CerbB-2、P53及增殖细胞核抗原在卵巢上皮癌中的表达及临床意义

任鹏，傅亚军，谢珊艳（嘉兴市妇幼保健院，浙江嘉兴，314000）

·临床研究·

CerbB-2、P53及增殖细胞核抗原在卵巢上皮癌中的表达及临床意义

任鹏，傅亚军，谢珊艳
（嘉兴市妇幼保健院，浙江嘉兴，314000）

目的探讨CerbB-2、P53、增殖细胞核抗原（PCNA）在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义。方法临床确诊为卵巢上皮癌中的患者62例，采用免疫组化Envision二步法检测卵巢上皮癌组织中CerbB-2、P53的表达及PCNA计数，并设20例卵巢良性肿瘤组织、20例正常卵巢组织为对照组，比较各组卵巢组织中CerbB-2、P53的表达及PCNA计数。结果（1）CerbB-2在卵巢上皮癌中的阳性表达率为75.8%，与卵巢良性肿瘤阳性表达率（20%）和正常卵巢组织阳性表达率（5%）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；（2）P53在卵巢上皮癌中的阳性表达率为67.74%，与卵巢良性肿瘤阳性表达率（0%）和正常卵巢组织阳性表达率（0%）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；（3）PCNA在卵巢上皮癌中的阳性表达率为70.97%，与良性肿瘤和正常卵巢组织比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；（4）CerbB-2、P53蛋白及PCNA的表达与肿瘤的临床分期有关（P＜0.05），与肿瘤长径、病理类型、有无转移无显著关系（P＞0.05）。结论 CerbB-2、P53、PCNA在卵巢上皮癌中表达上调，联合检测CerbB-2、P53、PCNA有助于判断卵巢上皮癌的恶性程度和患者的预后。

卵巢上皮癌；CerbB-2；P53；增殖细胞核抗原

卵巢上皮癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，死亡率居妇科肿瘤首位。由于卵巢位于盆腔，发病隐匿并缺乏有效的早期诊断方法，易于转移和扩散，故大多数患者在被确诊时已属中晚期，预后极差。卵巢上皮癌的病因及发病机制目前尚不清楚。原癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡抑制及细胞周期失调等多基因的变化，在卵巢上皮癌的发病机制中起着重要的作用［1］。CerbB-2原癌基因及P53抑癌基因均为肿瘤相关基因，其异常表达可在多种恶性肿瘤中检测到［2］。增殖细胞核抗原（PCNA）是一种酸性非组蛋白核多肽，在DNA复制中起重要作用，可作为S期的特异性指标，反应细胞的增殖活性，是目前细胞增殖动力学研究常用的指标之一。本文采用免疫组织化学方法检测卵巢上皮癌中CerbB-2、P53及PCNA的表达情况，旨在探讨三者在卵巢上皮癌组织的表达及临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2009年1月～2014年1月经本院病理科诊断的卵巢上皮癌患者的手术切除标本62例为观察组，年龄21～63岁，平均（41.2±1.4）岁，术前未进行化疗或放疗。其中浆液性囊腺癌20例，黏液性囊腺癌15例，内膜样癌10例，透明细胞癌17例。按FIGO临床分期:I、II期20例，III、Ⅳ期42例。另取卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织各20例为对照。卵巢良性肿瘤患者年龄51～83岁，平均（67.3± 5.3）岁；20例正常卵巢患者年龄52～71岁，平均（58.7±15.8）岁。三组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法标本经10%福尔马林固定，固定时间大于6小时，常规石蜡包埋，作4μm连续切片，分别进行HE染色及免疫组化染色。采用Envision二步法，按试剂盒上步骤说明进行，鼠抗人CerbB-2购自北京中杉金桥生物技术有限公司，鼠抗人P53购自DAKO公司，PCNA单克隆抗体及SP试剂盒（即用型）购自福州迈新生物技术开发有限公司。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。观察细胞膜和细胞质的染色情况或计算10个代表性的高倍视野下阳性细胞数占总细胞数的百分比得出结果。CerbB-2蛋白阳性为切片中细胞膜出现棕色颗粒，其中表达阴性:胞膜或胞质均未见染色，或阳性细胞比例＜10%；弱阳性（+）:阳性细胞比例10%～30%；中度阳性（++）:阳性细胞比例31%～50%；强阳性（+++）:阳性细胞数＞50%。P53阳性染色为细胞核中出现棕黄色颗粒，P53无阳性细胞为阴性（-）、阳性细胞＜30%为（+）、30%～50%为（++）、＞50%为（+++）。PCNA阳性为细胞核呈棕黄色，计算阳性细胞占肿瘤细胞的百分比，PCNA整个切片未见阳性细胞为阴性（-）、阳性细胞＜25%为 （+）、25%～50%为 （++）、50%～75%为（+++）、＞75%为（++++）。

