山杏和山丁子多酚的抗氧化活性研究*

付婷婷李　慧吴洪军胡　伟么宏伟**　李靖彤　孙德军

（1.黑龙江省林副特产研究所 省非木质林产品研发重点实验室，牡丹江　157011；2.黑龙江省烟草公司牡丹江烟草科学研究所，牡丹江　157011；3.黑龙江省林业科学院，哈尔滨　150081；4.哈尔滨烟叶公司绥化分公司，黑龙江　绥化　152000）

山杏和山丁子多酚的抗氧化活性研究*

付婷婷1李慧2吴洪军1胡伟1么宏伟1**李靖彤3孙德军4

（1.黑龙江省林副特产研究所 省非木质林产品研发重点实验室，牡丹江157011；2.黑龙江省烟草公司牡丹江烟草科学研究所，牡丹江157011；3.黑龙江省林业科学院，哈尔滨150081；4.哈尔滨烟叶公司绥化分公司，黑龙江绥化152000）

对山杏多酚、山丁子多酚的抗氧化活性的研究结果表明，2种多酚都具有一定程度的抗氧化活性，均呈剂量依赖性，且山丁子多酚的抗氧化能力略高于山杏多酚。

山杏；山丁子；多酚；抗氧化活性

多酚广泛分布在水果、蔬菜、谷类等植物组织中，是植物体内最丰富的次级代谢产物。研究发现，它具有抗氧化［1-2］、抗炎［3］、抗癌［4-5］、辐射损伤防护性［6］、降血糖、降血脂［7］、护色保鲜［8］等活性。

山丁子（Malus baccata），蔷薇科苹果属，主要在我国东北部大兴安岭地区分布，是一种来源丰富的野生植物资源，其富含多酚等多种植物次级代谢产物。山杏（Prunus sibirica）蔷薇科杏属植物，是我国北方重要的生态经济型树种，其杏仁广泛应用于面包、糖果、饮料等食品加工业，其果肉是杏仁加工过程中产生的剩余物。目前国内对植物多酚研究较多，苹果多酚、葡萄籽多酚是研究热点，关于山丁子与山杏多酚鲜有研究，关于二者多酚抗氧化活性对比的研究更是未见。

本试验研究了山杏多酚与山丁子多酚的抗氧化活性，对·OH、DPPH、·O2-的清除能力和对Fe2+的螯合能力4个指标分别进行了对比，以期为二者在食品行业上的应用提供理论依据。

1　材料与方法

1.1试验材料及仪器

山丁子，采自牡丹江市东京城，去柄，洗净，粉碎；山杏，采自牡丹江市，去核留肉，粉碎。取100 g粉碎后的山杏与山丁子果肉，分别浸泡于500 mL 80%（v/v）乙醇中超声15 min，45℃水浴提取2 h，提取物分别过滤，10 000 r/min离心10 min，收集上清。提取过程重复3次，分别合并提取物，浓缩至20 mL。浓缩提取物置于冰箱中保存备用。

试验试剂有：TBA、DPPH、EDTA，购自sigma公司；NADA NBT，购自北京索莱宝公司；H2O2、FeCl2，购自北京化工厂。

试验仪器与设备有：紫外可见分光光度计U-3010，日本HITACHI株式会社产品；涡旋混匀器HYQ-2121A，美国CRASTAL公司产品。

1.2试验方法

1.2.1·OH自由基清除活性测定方法

采用α-脱氧核糖氧化法［9］。分别取5、10、15、20、25 μL的山杏和山丁子多酚浓缩溶液，将FeSO4·7H2O（0.1 mL10 mM）、磷酸缓冲液（0.9 mL 0.1 mMpH为7.4）、α-脱氧核糖（0.5 mL 10 mM）、EDTA（0.1 mL 10 mM）和样品溶液在试管中充分混匀。添加H2O2（0.2 mL10 mM）反应开始，置于37℃浴中反应1 h。反应结束，添加TCA（1.0 mL 0℃2.8%），随后加入TBA（1 mL 1%）混匀，沸水浴反应20 min，冷却后于波长532 nm处测吸光值。·OH清除率的计算公式

