齐齐哈尔市无偿献血者血液HBV、HCV、HIV酶免检测联合核酸检测结果分析

李微　温馨娜　郑慧丽



齐齐哈尔市无偿献血者血液HBV、HCV、HIV酶免检测联合核酸检测结果分析

李微温馨娜郑慧丽

目的 探讨酶免检测联合核酸扩增检测2016年齐齐哈尔地区无偿献血人群HBV、HCV、HIV-I和HIV-2感染的收益情况。方法 对2016年齐齐哈尔地区无偿献血者血液标本进行HBV、HCV、HIV（1+2型）感染性标志物的筛查。结果EIA检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV均为阴性的合格血液共13 716份/14 097份。NAT检测呈反应性19份/13 716份，反应性率为1.39‰。19例NAT检测反应性标本中11例为NAT拆分检测病毒核酸反应性且11例均为HBV DNA反应性。结论 应用核酸扩增检测能有效提高输血安全，降低输血传播相关病毒的风险；而献血人群中检出核酸反应性的标本主要为HBV DNA反应性而HBsAg无反应性。

ELISA检测；核酸检测；血液筛查；血液安全

输血相关传染病的预防和控制已经成为全社会关注的焦点［1］。酶免检测（EIA）技术已经广泛运用于血液筛检，该方法的灵敏度和特异性也在不断地改进和提高，但每年仍有少数新发输血后肝炎病例报道［2-3］。相比EIA检测，血液病毒核酸检测（NAT）技术可以大大降低经输血传播病毒的风险。尽管NAT从理论上并不能完全消除病毒感染的“窗口期”，但可以有效地预防经输血传播病毒性疾病［4-5］。本血站从2016年1月已在ELISA检测的基础上正式开展核酸检测，现将核酸与ELISA联合检测的结果报告。分析如下。

1　材料与方法

1.1标本来源

标本来自2016年齐齐哈尔中心血站的无偿献血者，包括全血献血者和单采献血者，献血者年龄为18～55岁。严格按照献血者健康检查要求对献血者进行健康征询和体检，并经过HBsAS、丙氨酸氨基转移酶筛查合格才允许捐献，所有标本经过献血者知情同意后留取。

1.2试剂与仪器

1.2.1试剂 HBsAg、抗HCV、抗HIV检测均采用2个不同厂家的ELISA试剂。以上所有试剂均为中国药品生物鉴定所批批检合格产品，并严格按照试剂盒说明书的要求进行操作。其中抗HIV反应性标本送疾病预防控制中心进行确认。

NAT检测试剂采用苏州华益美生物科技有限公司乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1+2型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）（国药准字S20130011，批号：MA20150805、MA20160101）

1.2.2仪器 （1）酶免设备：澳斯邦的前加样和后处理；（2）华益美全自动核酸检测系统，包括：BACME全自动核酸提取系统（瑞士Hamilton）、ABI7500荧光PCR仪（美国ABI）。以上仪器均在校验合格期内使用。

1.3检测方法及判定标准

1.3.1常规检测 所有血液标本均按照我国《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）进行常规的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP项目的2次ELISA检测和ALT项目的2次速率法检测，由不同人员用不同厂家的试剂严格按试剂说明书的要求进行检测。

任一种试剂检测为反应性的，重取血样双孔复试，复试任一孔为反应性的判定为不合格，其中2例抗HIV反应性标本送疾病预防控制中心确认。所有试验结果均按试剂盒说明书在实验室管理软件自动判读。

1.3.2核酸检测 对常规检测合格的标本进行核酸（NAT）检测，首先由全自动核酸提取仪自动混样，每8份标本（150 μl/份）混合成1份（1.2 ml）汇集池（pool）标本，由全自动核酸提取仪和荧光核酸扩增检测仪采用核酸定性筛查试剂进行HBV、HCV、HIV（1+2型）核酸检测。每批检测均设置1个阴性质控和1个阳性质控，1个外部阳性质控，每个pool均含DNA内对照（DNA IC）和RNA内对照（RNA IC）。

汇集检测为核酸非反应性，汇集池中的8份标本合格；汇集检测为核酸反应性，对该汇集池子中的8份标本进行拆分检测，拆分检测无核酸反应性判定为NAT检测阴性，拆分检测为核酸反应性判定为NAT检测阳性。所有试验结果均按试剂盒说明书的要求用华益美实验室管理软件自动判读。

