银杏达莫注射液肌肉刺激性及血管刺激性的试验研究

张金娟 刘 伟 刘 扬 吴 宁 熊 英 吴艳俊 李建英 吴炯树 王世平（贵州医科大学，贵州 贵阳 520025）



银杏达莫注射液肌肉刺激性及血管刺激性的试验研究

张金娟 刘 伟 刘 扬 吴 宁 熊 英 吴艳俊 李建英 吴炯树 王世平
（贵州医科大学，贵州 贵阳 520025）

目的 观察银杏达莫注射液的肌肉刺激性及血管刺激性，为其临床安全应用提供试验依据。方法 以家兔为对象，分别采用肌肉刺激性试验及血管刺激性试验观察高剂量（实验中能够实现的最大给药浓度）和低剂量（临床推荐的最大给药浓度）下舒肝宁注射液的肌肉刺激性及血管刺激性。结果 低剂量的银杏达莫注射液无明显肌肉刺激性及血管刺激性，但高剂量的银杏达莫注射液有明显的肌肉刺激性及血管刺激性。结论 提示银杏达莫注射液在临床推荐剂量和浓度下使用是安全的，但若增加药物剂量或浓度则可能出现注射部位血管和肌肉组织的损伤。

银杏达莫注射液；肌肉刺激性；血管刺激性；家兔

银杏达莫注射液为银杏提取物与双嘧达莫组成的复方制剂，其中的银杏叶提取物能够促进大脑循环代谢，改进记忆功能，降低脑血管阻力和心肌耗氧量，扩张脑血管，增加脑血流量，抑制血小板凝集，抗自由基、抗过敏、抑制致癌启动因子，抗病毒、抗癌；而双嘧达莫是一种传统的心血管系统药物，具有抗凝及扩张冠状动脉的作用；临床广泛应用于预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病。本课题按照国家食品药品监督管理局制定的《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原》对银杏达莫注射液进行了肌肉刺激性试验及血管刺激性试验，对其在肌肉刺激性及血管刺激性方面的特性进行了观察，旨在为该药的临床安全应用提供试验依据。

1　材料与方法

1.1材料：银杏达莫注射液：淡黄色澄明液体，由贵州益佰制药股份有限公司提供，批号：20120102；规格：10毫升/支；0.9%氯化钠注射液，贵州科伦药业有限公司，批号：20121124。家兔，体质量2～2.5 kg，贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（黔）2002-0001。家兔每笼1只适应性饲养3 d后用于实验。显微镜：UB203型，重庆澳浦光电技术有限公司；BI-2000医学图像分析系统：成都泰盟科技有限公司。

1.2方法

1.2.1肌肉刺激性试验：取家兔8只，体质量2～2.5 kg，♀♂各半。随机分成高剂量组和低剂量组，每组4只，♀♂各半。于高剂量组家兔的左侧大腿股四头肌内注射银杏达莫注射液原液（浓度按体积分数计为100%）1 mL；低剂量组家兔的左侧大腿股四头肌内注射0.9%氯化钠注射液稀释后的银杏达莫注射液（稀释比例为20∶1，浓度按体积分数计为4.8%）1 mL；两组动物的右侧大腿相同部位均注射0.9%氯化钠注射液1 mL作对照。注射给药后24 h、48 h肉眼观察注射局部有无充血、红肿、变性、坏死等异常。观察后麻醉、处死动物。解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，按表1计算相应的反应级。观察后取注射部位组织放入10%福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察其病理学改变。

表1　肌肉刺激反应分级标准

1.2.2血管刺激性试验：取家兔16只，体质量2～2.5 kg，♀♂各半。将家兔随机分成高剂量组和低剂量组，每组8只，♀♂各半。分别在高、低剂量组家兔的左侧耳缘静脉注射高浓度及低浓度（浓度同肌肉刺激性试验）银杏达莫注射液10 mL/kg，在两组动物的右侧耳缘静脉均注射0.9%氯化钠注射液10 mL/kg作自身对照。每天给药1次，连续5 d。每天给药前及末次给药后48 h、96 h肉眼观察注射部位局部血管刺激情况。末次给药96 h并观察后，高、低剂量组各处死4只家兔，剪取耳缘静脉周围的耳廓组织，放入10%福尔马林溶液中固定，石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察耳缘静脉及其周围组织的病理学改变。余下的动物继续观察至末次给药后21 d再处死，并按前述方法对耳缘静脉及其周围组织进行组织学观察。

1.2.3统计学处理：实验数据采用SSPS17.0软件进行处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05具有统计学差异。

