土塘对杂交石斑鱼苗种生长的影 响

吴永丽，刘翠红，马细兰，周立斌（.惠州学院，广东　惠州　56000；2.西南林业大学，云南　昆明　650224）

土塘对杂交石斑鱼苗种生长的影响

吴永丽1，2，刘翠红1，马细兰1，周立斌1
（1.惠州学院，广东惠州516000；2.西南林业大学，云南昆明650224）

摘要：本实验通过分析比较土塘和室内水泥池杂交石斑鱼苗种培育的水质指标，研究土塘水质各因子对杂交石斑鱼苗种生长的影响。结果表明，土塘海水水质各因子对仔鱼生长的影响各不相同：氨氮离子、亚硝酸盐、水温、盐度、细菌含量对仔鱼生长的影响较小；硫化氢浓度、pH值、透明度对杂交石斑鱼仔鱼生长的影响较大。初步论证了土塘作为人工培育杂交石斑鱼的方法是可行的。

关键词：水质；土塘；杂交石斑鱼；苗种生长

斜带石斑鱼（Epinephelus lanceolatus）和鞍带石斑鱼（Epinephelus coides）同属于鲈形目，石斑鱼亚科，石斑鱼属［1-2］。斜带石斑鱼俗称老虎斑，该种类主要分布在太平洋和印度洋的热带、亚热带海区，以及我国的东南沿海，常栖息于大陆沿岸和岛屿沿岸，但在河口和离岸100 m深的水域中也有发现。其优点是生长快、体色艳丽、营养丰富、肉质鲜美、抗逆性强，属中档鱼，市场价格高且稳定。鞍带石斑鱼俗称龙趸、龙胆石斑鱼，是石斑鱼类中体型最大的一种，有斑王之称，主要产于东南亚、澳洲海域，在我国南海（南沙群岛）亦曾发现，但数量稀少，售价昂贵，具有抗病性强、肉味鲜美、生长速度快、营养价值高，属高档鱼类。

水体是鱼生活的主要环境，它们在水中呼吸，靠水体提供氧气，绝大多数鱼也在水中摄取饲料，把二氧化碳、粪便等废物排在水中。但是，水中还有许多生物特别是有害生物生存，这些因素都可导致水质恶化［3］。而水的质量必然决定鱼的生长，所谓“养鱼先养水”，道理就在于此。衡量水质好坏的指标主要有水的酸碱度值、透明度、溶解氧含量、温度、氨氮含量、亚硝酸盐含量、硫化物浓度等［4］。其中，国内外有关温度、盐度和pH值对海水鱼类早期发育阶段的影响已有不少报道［5-6］。而氨氮、亚硝酸盐等水质因子促使鱼类正常生长的安全浓度范围的研究，有李波［7］等研究了氨氮和亚硝酸盐对黄颡鱼急性毒性效应，胡萍华［8］等研究了氨氮对白斑成鱼的急性毒性研究。但是，有关土塘海水水质各因子（氨氮、亚硝酸盐、硫化物、pH值、盐度、水温、细菌含量、透明度）对这两种鱼杂交孵化后的苗种生长的影响在国内外尚未见报道。本试验通过分析比较土塘和室内水泥池杂交石斑鱼苗种培育的水质指标，研究土塘水质各因子对杂交石斑鱼苗种生长的影响，为解决杂交石斑鱼人工繁殖技术、实现杂交石斑鱼全人工苗种的批量生产提供理论依据。

1　材料与方法

1.1材料来源

取自广东省海洋渔业试验中心室内水泥池饲养的鞍带石斑鱼雄鱼的精子以及其他水产中心室内水泥池中饲养的斜带石斑鱼雌鱼的卵子，在取斜带石斑鱼雌鱼卵子的水产中心通过人工授精的方法把以上两种石斑鱼的精子和卵子相互结合，以获得一种新的杂交石斑鱼受精卵。然后将杂交石斑鱼的受精卵运回大亚湾水产试验中心进行育苗。试验时间为2015年9月14日—10月15日。杂交石斑鱼的鱼卵于9月14日晚抵达水产中心投放入3号车间的水泥池进行孵化培育，并在晚上孵化出鱼苗。然后于9月15日早上投放入水产中心的土塘进行杂交石斑鱼的仔鱼培育。

