HPLC法测定长春西汀原料的有关物质研究

张霞

（哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨150076）

HPLC法测定长春西汀原料的有关物质研究

张霞

（哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨150076）

建立高效液相色谱法测定长春西汀有关物质的方法.色谱柱C18柱（4.6×250 mm，5μm），流动相为乙腈-乙酸铵（0.2 mol/L）（55∶45），流速为1.0m L/min，进样量为20μL，检测波长为280 nm.结果表明，依据本法检测，长春西汀的线性关系良好，专属性强；精密度和稳定性良好.该方法准确、灵敏、专属性强，可用于长春西汀的检测.

长春西汀；有关物质测定；高效液相色谱法

长春西汀是由匈牙利GedeonRichter公司开发成功，1978年开始生产上市［1］，其化学名称为乙基阿朴长春胺-22-醋酸乙酯，分子式：C22H26N2O2，分子质量为350.46.长春西汀主要用于缺血性脑血管疾病的治疗和预防.本文参照英国药典2013年版质量标准对长春西汀原料进行有关物质方法学研究，为企业内控标准的制定提供依据.

1　仪器与试药

1.1仪器

日本岛津高效液相色谱仪（SPD-20A）

1.2试药

长春西汀原料药（生产厂家：东北制药集团股份有限公司，批号：140801、140901、141001）；长春西汀对照品（中国食品药品检定研究院 编号：100947）；杂质A对照品（USP药典对照品 编号：1714619）；杂质B对照品（USP药典对照品 编号：1714620）；杂质C对照品（USP药典对照品 编号：1714641）；杂质D对照品（USP药典对照品 编号：1714652）；乙腈（色谱纯）；乙酸铵（分析纯）；盐酸（分析纯）；氢氧化钠（分析纯）；过氧化氢（分析纯）；注射用水（哈尔滨三联药业股份有限公司）

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱（填充剂：十八烷基硅胶，4.6×250 mm，5μm）；流动相：乙腈：乙酸铵（0.2 mol/L）（55∶45）；流速：1.0 mL/min；进样量：20μL；检测波长：280 nm.

2.2供试品溶液的制备

精密称取长春西汀原料适量加注射用水溶解稀释制成质量浓度为0.1 mg/mL的溶液，混匀，作为供试品溶液.

2.3对照溶液的制备

精密称取长春西汀对照品加流动相溶解稀释制成每1 mL含长春西汀对照品0.001 mg的溶液.精密称取杂质A对照品加流动相溶解稀释制成每1 mL含杂质A对照品0.006 mg，精密称取杂质B对照品加流动相溶解稀释制成每1 mL含杂质B对照品0.005 mg的溶液，精密称取杂质C对照品加流动相溶解稀释制成每1 mL含杂质C对照品0.005 mg的溶液，精密称取杂质D对照品适量加流动相溶解稀释制成每1 mL含杂质D对照品0. 005 mg的溶液，作为对照品溶液.

2.4专属性试验

分别取长春西汀原料适量置100 mL容量瓶中，加流动相适量溶解照下述方法试验：1）加入盐酸溶液（1.0 mol/L）2 mL后，放置4 h，中和，定容，摇匀，作为酸破坏样品.2）加入氢氧化钠溶液（1.0 mol/L）2 mL后，放置2 h，中和，定容，摇匀，作为碱破坏样品.3）加入3%过氧化氢溶液2 mL后，放置8 h后定容，摇匀，作为氧化破坏样品.4）放入105℃烘箱，放置24 h后定容，作为热破坏样品.5）置强光下（照度：4 500 lx）照射，放置48 h后定容，作为光照降解样品.实验结果表明：长春西汀原料在酸、碱、氧化剂、热及光照条件下较稳定，各个降解产物分离度良好.