1.3统计学处理采用统计软件SPSS 17.0进行分析，计数资料采用χ2检验或Fishers确切概率法。

2　结果

2.1CerbB-2、P53及PCNA的表达CerbB-2在卵巢上皮癌中均为弱阳性（+）表达，其阳性表达率为75.8%，与良性肿瘤和正常卵巢组织比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织间差异无统计学意义（P＞0.05）。P53在卵巢上皮癌中均为（++），其阳性表达率为67.74%，与良性肿瘤和正常卵巢组织比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织间差异无统计学意义（P＞0.05）。PCNA在卵巢上皮癌中均为（+++），其阳性表达率为70.97%，与良性肿瘤和正常卵巢组织比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织间差异无统计学意义（P＞0.05），详见表1。

表1　CerbB-2蛋白在三种卵巢组织中的表达

2.2CerbB-2、P53及PCNA的表达与肿瘤的临床病理特征的关系CerbB-2、P53蛋白及PCNA与肿瘤的临床分期有关（P＜0.05），与其他临床病理特征无关（P＞0.05）。详见表2。

表2　CerbB-2、P53及PCNA的表达与肿瘤临床病理特征关系（n，%）

续表2

3　讨论

CerbB-2是一种分子量为185kD的跨膜糖蛋白，属于表皮生长因子受体家族中的一员。它是促癌基因，具有受体氨基酸激酶和表皮生长因子受体的活性及功能，参与细胞生长、分化的调节［3］。正常情况下处于休眠状态，主要由致癌因素以基因扩增形式激活［4］。CerbB-2过度表达可导致癌基因激活，促进癌细胞生长增殖［5］。研究表明，CerbB-2参与多种恶性肿瘤的扩增、过表达，且在卵巢癌的表达率及强度高于卵巢良性肿瘤［6］。本文结果表明，CerbB-2在卵巢上皮癌与卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中的表达有显著性差异，CerbB-2的表达与肿瘤的临床分期有关，表明CerbB-2的过度表达可作为判断卵巢上皮癌患者预后的一个有价值的指标。

P53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基因，位于人17号染色体短臂上，基因组DNA长约20kb，分为野生型和突变型。野生型P53基因抗肿瘤作用主要是使DNA损伤细胞进入G1/G0期阻滞和DNA修复程序，而不能进入S期，从而抑制细胞的恶性增生，而一旦P53发生突变，这种作用将大大降低。由于突变型P53蛋白较野生型P53蛋白的半衰期延长，故可以用免疫组织化学方法检测到。研究表明，P53在卵巢癌组织中阳性率明显高于癌旁正常组织，且与组织学分级呈正相关，提示P53异常表达在肿瘤细胞的增殖和发展中起着重要作用［7］。本文结果表明，P53在卵巢上皮癌中的阳性表达率为67.74%，与良性肿瘤和正常卵巢组织比较，差异均有统计学意义。

PCNA表达于肿瘤细胞的细胞核，是一种仅在增殖细胞中合成与表达的多肽，是DNA复制合成过程中的必需物质，并且在DNA复制过程中发挥重要作用。它在G1晚期表达大幅度增加，S期达高峰。它可作为S期的特异性标志，与肿瘤的分期、组织性分级及预后相关。加之它的表达可在石蜡切片上检测，重复性好，故在肿瘤的诊治及预后的评估中正发挥越来越重要的作用。本文结果表明，PCNA在卵巢上皮癌中的阳性表达率为70.97%，与良性肿瘤和正常卵巢组织比较，差异均有统计学意义，PCNA的表达与肿瘤的临床分期有关。

卵巢上皮癌的发生与发展是一个多基因、多因素、多阶段且有序的过程。通过对各种蛋白的不断研究，以期达到早发现、早治疗的目的。本文结果表明，联合检测CerbB-2、P53及PCNA，将有助于进一步了解卵巢上皮癌的恶性程度，对于早期诊断及判断预后具有积极的作用。

［1］Jones MB，Krutzsch H，Shu H，et al.Proteomics analysis and identification of new biomarker-Sand the rapeutic targets for invasive ovarian cancer.Protomics，2002，2（1）:76

［2］方琦，王旭芬．非激素依赖性乳腺癌CerbB－2表达与P53、Ki－67的关系研究．南方医科大学学报，2011，31（2）:380

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［4］张琼，余娟平，徐伟文.HE4在早期卵巢癌诊断中的价值.分子诊断与治疗杂志，2013，5（1）:44

［5］Zou SL，Chang XH，Ye X，et al.Effect of human epididymis protein 4 gene silencing on the malignant phenotype in ovarian cancer.Chin Med J（Engl），2011，124（19）:3133

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［7］李桂芳.卵巢癌组织中CerbB-2、P53、VEGF的表达变化及意义.山东医药，2009，49（34）:75