湿疹洗剂冷湿敷对小鼠急性湿疹皮损组织降钙素相关基因肽含量及组织炎症的影响

邓瑾　刘爱民



湿疹洗剂冷湿敷对小鼠急性湿疹皮损组织降钙素相关基因肽含量及组织炎症的影响

邓瑾1，2刘爱民3

目的 观察不同浓度的湿疹洗剂对小鼠急性湿疹模型降钙素相关基因肽（CGRP）及皮肤组织炎症等指标数值影响。方法 采取2，4二硝基氟苯法建立小鼠急性湿疹模型，采用湿疹洗剂20%，10%，5%高，中，低浓度溶液冷湿敷，以3%硼酸溶液对照，10 d后检测真皮炎症细胞数及降钙素相关基因肽等数值。结果 真皮炎性细胞细胞浸润实验，降钙素相关基因肽含量变化定量实验中单核细胞数及多核细胞数，小鼠耳降钙素相关基因肽浓度数据分别表明在抑制小鼠真皮炎性细胞细胞浸润的作用和定量观察局部组织CGRP的增加作用上高浓度组、中浓度组的治疗效果均比模型对照组的治疗效果显著，差异具有统计学意义（P＜0.01）；高浓度组的治疗效果与中浓度组的治疗效果对比，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低浓度组的治疗效果与阳性对照组的治疗效果对比，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 湿疹洗剂具有显著抑制炎性细胞浸润和提高降钙素相关基因肽的作用，高、中浓度湿疹洗剂湿敷治疗急性湿疹的疗效更加显著。

洗剂；急性湿疹；动物实验；炎性细胞；降钙素相关基因肽

湿疹是一种较难彻底治愈的皮肤病，因其病因不详治愈后易复发，迁延反复而不愈，给患者带来很大痛苦。“湿疹洗剂”为我院多年来临床疗效较佳的外洗方剂，我们通过其不同浓度湿敷对小鼠急性湿疹模型的真皮炎性细胞侵润及降钙素相关基因肽（CGRP）影响的实验研究，探讨其治疗急性湿疹的机理及不同浓度“湿疹洗剂”治疗湿疹的疗效差异。现报道如下。

1　材料与方法

1.1实验动物

昆明种小白鼠60只，体重（20±2）g，雌雄比1：1，室温下喂养，由西安交大医学院实验动物中心提供，生产许可证号SCXK（陕）2014-001。

1.2实验药物及试剂

湿疹洗剂：苦参、黄柏、野菊花、马齿苋各30 g，防风、芒硝、诃子各20 g（三九免煎制剂）.分别以蒸馏水900 ml，1 800 ml，3 600 ml配制成20%，10%，5%的高，中，低浓度溶液。

小鼠降钙素相关基因肽定量测试（ELISA试剂盒）：R&D公司产品；

1.3实验方案

1.3.1造模 采用2，4二硝基氟苯（DNFB）的方法造模［1］，肉眼观察可见小鼠耳部皮肤表现为不同程度的弥漫性水肿性红斑，边界不清，皮肤浸润明显，可见散在少许丘疹，伴抓痕、血痂、鳞屑，提示小鼠急性湿疹样模型造模成功［2］。

1.3.2实验分组与给药 标本的采集：随机分为6组，分别为空白组（A组）、模型对照组（B组）、阳性对照组（C组）、高浓度组（D组），中浓度组（E组），低浓度组（F组）。B组不予治疗，C组使用3%硼酸溶液治疗，D组、E组、F组分别使用20%、10%、5%湿疹洗剂治疗。各组治疗液浸湿无菌纱布，胶带固定湿敷小鼠皮损处，每天2次，每次30 min，连续10 d冷湿敷，于停药后24 h用颈椎脱臼法处死小鼠，剪下左右耳壳，检测各项指标。

1.4观察指标

用8 mm打孔器取小鼠左耳中部同部位组织块，石蜡包埋切片，制成常规苏木素—伊红（HE）染色，在光镜下用网形目镜测微尺以单盲法计数每平方毫米单核和多形核白细胞数，计算出各组平均值。

用8 mm打孔器取小鼠右耳中部同部位组织块，天平测量质量，按比例加入冷冰醋酸液0.5ml，100℃水浴中煮10 min后，入组织匀浆机匀浆3 min，至见不到颗粒状物，将匀浆液移入离心管中，离心机3 000转/min，离心3 min，取上清液移入洁净瓶内，滴入ELISA试剂盒，移入酶标仪测定降钙素相关基因肽含量。

1.5统计学方法

本实验使用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，计量资料以（）表示，采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2　结果

2.1真皮炎性细胞计数

表1　各组小鼠耳真皮炎性细胞计数（）

表1　各组小鼠耳真皮炎性细胞计数（）

注：与阳性对照组比较，·P＜0.01；与阳性对照组比较，▲P＜0.05

?