2　结 果

2.1肌肉刺激性试验结果

2.1.1肉眼观察结果：肌内注射给药后，各组动物均活动正常，无跛行，进食、饮水、大小便等一般情况均正常。于注射后24 h及48 h肉眼观察家兔注射部位时，均未见注射部位红肿、皮下出血及其他异常。处死动物，分别剖取股四头肌，纵向切开，肉眼观察注射部位的反应情况如下：低剂量组有1只家兔的左侧（给低剂量银杏达莫注射液）股四头肌内有一明显的出血点，直径约0.2 cm，无充血、水肿、变性及其他改变；其余家兔左右两侧股四头肌均无明显异常，左右两侧比较无明显差异（图1A、B）。高剂量组有1只家兔右侧（给0.9%氯化钠注射液）股四头肌内出现轻度出血现象，范围约0.5 cm×0.9 cm，无充血、水肿、变性、坏死等表现；其余家兔的右侧（给0.9%氯化钠注射液）股四头肌内未见明显改变；高剂量组的4只家兔左侧（给高剂量银杏达莫注射液）股四头肌均出现不同程度的出血、充血、水肿及肌肉白色样改变，病变面积在0.5 cm×1.0 cm～0.5 cm×2.5 cm；左右两侧股四头肌表现差异明显（图1C、D）。肌肉刺激反应分级结果见表1。

表1　各组家兔股四头肌注药后肌肉刺激反应分级表

2.1.2镜下观察结果：光镜下可见，低剂量组家兔的左右两侧股四头肌标本表现为偶有肌纤维断裂、溶解，有轻度变性，但肌束基本完整，无间质水肿、炎细胞浸润等病变；左右两侧肌肉组织表现无明显差异。高剂量组家兔右侧股四头肌表现与低剂量组一致，高剂量组家兔左侧（给高剂量银杏达莫注射液）股四头肌注射部位肌肉组织内则出现肌纤维明显变性坏死，肌束不完整，肌束间质明显增宽，病灶内可见散在分布的炎细胞及红细胞浸润等改变。高剂量组左侧肌肉组织的损伤程度明显重于右侧，两侧表现差异明显。见图2。

图1　家兔股四头肌注药后肉眼观察结果［A为低剂量组家兔左侧股四头肌（低剂量银杏达莫注射液）；B为低剂量组家兔右侧股四头肌（0.9%氯化钠注射液）；C为高剂量组家兔左侧股四头肌（高剂量银杏达莫注射液）；D为高剂量组家兔右侧股四头肌（0.9%氯化钠注射液）］

图2　家兔股四头肌注射部位石蜡切片HE染色［A为低剂量组家兔左侧（低剂量银杏达莫注射液）注射部位股四头肌；B为低剂量组家兔右侧（0.9%氯化钠注射液）；C为高剂量组家兔左侧（高剂量银杏达莫注射液）注射部位股四头肌；D为低剂量组家兔右侧（0.9%氯化钠注射液）注射部位股四头肌］

2.2血管刺激性试验结果

2.2.1肉眼观察结果：每次给药前及末次给药后48 h、96 h对肉眼观察动物耳缘经脉进行观察，低剂量组家兔左侧耳缘静脉（给低剂量银杏达莫注射液）及两组家兔右侧耳缘静脉（给0.9%氯化钠注射液）可见针刺部位有注射时留下的“针疤”，“针疤”周围偶有血管轻度扩张现象，而针刺部位的近心端静脉未见明显的充血水肿或血栓形成。高剂量组左侧耳缘静脉（给高剂量银杏达莫注射液）针刺部位除有“针疤”外，还可见静脉内有明显的血栓现象。末次给药后96 h仍未处死的动物左右耳缘静脉注射部位的“针疤”逐渐愈合；末次给药后21 d，低剂量组左侧耳缘静脉（给低剂量银杏达莫注射液）及高、低剂量两组家兔的右侧耳缘静脉（给0.9%氯化钠注射液）整条静脉均无充血、水肿、血栓形成等现象。高剂量组左侧耳缘静脉（给高剂量银杏达莫注射液）依然可见有血栓存在。

2.2.2镜下观察结果：给药96 h后，在低剂量组左（给低剂量银杏达莫注射液）及两剂量组右侧（给0.9%氯化钠注射液）耳廓组织样本中，有个别样本可见血管有轻微破损、血管壁不完整，红细胞逸出血管外，但无管壁增厚及其他异常，其余样本的血管壁完整、无增厚，管腔内无血栓，静脉周围组织均无异常。高剂量组左侧（给高剂量银杏达莫注射液）耳缘静脉明显扩张，血管内可见大量红细胞聚集，新鲜血栓形成。给药后21 d，低剂量组左侧（给低剂量银杏达莫注射液）及高、低剂量组右侧（给0.9%氯化钠注射液）耳缘静脉及周围组织均表现正常。高剂量组左侧（给高剂量银杏达莫注射液）耳缘静脉血管内可见到血栓内部形成裂隙或新的血管，使血栓机化再通。见图3。