1.2试验仪器

尼康万能投影仪，投影显微镜（带显微摄影装置），普通数码相机，MR220水质分析仪等。

1.3室内水泥池过滤海水和土塘海水水质指标检测

每天检测土塘（下称实验组）以及室内水泥池（下称对照组）海水水质指标，主要检测氨氮（NH3-N）值、亚硝氮（NO2-N）值、硫化氢（H2S）值、pH值、水温、盐度以及测量土塘海水的透明度。

土塘海水透明度检测：用自制的黑白盘（塞奇氏盘）测定。用1～3 mm厚的铁片板，切割成边长为20 cm的方形板，在板的一面通过中心作两条垂直相交的直线，分为4个等分，上面以黑白漆相间涂色。圆盘中心钻一个孔，插入一根铁棒并固定好，再将铁棒每隔10 cm做一个刻度，直至把铁棒全刻满为止。使用时将圆盘逐渐下沉，直到看不见圆面的白色为止，此时的深度即为水的透明度。

土塘和室内水泥池海水水温检测：将温度计垂直放入土塘及室内水泥池上层水中，使水没过温度计的水银球。等待5 min后，记录温度计上的数值。土塘和室内水泥池海水透明度和温度检测完毕后，在土塘边和室内水泥池边各选五个区域用采水器采集上层水样，分别装入五个水杯中，然后把五个杯中的水倒在一起混合，重复混合五次，以致水完全混合后，取2 L水样，剩余的水样倒掉，把两个水样拿至实验室进行检测，然后进行水质分析仪显色剂的配制。

盐度检测：将盐度计的接物镜面擦拭干净。用滴管将试验组与对照组的海水各吸取一滴约 2~3 mL，打开聚光板，并将海水滴附于接物镜上，再轻盖聚光板。将盐度计的聚光板处朝向光源，接目镜贴近眼睛并保持平行。由观景窗观察盐度计上的刻度，并记录试验组和对照组的海水盐度。

水质及pH值检测：取6支25 mL比色管放于试管架上，并在管上做好试验组和对照组水样及测定项等标记。各取试验组和对照组的海水于3支比色管中，分别加入氨氮、亚硝酸盐、硫化氢显色剂，震荡使其充分混合，静置10 min待水样和显色剂进行完全显色反应。在等待的过程中，使用水质分析仪的pH值电极分别检测试验组和对照组水样的pH值。10 min显色完毕后，使用水质分析仪分别检测试验组和对照组样水的氨氮（NH3-N）值，亚硝氮（NO2-N）值，硫化氢（H2S）值。

1.4室内水泥池过滤海水和土塘海水微生物含量测定——细菌数

在采集水样前一天用高压蒸汽灭菌锅对细菌培养皿及接种工具进行灭菌，并在灭菌后把培养皿和接种工具放入高温干热灭菌箱进行烘干。在精密电子天平上称量营养琼脂培养基（下称全培养基）或胰蛋白胨大豆肉汤培养基（下称大豆培养基）的配料配制检测细菌的培养基。配制完培养基后倒平板，待平板冷却后放入冰箱以备采水样后进行细菌检测用。每隔1~2 d进行试验组与对照组水样的细菌数检测。

采集水样当天，进行完水质检测后，就把试验组和对照组的水样拿到超净工作台在无菌条件下进行水样的细菌检测。试验组和对照组的水样各取10 μL用两个全培养基或大豆培养基接种培育细菌。接种完后，把细菌培养基放入培养箱在28℃下培育24 h后，再数培养的细菌平板菌落总数。

