT组CD24表达与DMFS（P=0.000，图2A）呈显著相关性，但与LRFFS（P=0.442）无相关性；单独RT组CD24表达与LRFFS（P=0.020，图2B）呈显著相关性，而与DMFS（P=0.527）无相关性。

表4　COX多元回归分析影响宫颈癌患者预后的因素

图2　CD24蛋白表达与不同术后治疗方式患者生存期的关系

3　讨论

宫颈癌根治术是早期宫颈癌治疗的首选方法，根治术后患者预后与淋巴结转移、手术切缘癌阳性、宫旁受累、淋巴管浸润、间质浸润深度和肿瘤大小等因素有关[8]。研究证明与术后无进一步治疗或单独RT治疗相比，辅助RT和CRT可以改善术后预示预后不佳患者局部控制和生存率[9]。RT疗法联合顺铂为主的化疗可以明显改善切缘癌阳性及盆腔淋巴结转移患者无进展生存时间和总体生存时间，在宫旁受累的高风险患者中尤为明显。但即使经术后辅助治疗，仍有约16%的患者发生局部和远处复发。研究表明，宫旁受累和切缘状态是宫颈癌局部复发和盆腔淋巴结远处转移的重要预后因素。

目前已经发现多种与宫颈癌患者预后有关的标志物。CD24最初被认为是人体内联接糖基化磷脂肪酰肌醇的B细胞相关抗原，也被称为p选择素配体，主要表达于血小板和内皮细胞上。在多种人类肿瘤中，CD24呈异常高表达，与患者存活时间较短有关。CD24/p选择素结合通路在肿瘤细胞扩散中非常重要，可以促进血小板和内皮细胞相互作用[10]。CD24表达的肿瘤细胞更容易2次扩散，形成血小板活化血栓，或通过p选择素黏附到内皮细胞[11]。

多因素分析表明，行子宫切除术的宫颈癌患者CD24表达与远处转移有关，但与局部复发不相关。本实验发现CD24表达与宫旁受累和盆腔淋巴结转移显著相关，提示CD24表达可能与局部侵袭和远处转移都有关。Choi等[12]指出CD24高表达和缺少顶端定位分布是尿道癌患者间质浸润和肿瘤等级较高的标志。Chou等[13]表明细胞质CD24表达与弥漫型胃癌侵袭性和较差预后有关。

此外，本研究还分析了CD24表达在不同术后治疗方式患者中预后价值的比较。Kaplan-Meier分析表明CRT治疗组CD24表达与DMFS呈显著相关性，但与LRFFS无相关性。而单独RT组CD24表达与LRFFS呈显著相关性，但与DMFS无相关性。淋巴结转移、宫旁受累或切缘癌阳性患者通常使用术后辅助CRT疗法。本组CRT治疗患者宫旁受累及盆腔淋巴结转移发生率更高，且不良预后因素比单独RT组更多。癌症转移需要肿瘤细胞最初侵入间质，渗透至脉管，然后黏附到靶器官等多个步骤。研究发现表明CD24表达涉及宫颈癌进展的多个步骤，包括侵袭发生和远处转移。此外，CD24也是单独RT组LRFFS预测因子，或CRT组DMFS预测因子，但每组中都有一些例外。因此，虽然这些研究结果差异明显，但在应用到临床实践之前仍需进行大样本研究。

总之，CD24表达是术后放疗宫颈癌患者的独立预后标志物，本研究揭示了CD24表达在术后辅助CRT和单独RT治疗组中不同的预后意义。因此，根据CD24表达情况对患者进行分组，并制定针对性治疗方案可能具有重要临床意义。

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（张西倩编辑）

Prognostic significance of CD24 protein expression in cervical carcinoma patients treated with adjuvant radiotherapy after radical hysterectomy

Fa-wei Zhou1，Nian-hong Yang2，Wen-zhong You3
（1.Department of Clinical Laboratory，2.Department of Obstetrics and Gynecology，3.Department of Pathology，Minda Hospital，Hubei Institute for Nationalities，Enshi，Hubei 445000，China）

Objective To evaluate the prognostic significance of CD24 protein overexpression in patients treated with post-operative radiotherapy（RT）after surgery.Methods We determined the CD24 expression status of 140 patients with cervical carcinoma treated with RT alone or with chemoradiotherapy（CRT）after radical hysterectomy procedures.Results CD24 expression was detected in 59 patients（42%）and was significantly associated with locoregional failure-free survival（LRFFS）（P=0.022），distant metastasis-free survival（DMFS）（P=0.000），and overall survival（OS）（P=0.005）.In the multivariate analysis，CD24 positivity was also significantly associated with DMFS（P=0.025）and OS（P=0.045）.CD24 expression was associated with DMFS（P=0.000）in the CRT group. However，CD24 expression was associated with LRFFS（P=0.020）in the RT alone group.Conclusions CD24 expression is an independent prognostic marker in patients with cervical squamous cell carcinoma，even with post-hysterectomy adjuvant treatment.This study revealed a different prognostic role for CD24 expression in adjuvant CRT and RT alone treatment groups after surgery.New therapeutic strategies targeting CD24 expression stratified by subgroups might have important clinical implications.

cervical carcinoma；radiotherapy；chemotherapy；surgery；CD24

R 737.33

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.04.008

1005-8982（2016）04-0039-05

2015-10-12

游文忠，E-mail：744377523@qq.com，Tel：18907263868