3　讨 论

静脉给药可使药物直接进入血液循环，作用迅速。对于生物利用度低又需要迅速发挥作用的药物、急重患者及因昏迷而不能吞咽的患者，常采用静脉给药方式。但静脉给药时，高浓度的药液直接与血管内壁接触，可能会造成血管内皮损伤，引发红肿、热痛和瘙痒等不良反应，即临床表现的静脉炎［2］。此外，在静脉给药过程中常常会出现由于静脉穿刺技术等原因造成药物外漏，可能导致穿刺部位局部组织的刺激性损伤。国家食品药品监督管理局下发的《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》中明确规定［3］：中药注射剂应进行血管刺激性试验及肌肉刺激性试验。本课题按该指导原则的要求对银杏达莫注射液进行了血管刺激性试验及肌肉刺激性试验。

图3　给药后96 h及21 d家兔耳缘静脉石蜡切片HE染色（100×）［A为低剂量组家兔给药后96 h左侧（给低剂量银杏达莫注射液）耳缘静脉；B为低剂量组家兔给药后96 h右侧（给0.9%氯化钠注射液）耳缘静脉；C为高剂量组家兔给药后96 h左侧（给低剂量银杏达莫注射液）耳缘静脉；D为高剂量组家兔给药后96 h右侧（给0.9%氯化钠注射液）耳缘静脉；E为低剂量组家兔给药后21 d左侧（给低剂量银杏达莫注射液）耳缘静脉；F为高剂量组家兔给药后21 d右侧（给0.9%氯化钠注射液）耳缘静脉；G为低剂量组家兔给药后21 d左侧（给低剂量银杏达莫注射液）耳缘静脉；H为低剂量组家兔给药后21 d右侧（给0.9%氯化钠注射液）耳缘静脉。图中←所示为静脉］

本试验中设计了两个剂量组：以临床推荐的最大给药浓度为低剂量组，实验中能够实现的最大给药浓度为高剂量组。设计临床推荐的最大给药浓度为低剂量，主要是为了观察受试药物在临床使用剂量下是否存在肌肉及血管刺激性；在此基础上又设计了实验中能够实现的最大给药浓度为高剂量，是为了最大限度地暴露受试药物可能存在的刺激性，以便全面评估其安全性，为指导临床应用提供依据。银杏达莫注射液临床推荐的最大给药浓度（按体积分数计）约为4.8%；银杏达莫注射的原液浓度（即体积分数为100%）是实验中能够实现的最大给药浓度。

在肌肉刺激性试验中，低剂量组注射部位肌肉组织有轻度损伤表现，损伤程度与对照侧无明显差异，与文献报道一致［4］，认为这是注射造成的机械性损伤，而并非药物所致。因此，可以认为低剂量银杏达莫注射液无明显肌肉刺激性。高剂量组注射部位肌肉组织出现了明显的变性坏死表现，且呈现出以肌纤维的变性坏死为主、病灶内可见散在的多少不等的炎细胞浸润及红细胞浸润的特点，损伤程度明显重于对照侧，故认为高剂量银杏达莫注射液具有肌肉刺激性。

血管刺激性试验中，低剂量组给药部位血管及周围组织未见异常表现，可认为低剂量银杏达莫注射液无明显血管刺激性。高剂量组给药后96 h，耳缘静脉扩张、血管内形成新鲜血栓，血管周围组织未见明显异常；给药后21 d，静脉内的血栓未被吸收而是以机化再通的方式修复。这些结果则说明高剂量的银杏达莫注射液，有明显的血管刺激性。

综上所述，低剂量的银杏达莫注射液无明显血管刺激性及肌肉刺激性，但高剂量的银杏达莫注射液有明显的血管刺激性及肌肉刺激性。提示银杏达莫注射液在临床推荐剂量和浓度下使用是安全的，但若增加药物剂量或浓度则可能出现注射部位血管和肌肉组织的损伤。这为银杏达莫注射液的临床应用提供了重要启示：虽然在临床推荐的剂量下使用银杏达莫注射液是相对安全的，但随着剂量的增加就可能会表现出对注射部位局部组织产生损害，故临床应用银杏达莫注射液时，应严格控制药物的剂量和浓度，不可随意增加药物剂量和浓度，否则很可能带来安全性问题。

［1］ 金毅,王晓炜,王平.中日肌肉刺激性试验的比较研究及探讨［J］.中国新药杂志,2012,14（21）：1587-1590.

［2］ 吴双,蔡伟惠,金方.注射剂处方筛选中血管刺激性评价研究进展［J］.中国医药工业杂志,2012,43（3）：222-226.

［3］ 《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则［M］.北京： 中国医药科技出版社,2006： 227-242.

［4］ 金毅,王平,王晓炜,等.对肌肉刺激性试验在病理学方面的探讨［J］.今日药学,2012,22（5）：270-271.

R282.710.7

B

1671-8194（2016）20-035-02