式中，A0为空白对照的吸光值；A1为样品反应后的吸光值。

1.2.2DPPH自由基清除活性测定［10］方法

分别取5、10、15、20、25 μL的山杏、山丁子多酚浓缩溶液，将样品溶液加入到DPPH 95%乙醇（1.5 mL 0.l mM）中，混匀，室温下避光反应30 min，在517 nm处测定吸光值。DPPH清除率计算公式

式中，A0为空白对照的吸光值；A1为样品反应后的吸光值。

清除活性测定［11］方法

式中，A0为空白对照的吸光值；A1为样品反应后的吸光值。

1.2.4Fe2+螯合能力测定［12］

分别取5、10、15、20、25 μL的山杏和山丁子多酚浓缩溶液，反应混合物包括 45 μL 2 mM FeCl2、450 μL样品和1 815 μL蒸溜水。剧烈震荡混合物，于室温下放置30 min；30 min后，加入ferrozine（90 μL 5 mM）混匀，在562 nm处测定Fe2+-ferrozine复合物的吸光值。Fe2+螯合能力计算公式

式中，A0为空白对照的吸光值；A1为样品反应后的吸光值。

1.2.5统计分析

2　结果与分析

2.1山杏、山丁子多酚对·OH的清除活性

·OH是生物系统内活性最高的含氧自由基，它可以诱导邻近的大分子如蛋白质、脂类DNA等遭到严重破坏，引起老化和病变，所以清除·OH自由基是预防各种疾病的防御机制之一。如图1所示，山杏多酚和山丁子多酚均有清除·OH自由基的能力，二者对·OH自由基的清除率都呈剂量依赖性，且各浓度下山丁子多酚的清除率均高于山杏多酚。在山丁子多酚体积为50 μL时，·OH自由基清除率可以达到69%。在相同剂量水平下，山杏多酚对·OH自由基的清除率为60%。

2.2山杏、山丁子多酚对DPPH的清除活性

DPPH自由基是一种稳定的有机自由基，最大吸收波长为517 nm。由于其对低浓度的活性成分十分敏感，所以是应用在测定抗氧化活性方面的常用手段。本研究对山杏多酚和山丁子多酚的DPPH自由基清除活性进行了比较，研究发现，山杏和山丁子多酚都具有清除DPPH自由基的能力，且随着多酚溶液体积的增加清除率均增大（图2），清除能力排序：山丁子多酚＞山杏多酚。

图3　山杏、山丁子多酚对·O2-的清除能力

2.4山杏、山丁子多酚对Fe2+的螯合能力

Fe是生物体必需元素，但过量时是有害的。游离铁的毒性作用是其可通过Fenton反应催化产生自由基。所以，螯合Fe2+也是测试抗氧化能力的常用指标。如图4所示，山杏和山丁子多酚对Fe2+有较强的螯合能力，在多酚溶液体积为5、10、15 μL时，山杏多酚与山丁子多酚的螯合能力数值较接近，且在多酚浓度为25 mg/mL时，2种物质对Fe2+的螯合能力仍无差异。

图4　山杏、山丁子多酚对Fe2+的螯合能力

3讨　论

通过试验发现，2种多酚都具有一定的清除·OH自由基、DPPH自由基、·O2-自由基能力，并且都有能力螯合Fe2+离子。综合比较不难看出，山丁子多酚的抗氧化活性略高于山杏多酚。

［1］Tai A，SawanoT，Yazama F，et al.Evaluation ofantioxidant activity of vanillin byusingmultiple antioxidant assays［J］.Biochimica et Biophysica Acta（BBA）-General Subjects，2011，1810（2）:170-177.