表1　EIA检测结果（份）

表2　NAT检测结果（份）

2　结果

2.1酶联免疫检测结果

14 097份血液标本中，经血清学检测，ELISA单项阳性97份（6.88‰），其中HBsAg单项阳性25份（1.77‰）；抗-HCV单项阳性70份（4.97‰）；抗-HIV单项阳性2份（0.14‰），经疾病预防控制中心确认1例为HIV阳性；另有284份血样其他指标不合格。可进行核酸检测的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV ELISA合格血液样本共13 716份。见表1。

2.2核酸检测结果

经血清学检测合格的13 716例献血者标本中，19个NAT汇集检测呈反应性，反应性率为1.39‰。19例NAT汇集检测反应性标本中，11例为NAT拆分检测病毒核酸反应性、8例为NAT拆分检测病毒核酸无反应性。在拆分检测病毒核酸反应性标本中，HBV DNA反应性为11例（0.8‰）、HCV RNA反应性为0例（0%）和HIV（1+2型）RNA反应性为0例（0%）。见表2。

3　结论

实验结果表明各月间NAT反应性率存在差异，NAT反应性率1月0.91‰，2月0.72‰，3月0.25‰，4月1.57‰，有研究表明HBV输血残余风险高于HIV或HCV［6-8］，本实验结果中NAT核酸反应性标本均为HBV DNA反应性，也证实HBV输血传播的残余风险相对较高，这可能与我国的HBV高感染率有关。

［1］张妍，朱海峰，孙波，等.核酸检测技术在血液筛查中的应用及分析［J］.中国输血杂志，2012，25（12）:1298-1300.

［2］孙波.输血前血液筛查中新型HBV基因突变及抗原分析的研究［D］.济南:山东大学，2013:14-18.

［3］张哲，杜勇，周建霖.核酸检测技术在血液筛查中的应用进展［J］.现代实用医学，2011，23（10）:1088-1090，1093.

［4］叶贤林，郑欣，熊文，等.核酸检测技术在血液筛查中的应用研究［J］.热带医学杂志，2011，11（S1）:1138-1140.

［5］郑优荣，梁浩坚，李仲平，等.核酸检测技术在广州地区献血者血液筛查中的应用［J］.中国输血杂志，2013，26（12）:1211-1214.

［6］王芳，金钊，林松峰，等.核酸检测在血液HBV筛查中的应用研究［J］.中国卫生检验杂志，2010（4）:795-796，851.

［7］段勇，郭逸，叶世辉.病毒核酸检测技术在西安地区血液筛查中的应用分析［J］.中国输血杂志，2014，27（8）:842-844.

［8］钟涵.核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究［D］.重庆:重庆医科大学，2011:13-17.

Analysis of the Effect of EIA and NAT on HBV，HCV，HIV in Volunteer-donators in Qiqihar

LI Wei WEN Xinna ZHENG Huili Department of Clinical Laboratory，The Central Red Cross Blood Stations in Qiqihar，Qiqihar Heilongjiang 161006，China

Objective To investigate the effect of EIA and NAT on screening HBV，HCV，HIV-1 and HIV-2 in volunteer-donators in Qiqihar in 2016.Methods The HBV，HCV and HIV （1+2 type） were screened in volunteer-donators in Qiqihar in 2016.Results The results of EIA showed that the negative of HBsAg，anti-HCV and anti-HIV were 13 716 samples in 14 097.The results of NAT showed that the reactivity rate of HBsAg，anti-HCV and anti-HIV were 19 samples in 13 716，the reactivity rate was 1.39‰.11 in 19 NAT reactivity samples were NAT split testing reactivity of the viral nucleic acid，and all were HBV DNA reactivity.Conclusion NAT can improve the blood transfusion safety and reduce the risk of transfusion related viruses，the nucleic acid reactivity was HBV DNA，no was HBsAg.

ELISA，Nucleic acid testing，Blood screening，Blood safety

R512

A

1674-9308（2016）21-0035-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.019

齐齐哈尔市红十字中心血站检验科，黑龙江 齐齐哈尔 161006

郑慧丽，E-mail:ahui66@sina.com