双色茉莉的组培快繁体系建立

刘敏杰　刘柱明

摘要：以双色茉莉嫩枝茎段为外植体，采用不同的灭菌处理，不同的诱导和生根培养基，进行最佳培养基配方及培养程序的研究。结果表明：灭菌处理以75%乙醇浸泡10s后，再在O.1%升汞溶液中浸泡3min为最佳；腋芽诱导的适宜培养基是MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；诱导生根的适宜培养基为1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭；试管苗移栽基质以蛭石1份+珍珠岩1份+园土1份成活率最高，可达95%。

关键词：双色茉莉；灭菌方法；组织快繁；培养基

双色茉莉又名鸳鸯茉莉，是茄科常绿矮灌木。花朵初开为蓝紫色，渐变为雪青色，最后变为白色，由于在同株上能同时见到蓝紫色和白色的花，故名双色茉莉。其花期长，花香浓郁，盆栽可点缀庭院和居室，片植色彩斑斓，具有广阔的市场前景。目前双色茉莉多采用扦插和压条的方法繁殖，但该方法容易携带病毒，使植株生长不良，且繁殖系数小，成苗慢。利用组培技术可以优质、快速地生产大量的双色茉莉苗来满足市场需求。

1 材料与方法

1.1 材料

2014年4月22号在信阳绿欣花市购买的2～3年生双色茉莉盆栽。从生长旺盛、无病虫害的新生嫩枝上剪取带顶芽或腋芽的茎段，作为外植体培养材料。

1.2 方法

1.2.1 外植体的灭菌。剪去外植体茎段叶片，留叶柄基部，先用自来水冲洗3 min，再用洗洁精漂洗5 min，后用流水冲洗30 min。将清洗干净的茎段放在烧杯中转入超净工作台。然后用75%乙醇浸泡10、20s做表面消毒，无菌水冲洗4次，再移入0.1%的升汞溶液中，分别浸泡1、3、5min。后用无菌水浸泡2 min，并冲洗3次，用灭菌滤纸吸干水分备用。将灭菌好的外植体用解剖刀切成1cm大小的茎段，接种到初代培养基上，初代培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。每个处理分别接种10瓶，每瓶接种3个外植体。定期观察并记录外植体污染情况和外植体成活率。

1.2.2 腋芽诱导。以灭菌效果最佳的处理进行外植体灭菌，切取带腋芽的茎段1cm大小，接种到下列培养基中：A₁：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L；A₂：MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；A₃：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.1mg/L；A₄：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L；A₅：MS+6-BA 2.5mg/L+NAA 0.1mg/L；A₆：MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.1 mg/L。每种处理接种10瓶，每瓶接种3个外植体，定期观察芽的诱导情况。

1.2.3 继代培养。将诱导出的芽丛，转接于MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中进行增殖培养。

1.2.4 生根培养。选取2cm以上，有3片完整叶片的无根苗转接到下列培养基中培养生根：B₁：1/2 Ms；B₂：1/2MS+NAA 0.5mg/L；B₃：1/2MS+NAA 1.0mg/L；B₄：1/2MS+NAA 2.0mg/L；B₅：1/2 MS+NAA 3.0mg/L，并在B₃、B₄、B₅培养基中各添加浓度为0.2%的活性炭。每种处理接种10瓶，每瓶接种3株，20d后，统计生根率。

以上MS培养基中蔗糖含量为30g/L，1/2 MS培养基中蔗糖含量为20g/L，琼脂含量均为8g/L，pH值5.8。培养温度：25±2℃，光照强度：1500～2000Lx，光照时间：12～14h/d。

1.3 驯化移栽

当试管苗长至3～4cm高，根长1cm以上时，打开瓶口炼苗5～7d。将经过锻炼的试管苗轻轻取出，用自来水冲洗掉根部的培养基，分别栽植于下列基质中：C₁：蛭石；C₂：珍珠岩；C₃：细沙；C₄：园土；C₅：蛭石1份+珍珠岩1份+园土1份，盖上塑料薄膜，温度控制在25%左右，保证80%以上的相对湿度。30d后，统计移栽苗成活率。

2 结果与分析

2.1 不同灭菌方法的灭菌效果

20d后的观察显示（表1），延长乙醇浸泡时间，对降低外植体污染率效果不明显，而增加升汞浸泡时间，明显减少了外植体的污染率。但是过长时间的升汞接触外植体，发现试验外植体皱缩，失去萌动力，后期褐化率也明显增加。这可能因汞离子具有很强的杀伤力和穿透力，容易杀死或损伤植物细胞，造成外植体成活率低，因此在控制污染发生的过程中，用升汞做灭菌处理的时间不宜过长，控制在3min左右为宜。

2.2 不同培养基激素组合对腋芽诱导的影响

外植体培养5～7天，茎段基部开始膨大，产生少量愈伤组织，腋芽也开始萌动。6种培养基均能诱导腋芽萌动，但腋芽生长情况有所差异（表2），在A₁、A₂、A₃培养基上腋芽萌动时间早，但数量少，苗细弱。在A₄：MS+1.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基上，芽萌动后直接分化丛生芽，苗健壮。A5、A6形成的丛芽时间短且数量多，但芽畸形、变异。可见培养基的成分直接影响外植体的萌动和分化。培养基的浓度不适合会导致新生芽矮小，还可能出现玻璃状苗。

2.3 生根培养

在培养基中加入活性炭可以显著促进生根量和根的长势，这可能与活性炭对有害酚类物质的吸附有关，同时活性炭所造成的暗环境也可能有利于根的发生和发育。从表3可以看出，B₁、B₂的根徒长且比较细弱，植株难以在移栽时正常生长，B₃、B₄、B₅的生根率都达到100%，且生根时间短，根数多。但以B₃：1/2MS+NAA1.0mg/L+0.2%的活性炭，生根效果最好，根粗壮且有根毛，最适合移栽。

2.4 生根苗驯化移栽

从表4可以看出，双色茉莉试管苗在所试5种栽培基质上，移栽成活率都很高。其中基质D₅的幼苗生长健壮，叶色嫩绿，成活率高达95%。

3 小结

（1）在植物组织培养过程中，要尽量降低污染率，同时还要尽可能减少消毒剂对外植体的伤害。双色茉莉外植体灭菌以75%的醇消毒10s，再配合0.1%的升汞溶液浸泡3min效果最好，可达80%。

（2）细胞分裂素6-BA能克服顶端优势，促进侧枝的萌发和生长，因而，嫩芽的繁殖主要是细胞分裂素影响的结果。生长素NAA最明显的作用是促进生长，但其促进作用因浓度而异，较低浓度促进生长，较高浓度抑制生长。外源激素6-BA和NAA的不同浓度对芽的诱导和生长影响十分显著。适宜芽诱导的初代培养基为MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；幼苗的最佳生根培养基为1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭。试管苗移栽基质以蛭石1份+珍珠岩1份+园土1份成活率最高，可达95%。

（3）通过组织培养可大大提高双色茉莉的繁殖速率，且生长健壮。

（收稿：2016-03-10）