［2］任飞，杜宏涛，张继文，等.柿子皮醇提物中多酚含量及其抗氧化活性［J］.西北农业学报，2011，20（4）:144-147.

［3］Lau F C，Joseph J A，McDonald J E，et al.Attenuation ofiNOS and COX2by blueberry polyphenolsismediatedthroughthe suppression of NF-kappa B activation［J］.Journal of Functional Foods，2009，1（3）:274-283.

［4］Kumar G，Dange P，Kailaje V，et al.Polymeric black tea polyphenolsmodulatethelocalizationandactivityof 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-mediatedkinasesin mouse skin:Mechanisms of their anti-tumor-promoting ction［J］. Free Radical Biologyand Medicine，2012，53（6）:1358-1370.

［5］Park H S，Park K I，Lee D H，et al.Polyphenolic extract isolated from Korean Lonicera japonica Thunb.induce G2/M cell cycle arrest and apoptosis in HepG2 Cells:Involvements of PI3K/Akt and MAPKs［J］.Food and ChemicalToxicology，2012，50（7）:2407 -2416.

［6］王清吉，王友绍，何磊，等.茶多酚和银杏叶有效成分的抗辐射作用研究［J］.核技术，2004，27（2）:148-150.

［7］王璐.山荆子多酚分离鉴定及对γ辐射诱导氧化损伤的防护作用［D］.哈尔滨:哈尔滨工业大学，2014.

［8］Hai ying Liu，Nongxue Qiu，Huihuang Ding，et al.Polyphenols contents and antioxidant capacity of 68 Chinese herbals suitable for medical or food uses［J］.Food Research International，2008，41（4）:363-370.

［9］Ren J，Zhao M，Shi J，et al.Purification and identification of antioxidant peptides from grass carp muscle hydrolysates by consecutive chromatography and electrospray ionization-inass spectrometry［J］.Food Chemistry，2008，108:727-736.

［10］Wu CH，Chen H M，Shiau CY.Free aminoacids and peptides as related to antioxidant properties in protein hydrolysates of mackerel（Scomber austriasicus）［J］.Food Research International，2003，36:949-957.

［11］Jeong J B，De Lumen B O，Jeong H J.Lunasin peptide purified from Solarium nigrum L.protects DNA from oxidative damage by suppressingthe generation ofhydroxyl radical via blockingfenton eaction［J］.Cancer letter，2010，293，58-64.

［12］Velika B，Kron I.Antioxidant properties of benzoic acid derivatives against Superoxide radical［J］.Free Radicals andAntioxidants，2012，2（4）:62-67.

［13］Er T K，Tsai S M，Wu S H，et al.Antioxidant status and superoxide anion radical generation in acute myeloid leukemia ［J］.Clinical Biochemistry，2007，40（13-14）:1015-1019.

［14］张苗.甘薯蛋白酶解肽的抗氧化及结肠癌活性研究［D］.北京：中国农业科学院，2012.

第1作者简介：付婷婷（1985-），女，助理研究员，研究方向：林产化学加工。

（责任编辑：潘启英）

Antioxidant Activity of Polyphenols from Prunus armeniaca and Malus baccata

FUTingting
（Heilongjiang Forest By-Product and Speciality Research Institute，Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Nonwood Forest Product Development，Mudanjiang157011）

The aim of this work was to study antioxidant activity of polyphenols which from Prunus armeniaca and Malus baccata.The results showed that they had antioxidant activity and the two were in dependent dose.The polyphenol of Malus baccata was slightly higher than Prunus armeniac's.Thereby provided the data support for the use of polyphenols from Prunus armeniaca and Malus baccata.

Prunus armeniaca；Malus baccata；Polyphenol；Antioxidant activity

S662.2，S662.9

C

1001-9499（2016）04-0060-04

*黑龙江省森林工业总局青年基金项目（sgzjQ2014002）；黑龙江省林业科学院青年基金项目201417

么宏伟（1981-），男，副研究员，研究方向：林产化学加工。

2016-06-30