2.5线性关系考察

分别精密称取长春西汀对照品加流动相使溶解，稀释制成每1 mL含长春西汀对照品0.001 mg的溶液，精密称取杂质A对照品加流动相使溶解，稀释制成每1 mL含杂质A对照品0.006 mg，精密称取杂质B对照品加流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质B对照品0.005 mg的溶液，精密称取杂质C对照品加流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质C对照品0.005 mg的溶液，精密称取杂质D对照品适量加流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质D对照品0.005 mg的溶液，作为对照品溶液.分别精密量取上述各对照品溶液10、15、20、25、30 μL分别进样，记录色谱图峰面积.以质量浓度为横坐标，以各个杂质峰面积为纵坐标，回归方程分别为：A=36.867x+36.659，R=0.999 9；B=47.311x +44.027，R=0.999 8；C=26.454x+23.937，R= 0.999 6；D=36.328x+34.654，R=0.999 8.结果证明各个杂质在0.06～0.2μg/mL质量浓度范围内均线性关系良好.

2.6重复性试验

精密量取供试品溶液及对照品溶液各20μL，按照如上液相条件进样，连续进样6次，计算所得主峰面积的RSD值，结果如表1所示，实验结果表明该法重复性良好.

表1　有关物质测定分析方法重复性精密度试验结果

2.7稳定性试验

分别精密称取长春西汀对照品加流动相溶解，稀释制成每1 mL含长春西汀对照品0.001 mg的溶液，精密称取杂质A对照品加流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质A对照品0.006 mg，精密称取杂质B对照品加流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质B对照品0.005 mg的溶液，精密称取杂质C对照品加流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质C对照品0.005 mg的溶液，精密称取杂质D对照品适量用流动相溶解，稀释制成每1 mL含杂质D对照品0.005 mg的溶液，作为对照品溶液.另取长春西汀原料制备的供试品溶液，在室温条件下，分别于0、3、6、9、12、18 h测定，记录色谱图.实验结果如表2所示，本品的供试品溶液在室温条件下，18 h之内稳定.

表2　有关物质测定分析方法稳定性试验结果

2.8回收率试验

精密量取本品9份，每份50mL，分别向其中加入适量6.35μg/mL杂质A、5.15μg/mL杂质B、5. 51μg/mL杂质C、5.93μg/mL杂质D，制成含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D质量分数分别为各自杂质限度的80%、100%、120%的回收率样品，每个质量浓度各3份.按照如上液相条件进样，结果表明，各杂质回收率良好（见表3）.

表3　有关物质测定方法分析方法杂质A回收率实验结果

2.9样品测定

对批号为140801、140901、141001的长春西汀原料样品，按照“2.2及2.3”项下的方法分别制备供试品溶液和对照品溶液，依法测定，结果见表4.

表4　样品有关物质测定结果

3　结语

参考英国药典2013年版收载的长春西汀原料质量标准［2-3］，对杂质A、杂质B、杂质C和杂质D进行研究，长春西汀的线性关系良好，专属性强；精密度和稳定性良好，RSD均小于2.0%.该方法准确、简便、快速，可用于长春西汀有关物质的检测.检验结果表明：杂质D的含量在三批原料的检测当中含量均在0.1%以下，所以不将杂质D定入长春西汀原料企业内控质量标准中.

［1］许焱，田军，等.长春西汀的药理作用与临床应用［J］.中西医结合研究，2012，4（1）：38-39.

［2］长春西汀原料标准.英国药典［S］.2013.

［3］吴伦，苏阳，范海潮，等.RP-HPLC法测定北五味子中6种木脂素类成分［J］.哈尔滨商业大学学报：自然科学版，2015，31（5）：536-539

Determ ination of related substances in vinpocetine by HPLC

ZHANG Xia
（Research Center on Life Sciences and Environmental Sciences，Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China）

To establish an HPLCmethod for determining the contents of related substances in vinpocetine.The chromatographic separation was performed on a C18column（4.6×250 mm，5μm）.Themobile phase consisted of acetonitrile and 0.2 mol/L ammonium acetate （55∶45）；the flow rate was 1.0 mL/min；the injection volume was 20μL.The detection wavelength was 280 nm.The Results indicated that the calibration curves of related substances had a good linearity.The specificity was strong and the precision and stability were good.Themethod was sensitive，accurate and specific，and could be applied in determining the related substances in vinpocetine.

vinpocetine；related substances；HPLC?

R927

A

1672-0946（2016）02-0234-03

2015-08-28.

张霞（1977-），女，硕士，高级工程师，研究方向：制备工艺及质量标准.