表2　各组小鼠耳降钙素相关基因肽浓度（）

表2　各组小鼠耳降钙素相关基因肽浓度（）

注：与阳性对照组比较，·P＜0.01；与阳性对照组比较，▲P＜0.05

组别　　n　　　降钙素相关基因钙（NG/L）A组　　10　　　　245.79±11.29 B组　　10　　　　142.32±6.87 C组　　10　　　　164.17±6.28·▲D组　　10　　　　236.53±5.71·E组　　10　　　　200.45±4.23·F组　　10　　　　173.12±5.45▲

实验显示抑制小鼠真皮炎性细胞细胞浸润的作用中，单核细胞数及多核细胞数均降低，炎症减轻，高浓度组、中浓度组作用明显优于阳性对照组（P＜0.01）；低浓度组与阳性对照组的作用有差异（P＜0.05）。见表1。

2.2降钙素相关基因肽含量变化

定量观察局部组织CGRP的增加作用，小鼠耳降钙素相关基因肽浓度指标均回升，高浓度组、中浓度组明显优于阳性对照组 （P＜0.01）；低浓度组与阳性对照组的作用有差异（P＜0.05）。见表2。

3　讨论

中医认为急性湿疹［3］多由禀赋不耐，风、湿、热邪浸淫肌肤，三邪客于皮肤肌表，引起皮肉间气血不和，郁而生微热则作痒，即所谓“热微则痒”；湿热蕴蒸则皮损处浸淫流滋。遵循《理瀹骈文》“外治之理，即内治之理，外治之药，即内治之药。”之理，我院按照湿疹病因病机以清热燥湿、解毒收敛、祛风止痒为外治治疗原则，拟“湿疹洗剂”冷湿敷，方中苦参、黄柏苦寒清热燥湿重用以为君药；臣药使用野菊花、马齿苋苦辛而凉，具散风清热 、解毒消肿之功；佐以防风祛风止痒，诃子、芒硝收敛固涩。该方除使用经统计数据显示湿疹外用处方使用频率较高的苦参、黄柏［4］，还加入了具有清热、祛风、收湿、敛疮功效的药物，用于渗出较多阶段的治疗，加快皮损的消退。

CGRP［5］作为一种生物活性多肽，在体内分布十分广泛，具有强大生理活性，在疾病的诊断与治疗中具有重要意义。有研究表明［6］，T淋巴细胞上有CGRP受体存在，CGRP可通过增加细胞内CAMP的水平而抑制自然杀伤细胞（NK cel1）的活性。CGRP在调节巨噬细胞对激活因子的反应以及传递抗原的功能方面也发挥重要作用。Salomon［7］等的研究显示AD患者血浆中CGRP的表达水平低于正常人的表达，在疾病加重期明显低于正常人的表达水平，而在疾病缓解期有所升高，与正常人的表达无明显差异。这些发现均表明在体内，CGRP均具有潜在的免疫调控作用。

综上所述，“湿疹洗剂”临床治疗湿疹，效果明显，无毒副作用，使用安全，且不易耐药，具有显著抑制炎性细胞浸润和提高降钙素相关基因肽的作用，对急性湿疹的治疗作用显著。临床亦可用于急性皮炎、湿疹、药疹、接触性皮炎、感染性皮肤病等治疗。

［1］宋智琦，林熙然.某些炎症介质拮抗剂抗过敏作用的实验研究［J］.中国皮肤性病学杂志，1998，12（5）:266-267.

［2］张学军.皮肤性病学［M］.7版.北京:人民卫生出版社，2008:107.

［3］武李莉，闫英.湿疹的中医临床研究进展综述［J］.现代中医临床，2014，21（3）:57-60.

［4］王金英，蔡琳，杨洪军，等.《中医方剂大辞典》中湿疹外用方剂用药规律分析［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（19）:12-15.

［5］邬元平.降钙素基因相关肽研究进展［J］.国际检验医学杂志，1999，20（5）:201-202.

［6］张万江，盛树力.降钙素基因相关肽研究进展［J］.首都医科大学学报，1990，11（4）:314-325.

［6］Scholzen T，Armstrong CA，Bunnett NW，et a1.Neuropep—tides in the skin: interactions between the neuroendocrine and the skin immune systems［J］.Exp Dermatol，1998，7（2-3）:81-96.

［7］Salomon J，Baran E.The role of selected neuropeptides in pathogenesis of atopic dermatitis ［J］.J Eur Acad Dermatol Venereol，2008，22（2）:223-228.

The Application of Eczema Lotion Cold Wet in Mice With Acute Eczema Skin Tissue on the Influence of CGRP Content and Tissue Inflammation

DENG Jin1，2LIU Aimin31 Clinical Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，He'nan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou He'nan 450046，China，2 Department of Dermatologica，Traditional Chinese Medicine Hospital of Sanmenxia City，Sanmenxia He'nan 472000，China，3 Department of Dermatological，He'nan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou He'nan 450000，China

Objective To observe the different concentrations of eczema lotion on the mice model of acute eczema calcitonin gene related peptide（CGRP） and skin tissue inflammation index number.Methods 2，4 dinitrodiphenyl fluorine benzene method to establish a mouse model of acute eczema，the eczema lotion 20%，10%，5%，high，cold wet apply low concentration solution，compared with 3% boric acid solution，10 days after detection of dermal inflammatory cells and calcitonin gene related peptide （CGRP） and so on.Results Dermal cells，inflammatory cell infltrate experiment，the changes of calcitonin gene related peptide content quantitative experiment showed that the treatment of high concentration group，the concentration of treatment than the model control group with significant difference （P＜0.01）； The high concentration group there are differences between the treatment group than in the concentration （P＜0.05）；The treatment of low concentration groups than there are differences in the treatment of positive control group （P＜0.05）.Conclusion eczema lotion has signifcant inhibition of infammatory cell infltration，and improve the effect of calcitonin gene related peptide，high，medium concentration eczema lotion the curative effect of treating acute eczema is more signifcant.

Lotion，Acute eczema，Animal experiments，Inflammatory cells，Calcitonin related gene peptide

R275

A

1674-9308（2016）21-0192-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.119

1 河南中医药大学中西医结合临床系，河南 郑州 450046；2河南省三门峡市中医院皮肤科，河南 三门峡 472000；3 河南省中医院皮肤科，河南 郑州 450000

刘爱民，E-mail:13592603226@163.com