刺五加茎总木脂素含量测定*

张　颖，岳姝岐，李瑞芳，孙　晖

（黑龙江中医药大学 中药血清药物化学重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040）

刺五加茎总木脂素含量测定*

张颖，岳姝岐，李瑞芳，孙晖

（黑龙江中医药大学 中药血清药物化学重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040）

目的：建立紫外分光光度法测定刺五加茎中总木脂素含量的方法。方法：采用紫外分光光度法以刺五加苷E为对照品，在最大吸收波长处测定。结果：刺五加苷E显色后在560nm处有最大吸收，在6.93～23.1μg·mL-1范围内呈良好线性关系（r=0.9995），平均回收率为99.28%（n=6）。结论：本方法可以快速准确的测定刺五加茎中总木脂素的含量。

刺五加；木脂素；含量测定

刺五加为五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus（Rupr.et Maxim.）Harms的干燥根、根茎或茎，具有补肝肾、强筋骨的功效［1］。实验室前期对刺五加茎化学成分进行了研究，结果表明：含有大量的木脂素类化合物，并发现口服后在体内直接作用物质主要是其木脂素类成分的代谢物，提示总木脂素类成分是表达刺五加茎临床疗效的主要药效物质基础［2］。刺五加茎中的木脂素类成分具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒抗菌、抗骨质疏松、降血糖、神经保护、心血管保护、雌激素样作用［3-10］。而在以往的文献报道中，仅仅是单独测定刺五加中刺五加苷E的含量。因此，本实验选择紫外分光光度法测定刺五加茎中总木脂素含量。

1　实验部分

1.1仪器与试药

UVmini-1240紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；分析天平PB1501-N型（瑞士梅特勒）；

刺五加茎采于黑龙江，经王喜军教授鉴定为正品；刺五加苷E对照品（四川省维克奇生物科技有限公司）；变色酸（天津市致远化学试剂有限公司）；其他所用试剂均为分析纯。

1.2试剂溶液的制备

1.2.1对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的刺五加苷E对照品适量，置25mL容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，溶解。得浓度为0.231mg·mL-1的对照品溶液。

1.2.2供试品溶液的制备取干燥刺五加茎粉末（40目）约5g，精密称定，置于250mL圆底烧瓶中，加入60%乙醇50mL回流提取2h，抽滤，置于250mL容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2　方法与结果

2.1检测波长的选择

在400～800nm波长范围内分别扫描刺五加苷E对照品溶液及供试品溶液发现两者在560nm处均有一个吸收峰且峰形变化平缓便于定量测定。因此，将560nm作为检测波长。

2.2含量测定方法（变色酸法）

精密吸取供试品溶液及刺五加苷E对照品溶液置于10mL具塞试管中，蒸干，依次加入0.5mL 10%变色酸溶液，3mL浓H2SO4，摇匀后加入1.5mL蒸馏水，密封试管口，摇匀，置于试管架上，放入水浴锅，沸水浴加热30min，取出后直流水迅速冷却，摇匀，空白试剂调零，560nm处测定。

2.3刺五加苷E标准曲线的绘制

精密吸取刺五加苷E对照品溶液150、200、250、300、350、400、450、500μL，分别置于10mL具塞试管中，按“2.2”项下操作。空白试剂调零，在560nm处测定吸光度，以对照品吸光度为纵坐标，质量浓度（μg·mL-1）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=0.0295x-0.0048，r=0.9995。结果表明，刺五加苷E在6.93～23.1μg·mL-1浓度范围内具有良好的线性关系，标准曲线见图1。

图1　刺五加苷E的标准曲线Fig.1　Standard curve of Eleutheroside E

2.4方法学考察

2.4.1精密度试验精密吸取对照品溶液200μL，按“2.2”项下操作测定吸光度，连续测定6次，其RSD值为0.28%，说明仪器精密度良好，所测数据准确可靠，结果见表1。

表1　精密度试验结果Tab.1　Results of precision tests

2.4.2稳定性试验精密吸取供试品溶液200μL，按“2.2”项下操作测定吸光度，每隔20min测定一次吸光度值，其RSD值为0.78%，表明供试品溶液显色后120min内稳定，结果见表2。

表2　稳定性试验结果Table.2　Results of stability tests

2.4.3加样回收率试验精密吸取6份已知总木脂素含量的供试品溶液各100μL，精密加入一定量的对照品溶液，按“2.2”项下操作测定吸光度，根据回归方程计算回收率，其RSD值为2.41%，表明已建立的含量测定方法结果准确，结果见表3。

表3　加样回收率试验结果Table.3　Results of recovery tests

2.5样品测定

取干燥刺五加茎粉末（40目）3份，每份约5g，精密称定，按“1.2.2”项制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液200μL，按“2.2”项下操作测定吸光度。结果见表4。测得供试品溶液中总木脂素的平均含量为1.62%。

表4　刺五加茎总木脂素的含量测定结果（n=3）Table.4　Contents of lignans in stems of Acanthopanax senticosus（n=3）

3　结论

利用变色酸比色法测定刺五加茎总木脂素含量。其原理为：木脂素类化合物的化学结构上多具有1个亚甲二氧基（-OCH2-O-），浓H2SO4可使其水解并定量释放出甲醇，后者可与变色酸反应产生紫红色。在一定波长处测定其吸光度，即可计算出总木脂素的含量。经方法学考察，其精密度、稳定性、重复性RSD值分别为0.28%、0.78%、0.82%，回收率为99.28%，供试品溶液在显色120min内稳定，表明建立的测定方法重复性好，测定结果准确可靠，简便易行，可用于刺五加茎总木脂素含量的测定。为刺五加茎总木脂素提取及富集工艺奠定基础。

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Determination of content of total lignans in the stem of acanthopanax senticosus*

ZHANG Ying，YUE shu-qi，LI Rui-fang，SUN Hui
（National TCM Key Laboratory of Serum Pharmacochemistry，Hei Long Jiang University of Traditional Chinese Mdicine，Harbin 150040，China）

Objective：established A UV spectrophotometry method for the determination of total ignin in the stem of acanthopanax senticosus was.Method：Use ultraviolet spectrophotometer to measure total lignans in the stem of acanthopanax senticosus，eleutheroside E as reference substances，at the maximum absorption wavelength，respectively.Result：eleutheroside E with maximum absorption at 560nm，it had a good linear relationship within the range of 6.93～23.1ug·mL-1（r=0.9995）and the average recovery was 99.28%（n=6）.Conclusion：The method is simple，accurate，and can be used for the quantitative determination of total ignin in the stem of acanthopanax senticosus.

acanthopanax senticosus；lignans；determination

R9

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20160728

2016-05-09

国家科技支撑计划（2011BAI03B03）刺五加产业关键技术、综合开发利用研究

张颖（1979-），女，在读博士研究生，从事中药质量控制及中药血清药物化学研究。
导师简介：孙晖（1963-），女，教授，博士研究生导师，从事中药质量控制、中药血清药物化学、方证代谢组学研究。