1.5土塘杂交石斑鱼鱼苗生长测量

自鱼苗孵出放入土塘后，在土塘的边上选择易于观察杂交石斑鱼鱼苗的地方，准备好带长柄的采鱼苗的容器，每天用采鱼苗的容器采集15~30尾仔鱼，并尽快送到试验室观察。在观察仔鱼之前加少许丁香酚把仔鱼进行短时麻醉，根据仔鱼的大小选择吸管或宽口软管将仔鱼从头部开始吸入，迅速放在凹玻板上，并吸走多余的水，但保证仔鱼在少许的水里，以免仔鱼死亡，影响测量数据。然后把有仔鱼的凹玻板放在尼康万能投影仪上测量仔鱼的体长。测量完后把凹玻板放在投影显微镜（带显微摄影装置）下观察仔鱼的生长情况并拍照。当仔鱼的体长无法全部显示在显微镜的摄影镜头中时，就用普通数码相机拍下仔鱼的发育情况。观察完后，就把仔鱼放入甲醛中进行固定。

1.6数据处理

试验组海水水质指标---氨氮（NH3-N）值，亚硝氮（NO2-N）值，硫化氢（H2S）值，pH，水温，盐度，透明度及海水细菌含量分别与土塘杂交石斑鱼仔鱼的生长指标用SPSS软件进行相关性分析。测量的各组海水水质指标、细菌含量的比较用SPSS TTest检验，当P＜0.05时认为差异具有统计学意义。

2　结果与分析

2.1土塘海水的各水质因子与杂交石斑鱼仔鱼的生长情况及相关性分析

杂交石斑鱼仔鱼在土塘培育31日的生长情况（见图1）。自孵化的第1天起至第31天，仔鱼的生长一直呈上升趋势。在孵化后的第2—4天杂交石斑鱼仔鱼生长缓慢。从第6天开始，仔鱼开始加速生长，到了第10天，仔鱼的生长到达第一个小高峰期。在此后第11—13天仔鱼的生长基本持平。但从第14天开始，仔鱼飞速增长，直至第31天，出现最大值，仔鱼的生长到达第二个高峰期。

图1　土塘海水水质氨氮指标与杂交石斑鱼生长相关性比较

土塘海水各水质因子及杂交石斑鱼仔鱼的生长指标的相关性分析（见图1—图3）。可以看出，土塘海水中H2S、T、S值与杂交石斑鱼仔鱼的平均生长长度呈正相关关系，而其他的海水指标与仔鱼的生长指标呈负相关关系。由图1可以看出，随着杂交石斑鱼仔鱼长度每日的增长，土塘海水中H2S的含量也呈上升趋势，并且变化的幅度大体较平稳，与仔鱼的生长趋势基本一致。而海水中的NH3-N和NO2-N变化幅度较H2S大，尤其是NH3-N的含量更是落差很大，两者均与仔鱼长度的增长趋势相差较大。由图2可以看出，土塘海水的温度和盐度变化的趋势较相近，基本与仔鱼的生长趋势一致，而海水的pH值不随仔鱼长度的增加而变化，一直保持平稳的状态。由图3可以看出，土塘海水中细菌含量呈无规律的变化，而土塘海水的透明度变化幅度不大，两者均与仔鱼日增长趋势不一致。

土塘海水的各水质因子与杂交石斑鱼仔鱼的平均生长长度的相关系数（绝对值）依次为：NH3-N＜S＜pH值＜T＜海水细菌含量＜NO2-N＜H2S＜透明度，土塘海水中的氨氮含量、盐度、pH值、温度与杂交石斑鱼仔鱼的平均生长长度的相关系数较小，尤其是氨氮含量几乎与仔鱼的生长长度不相关，说明土塘海水的氨氮含量、盐度、pH值以及温度对杂交石斑鱼仔鱼生长的影响很小。

