玫瑰花的组织培养研究

闫钊

摘要：主要以甘肃徽县地区引进的良种“保加利亚”玫瑰作为研究对象进行试验，结果表明，3月中下旬、6月10～25日这两段时间最适宜采摘玫瑰外植体；枝条中部、上部这两个部位最适合建立无菌体系；最佳的外植体扩繁培养基是交互使用0.1mg/LI-BA+MS+1.0mg/L BA.0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA+MS、0.2mg/L NAA+1.0mg/L BA+MS这三种培养基，而1/2M5+0.8～1.0mg/LIBA培养基是最适合生根的。只要通过科学炼苗，玫瑰花的移栽成活率可以超过90%。

关键词：玫瑰花：组织培养：研究分析

玫瑰也被称为刺玫瑰，是一种蔷薇科蔷薇属植物，大概高2m左右的直立灌木，叶片像羽状，玫瑰枝干比较粗壮，大概有5～9枚小叶，整个形状为椭圆状倒卵形或者椭圆形。玫瑰中含有很多天然矿物质（108种），而且富含很多种天然维生素以及清毒养颜成分，还具有人体必需的18种氨基酸，另外玫瑰的药用价值也很高。因此玫瑰产业具有很好的发展前景，非常有必要探索玫瑰快速繁育技术，提高玫瑰组织培养效益的途径。

1 材料以及方法

1.1 研究试验材料

本次研究试验材料选自甘肃徽县地区从外引进的优良玫瑰苗，已经栽培了2年多。

1.2 试验方法

每个试验处理都采用单因子试验方法，各试验处理接种数量为10瓶，需要试验2次。具体的试验方法如下：①获得外植体。随机选取一些没有病虫害、健壮的玫瑰苗作为本次研究标的物，采用合理的杀菌脱毒处理培养措施后当作培养母株。外植体选择2015年抽生的腋芽饱满枝条或者3月中旬一直到7月下旬没有萌发的1年生枝条。②建立无菌体系。及时把采摘的外植体材料送回实验室，一定要将水分流失减少到最低限度，使材料保鲜，在流水状态下冲洗9～10min，将水分滤干之后再把多余的枝叶等去除，然后剪成一段长1～1.5cm，并且上面有1～2个芽的茎段或者茎尖，一定要注意下切口应该斜剪，上切口平剪，将其放置于无菌瓶中，然后放在无菌台上。进行接种前应该采用0.1%～0.2%HgCl₂溶液来浸泡材料，注意浸泡的时候千万不能随意晃动装有外植体的无菌瓶，从而确保能够完全消毒。消毒之后应该采用无菌水仔细冲洗7～8次，将材料表面上残留的HgCl₂溶液彻底消除，把水分滤干之后放在培养基上接种培养。③培养条件。选择在徽县苗木组培中心进行试验，调节光照强度为2000Lx，光照时间连续10～12h，培养室温度保持在21±2℃。选择的培养基应该添加葡萄糖20kg/L，琼脂5.5kg/L，培养基的pH值为5.9。

2 试验结果以及分析

2.1 外植体外部因素对于初代培养的主要影响

在3月5日～7月5日这段时间内，每隔5d在选定的玫瑰植株上采摘1次外植体，然后分别根据枝条上部、中部、下部进行相应的处理，放置在20kg/L葡萄糖+1.0mg/L BA+MS+琼脂5.5kg/L的培养基中接种进行初代培养，连续观察25d，并且详细记录。结果表明，3月中下旬、6月10日至25日这两段时间最适宜采摘玫瑰外植体，把这段时间采摘的外植体带回实验室后通过相应的杀菌处理进行初代培养之后，具有很高的新芽抽生率，而且建立无菌体系的难度相对比较小，其中枝条中部、上部最适合建立无菌体系，通常情况下枝条下部的芽抽生速度相对比较慢，同时也出现严重的污染。

2.2 愈伤组织诱导受到不同激素的影响分析

根据不同的组织把在初代培养基上生长比较良好的无菌苗接种在添加几种不同浓度激素的MS培养基中，连续观察30d，详细记录相关数据。具体见表1。

根据表1中的观察结果分析，愈伤组织自身的形态、质地对于器官发生部位及其能力具有决定性的作用，玫瑰茎尖组织、茎段组织在一定激素诱导下都可以生成愈伤组织，同时其周围会冒出健康小芽，但是不管添加什么激素，玫瑰叶片都无法诱导出愈伤组织。其次，如果培养基中没有添加激素，不管选用什么样的玫瑰组织都无法诱导产生愈伤组织。0.5mg/L NAA培养基、0.1mg/L2，4-D+1.0mg/L BA培养基诱导玫瑰愈伤组织的效果相对良好，假如用作芽子的大量扩繁，最好是采用0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA组合培养基。

2.3 芽分化以及增殖采用不同培养基的影响

在无菌条件下在培养皿中随机切取1.5cm长的茎段（带有叶芽）、生长健壮的无菌材料茎尖，将其放置在1.0mg/L BA+MS培养基中接种，连续观察10d后会发现开始萌芽，而且抽生出了新芽，待新芽生长到2cm，将其切下分别放置于1.0mg/L BA+MS+0.1mg/L2，4-D培养基（①）、1.0mg/L BA+MS+0.2mg/L 2，4-D培养基（②）、1.5mg/L BA+MS+0.1mg/L IBA培养基（③）、1.5mg/L BA+MS+0.5mg/L IBA培养基（④）、1.0mg/LBA+MS+0.2mg/L NAA 培养基（⑤）等几种培养基中进行培养，前提条件是其他条件相同，连续观察30d，详细记录结果，具体见表2。

从表2中分析可知，同等条件下，在相同时间内芽分化量较多，长势良好的培养基为①、③、⑤，虽然②号培养基的芽分化较大，长势也良好，但呈褐化；④号培养基芽分化量相对较少，而且芽长势细弱。为此，玫瑰继代增殖培养应该选择①号、③号、⑤号培养基，而且交互使用这3种培养基的话有助于壮苗。

2.4 试管苗炼苗移栽

把健壮芽苗随机切成2cm左右茎段（带腋叶）或者茎尖放置在不同培养基中培养，连续观察35d后发现没有激素的MS空白培养基无法诱导生根，培养基中IBA浓度相对较低的话，玫瑰生根率也相对比较低，但是超过某浓度值，会对玫瑰生根产生抑制作用，最佳的IBA浓度在0.8～1.0mg/L之间。试管苗生长至2cm，苗高3cm多，根数有2条，而且长势良好，叶片呈绿色的情况，在炼苗处理后就可以移栽。移栽的过程中一定要采用大量温水将生根苗根系上的培养基彻底冲洗干净，然后把玫瑰苗放在添加适量IBA溶液中可提高苗木移栽成活率。

3 结论

适当采用组织培养技术有利于玫瑰的快速繁育，建立玫瑰无菌体系的过程中一定要注意选择合适的初代培养时间以及最佳的外植体培养部位。试管苗移栽成活率主要和炼苗方法以及炼苗时间有关。玫瑰组织培养过程中很容易出现苗边叶黄化，不利于玫瑰组织快速繁育。发生玻璃化现象可能是因为培养瓶的湿度较高或者激素浓度过高。

（收稿：2016-03-24）