2.2土塘海水与室内水泥池过滤海水水质检测结果比较

经过连续27 d对土塘海水与室内水泥池过滤海水的监测，各水质因子比较情况见图4—图10。从图4可以看出，试验组的氨氮浓度变化范围为0.031～0.076 mg/L，平均值为0.030 mg/L。第1、7天及第11天试验组土塘海水与对照组室内水泥池过滤海水的氨氮含量相差较大，其余的时间试验组与对照组的海水氨氮含量相差较小。第1天塘中还没有放入杂交石斑鱼鱼苗，是处于培育鱼苗生长环境的阶段，加入塘中的有机肥料会较多，使pH值增加了，加上当时的天气是暴雨天气水中缺氧，这就导致了第1天检测的试验组海水氨氮含量与对照组的相差那么大。而第7天和第11天塘中杂交石斑鱼仔鱼分别是孵化后的第6天和第10天，杂交石斑鱼仔鱼生长速率加快，饲料和排泄物的沉积增多，从而导致试验组的海水氨氮值较对照组高出很多。试验组海水的氨氮含量显著地高于对照组（P＜0.05）。

图2　土塘海水水质盐度与温度指标与杂交石斑鱼生长相关性比较

图3　土塘海水水质透明度与细菌水平指标与杂交石斑鱼生长相关性比较

图4　土塘海水与过滤海水氨氮含量

图5　土塘海水与过滤海水亚硝酸盐含量

图7　土塘海水与过滤海水pH值

图8　土塘海水与过滤海水温度

图9　土塘海水与过滤海水盐度含量

图6　土塘海水与过滤海水硫化氢含量

从图5可以看出，试验组的亚硝酸盐浓度变化在0.016～0.080 mg/L之间，亚硝酸盐平均浓度为0.035 mg/L。试验组海水的亚硝酸盐含量的变化与对照组的变化没有规律，试验组的亚硝酸盐含量与对照组差异不具有统计学意义（P＞0.05）。

从图6可以看出，试验组海水中硫化氢浓度范围是0.024～0.068 mg/L，平均浓度为0.044 mg/L。第1天与第27天试验组海水的硫化氢含量与对照组的相差较大，第11天与第14天试验组与对照组的硫化氢含量有一个较小的波峰变化，这可能是由于在第1天塘中加入的有机肥料含硫元素较多，并且又遇上暴雨天气，导致试验组海水的硫化氢含量较高。其后的第11天、第14天、第27天杂交石斑鱼仔鱼在塘里生长速率较快，海水中的有机物、饲料分解和排泄物的沉积增多，水中的硫化氢含量就较对照组高。其余的时间试验组与对照组的硫化氢的变化较一致。试验组海水的硫化氢含量显著地高于对照组（P＜0.05）。

从图7可以看出，试验组海水pH值在8.1～8.4之间浮动，平均pH值为8.2。试验组海水pH值的变化与对照组pH值的变化幅度相似，试验组海水的pH值显著地高于对照组（P＜0.05）。

从图8可以看出，试验组海水水温变化范围是28.2～32.1℃，平均水温是30.4℃。试验组海水温度变化与对照组海水温度变化差异很小，试验组海水温度与对照组差异不具有统计学意义（P＞0.05）。

从图9可以看出，试验组海水的盐度变化范围是28.4～31.2，平均盐度是30.6。试验组海水盐度的变化与对照组海水盐度的变化差异很小，试验组海水盐度与对照组差异不具有统计学意义（P＞0.05）。

从图10可以看出，试验组海水细菌平均含量是195个。在第5、8、14天试验组的细菌平均含量较对照组相差较大，这可能是由于在第5、8、14天土塘海水温度较高，促使了水中细菌的快速生长。其余的天数，试验组海水细菌含量的变化与对照组的变化差距不大。总体来看，试验组的海水细菌含量与对照组差异不具有统计学意义P＞0.05）。

图10　土塘海水与过滤海水细菌含量

3　讨论

氨是水生动物蛋白质分解代谢后的主要产物，由代谢产物和残饵造成的氨污染是引起水生生物死亡的常见因素之一［9］。氨态氮有NH4+和NH3两种形态，其中非离子氨NH3可对水产动物产生严重危害，腐蚀鱼的鳃组织，破坏鳃的呼吸功能。氨的毒害作用与水体的温度及pH值有关，水温和pH值越高，则危害越大［10］。在本次研究结果表明，室外土塘培育海水的氨氮浓度显著高于室内水泥池培育海水的氨氮浓度，平均浓度为0.030 mg/L，远低于我国渔业对养殖水体中最低氨态氮含量的要求［10］，这说明土塘海水中的氨氮离子几乎不影响杂交石斑鱼仔鱼的生长，仔鱼生长性良好。在露天土塘这个自然环境中的浮游生物的数量会比室内的水泥池多，在养鱼初期培水所施加的有机肥料也会比室内水泥池多，所喂养杂交石斑鱼仔鱼的饲料也会区别于在室内水泥池喂养投放的饲料，这样土塘培育海水的氨氮含量会高出室内水泥池培育海水的氨氮含量。随着仔鱼的日渐长大，水中的氨氮浓度会较亚硝酸盐和硫化氢浓度低，这可能是由于到仔鱼生长后期水温和塘水pH值降低的关系。

硫化氢是由于含硫有机物在缺氧条件下，由厌氧细菌分解形成，在水体中以分子形式的硫化氢（H2S）、硫氢根（HS-）和硫离子（S2-）三种形态存在，其中硫化氢和硫氢根能够作用于蛋白质结构中的巯基基团，形成共价结合键，抑制蛋白质的作用，从而表现出毒性作用［11］。本研究结果表明，土塘海水中硫化氢的浓度显著高于室内水泥池过滤海水，平均浓度为0.044 mg/L，符合渔业水质要求，鱼池中硫化氢的浓度宜控制在0.1 mg/L以下［10］。土塘海水环境比室内水泥池海水环境复杂，所含的浮游生物、有机物也较室内水泥池多，硫化氢含量也较室内水泥池高。土塘海水中硫化氢的浓度与仔鱼的生长是中度相关的关系，说明杂交石斑鱼仔鱼的生长受土塘海水硫化物的影响较大。同时随着仔鱼日渐长大，水中硫化氢含量增加，并且会比氨氮、亚硝酸盐含量还高，这可能是由于到了仔鱼生长后期，水中的有机物质消耗了水中的溶解氧，导致硫化物含量增高。

水体的酸碱度值即pH值是表现水的化学反应变化及生物作用的一个重要指标。它由污染物的含量及理化特性、二氧化碳、重碳酸盐的比值决定，并直接影响鱼的生理状况。pH值对鱼生长的影响与其改变了水体中某些物质的存在形式有关，如pH值直接影响NH3和NH4+的比例［4］。pH对海水鱼虾类直接影响表现在酸性过强的水可使鱼虾血液值下降，削弱它的载氧能力，造成缺氧症。碱性过强的水则腐蚀鳃组织，并使孵化中的鱼卵卵膜早溶，引起胚胎过早出膜而大批死亡［12］。本试验结果表明，土塘海水的pH值显著地高于室内水泥池过滤海水，土塘海水是偏碱性的，平均pH值为8.2，与国家渔业水质标准规定的海水养殖pH范围符合［13］。海水中的pH值对杂交石斑鱼仔鱼的生长产生的影响很小，表明了海水中NH3和NH4+比例并没明显变化，与陈在新［4］的报道相符，土塘海水的环境是稳定的。

除了上述水质因子，其余的水质因子（亚硝酸盐、水温、盐度、细菌含量）在土塘中以及在室内水泥池中的变化相差不大，并且在两个环境中的含量、变化均较一致。高浓度NO2-使鱼体血液中含二价铁的血红蛋白（还原型血红蛋白）变成含三价铁的高铁血红蛋白，从而影响血液携带氧气的机能，造成组织缺氧，使鱼体质下降，影响生长［14］。本研究结果表明，土塘海水中亚硝酸盐平均浓度为0.035 mg/L，养殖水体中亚硝酸盐浓度低于0.05 mg/ L对鱼体不会造成任何危害，适宜鱼类的生长［10］。土塘海水与室内水泥池海水的氧气都较充足以及微生物含量都较稳定，因此，土塘培育海水中亚硝酸盐含量与室内水泥池培育海水的亚硝酸盐含量相似。土塘海水中的细菌数量及生长速率一直处于平稳状态，说明土塘海水与室内水泥池过滤海水的细菌数量相似，土塘的环境稳定适宜杂交石斑鱼仔鱼的生长。土塘海水中的亚硝酸盐浓度和细菌含量与杂交石斑鱼仔鱼的生长长度是一种低度相关的关系，说明海水中的细菌含量与亚硝酸盐浓度对仔鱼的生长有一定的影响，可是影响的效果不明显。而且亚硝酸盐浓度和细菌数量会因仔鱼日渐长大而逐渐减少，这可能是由于在仔鱼生长的后期不断向水中增加氧气，致使水中的亚硝酸盐含量降低，水温也有所降低，细菌生长速率降低的缘故。由本试验结果知，土塘海水的水温和盐度对杂交石斑鱼仔鱼的生长影响很小，这表明了室外土塘的培育水温、盐度与室内水泥池水温、盐度相近，土塘海水环境是稳定的。本试验结果测出土塘海水水温变化范围是28.2～32.1℃，盐度变化范围是28.4～31.2，与张雅芝［15］的报道相近。

透明度一般指自然光透过水层的深度，其大致反映了光在水中的照度水平，其大小受水中悬浮物（尤以浮游植物）的量影响［16］。水的透明度也是反映水质状况的一项指标。当水体含泥沙、微生物、悬浮物、有机质等物质时就会产生浑浊现象，水的透明度便会降低。水的透明度减低不但影响感官性状，还会影响水生生物的生活。同时透明度直接反映水体中浮游生物的丰歉程度，在施肥池塘中，常把透明度作为衡量水体肥瘦的重要尺度［10］。土塘海水的透明度与杂交石斑鱼仔鱼的生长是中度相关的关系，说明杂交石斑鱼仔鱼的生长受海水透明度的影响较大。为满足仔鱼生长的需要，海水中需加入更多的饲料及肥料，海水中的透明度就会逐渐减小，本次试验中到了仔鱼生长后期，塘水透明度30 cm附近变化，基本符合渔业标准［10］。

本次研究中所监测土塘海水各项水质指标均符合杂交石斑鱼仔鱼的生长要求，并且仔鱼在土塘海水各水质因子的作用下，生长状况良好。用土塘培育杂交石斑鱼，培育环境十分接近自然生长环境，有利于杂交石斑鱼仔鱼的生长和成熟，同时也可大大减少杂交石斑鱼患病的可能性，是一种前景十分好的人工培育杂交石斑鱼的新方法。

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资助项目：广东省高校重大基础研究项目（2014KZDXM071）；广东省高等学校高层次人才项目［粤财教（2013）246］；惠州市科技计划项目（2011B040010003）；惠州学院自然科学重点项目（2012ZD07）

中图分类号：S967.4

文献标志码：A

文章编号：1004-2091（2016）07-0032-08

doi：10.3969/j.issn.1004-2091.2016.07.007

收稿日期：（2016-01-13）

作者简介：吴永丽（1991-），女，硕士研究生，从事鱼类生理学和分子生物学研究.E-mail：489443622@qq.com

通信作者：周立斌（1972-），男，教授，从事鱼类生理学和分子生物学研究.E-mail：zlb2003@163.com

Effects of fish pond on seed growth of hybrid groupers

Wu Yongli1，2，Liu Cuihong1，Ma Xilan1，Zhou Libin1
（1.Huizhou University，Huizhou 516000，China；
2.Southwest Forestry University，Kunming 650224，China）

Abstract：In order to understand how each factor of the water quality in fish pound influences on the growth of the larvae of hybrid grouper，we will analyze and compare the seawater quality of larvae of hybrid grouper in cultivating between the fish pound and the indoor cement pool.he results showed that the water quality of each factor on the growth of larvae in fish pound was different.NH3-N，NO2-N，water temperature，salinity，bacteria content have little effects on larvae growth，but the concentration of H2S，pH，transparency have greater effects on the growth of the larvae of hybrid grouper.Preliminary proved that method with artificially culturing hybrid grouper in fish pound is feasible.

Key words：water quality；fish pound；hybrid groupers；seed growth