老年慢性支气管炎患者耐甲氧西林葡萄球菌的检测

杨举红

(河南省洛阳市第一人民医院检验科　471002)



老年慢性支气管炎患者耐甲氧西林葡萄球菌的检测

杨举红

(河南省洛阳市第一人民医院检验科471002)

目的研究老年慢性支气管炎患者耐甲氧西林葡萄球菌的感染情况，并进行耐药性分析。方法对纳入病例采用法国生物梅里埃API细菌自动分析软件进行咽拭子培养、鉴定，就其中分离得到的共362株葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的分布规律及耐药性进行回顾性分析。结果在被分离的362株葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌171株，分离率为47.23%，耐甲氧西林葡萄球菌对左氧氟沙星、苯唑西林、克林霉素、阿奇霉素、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐药性与凝固酶阴性葡萄球菌的差异有统计学意义(P<0.05)。结论耐甲氧西林葡萄球菌是老年慢性支气管炎患者的重要病原菌，且对常用抗菌药物呈多重耐药性，依照药敏试验使用抗菌药物是抗感染治疗有效的关键。

上呼吸道感染；耐甲氧西林葡萄球菌；耐药性

慢性支气管炎是由于感染或非感染因素引起的气管-支气管黏膜及其周围组织的慢性非特异性炎症。其病理特点是支气管黏液腺增生、黏液分泌增加。临床上表现为连续2年以上，每年持续3个月以上的咳嗽、咳痰或气喘等症状[1-2]。本病起病隐袭，早期症状轻微，多在冬季发作，春暖后缓解；后期症状加重并常年存在。病程迁延反复，若不及时有效治疗，往往可并发肺气肿和肺源性心脏病，进而危及患者生命。老年慢性支气管炎起病隐袭，大多起病于中青年，也有少数在老年期起病。患者多于寒冷季节发病，出现咳嗽、咳痰，尤以晨起为著，痰呈白色黏液泡沫状。随着病情发展，后期终年咳嗽、咳痰不停，冬春加重。部分患者的发作以呼吸道急性感染为前驱，此时可能出现发热、上呼吸道卡他症状等，继而咳嗽、咳痰显著加重，痰量增加，痰变黏稠或黄色脓性，少数还可见痰中带血。喘息型慢性支气管炎患者继咳嗽、咳痰加重后常有哮喘样发作。老年患者常合并有肺气肿，往往气短气促明显。资料显示：老年慢性支气管炎患者往往在病情初始期未得到有效控制逐渐演化而至，且本病还与常见病原菌感染有关[3-4]。为此，本研究专门针对老年慢性支气管炎患者病原菌中耐甲氧西林葡萄球菌进行分析，以期为该类患者治疗提供帮助。

1　资料与方法

1.1一般资料所有研究对象均来自本院2013年1月至2015年12月门诊或住院的老年慢性支气管炎患者，共1 080例，其中男657例、女423例，男女比为1.55∶1，年龄47～76岁、平均(58.8±11.6)岁；所有患者生活方式及体质量分布无特殊性，具有可比性。

1.2仪器与试剂实验仪器采用法国生物梅里埃API自动细菌鉴定分析软件对检测标本进行细菌学检测，实验试剂采用梅里埃原机配套试剂。大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌 ATCC700603购于温州康泰生物科技有限公司。

1.3方法对来本院就诊的老年慢性支气管炎患者，取咽拭子进行细菌培养，对可疑致病菌经过转种及纯培养，转种菌株于法国生物梅里埃API生化鉴定及药敏试验反应板上，于37 ℃环境培养18～24 h后，经过仪器自动判读得出细菌鉴定及药敏试验结果，对培养结果阳性者中分离出的葡萄球菌进行耐甲氧西林检测，结果中剔除半个月内两次检测结果相同的患者，统计分析其耐药特性。采用纸片扩散法结合琼脂筛选法对实验菌株进行耐甲氧西林葡萄球菌鉴定，操作如下：从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland，具体操作同常规纸片法药敏试验。指示纸片为每片1 μg苯唑西林纸片，将待检菌株接种于非选择性平板，于35 ℃培养24 h，当指示菌为金黄色葡萄球菌时，抑菌圈直径判定结果，当抑菌圈直径≥13 mm为敏感、11～12 mm为中介、≤10 mm为耐药；当指示菌为凝固酶阴性葡萄球菌时，则抑菌圈直径≥18 mm为敏感，≤17 mm为耐药。对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为耐甲氧西林葡萄球菌。如果纸片试验结果中介时，则用琼脂筛选法鉴别，培养基为MH琼脂+6 μg/mL苯唑西林+4%NaCl，调整菌液浓度0.5McFarland，于35 ℃孵育24 h，有任何生长即使一个菌落均应判定为耐甲氧西林葡萄球菌。培养鉴定结果依据NCCLS标准判读鉴定结果，全程采用大肠埃希菌ATCC25922为三维试验指示菌,肺炎克雷伯菌 ATCC700603为ESBLs阳性对照菌作为质控菌株，均购于温州康泰生物科技有限公司。

1.4诊断标准沿用国内公认的标准。(1)单纯型：该类患者没有明显的呼吸道气流阻塞表现，也没有明显的气道高反应性，病损主要存在于大气道。患者主要表现为咳嗽、咳痰，没有呼吸困难、喘息、肺功能损害小、没有低氧血症和二氧化碳潴留。该型多见于成人男性。(2)喘息型：该类患者有持续气流阻塞表现，又有明显的气道高反应性。在慢性咳嗽、咳痰的基础上，同时伴有发作性支气管痉挛、支气管壁水肿、黏液分泌增加。该型多见于老年吸烟者。它的判别要点是24 h最大呼气峰流量(PEF)变异率≥15%，或支气管舒张试验阳性，或强化平喘治疗阳性。(3)阻塞型：该类患者气道有不可逆性狭窄。狭窄部位多在小气道，其终末细支气管慢性炎症、纤维化、杯状细胞增生、平滑肌肥厚等病理变化突出，肺功能呈进行性损害，常伴有低氧血症和高碳酸血症，易并发肺气肿和肺心病。该型相对较少，却预后严重。上述3型患者持续时间均超过2年。

1.5统计学处理对结果均采用WHONET4.0软件进行分析处理。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1耐甲氧西林葡萄球菌与普通凝固酶阴性葡萄球菌耐药性在分离所得的362株葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌171株，分离率为47.23%，耐甲氧西林葡萄球菌对左氧氟沙星、苯唑西林、克林霉素、阿奇霉素、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐药性与凝固酶阴性葡萄球菌相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　耐甲氧西林葡萄球菌与普通凝固酶阴性葡萄球菌耐药性比较(%)

注：R表示耐药；I表示中介。与凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性相比，*P<0.05。

2.23种老年慢性支气管炎分型患者的耐甲氧西林葡萄球菌分离率单纯型患者耐甲氧西林葡萄球菌分离率为19.8%，喘息型为38.5%，阻塞型为56.4%，单纯型患者耐甲氧西林葡萄球菌分离率明显低于喘息型(P<0.05)，阻塞型患者耐甲氧西林葡萄球菌分离率明显高于单纯型和喘息型，差异均有统计学意义(P<0.05)。

3　讨　论

葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的致病菌，自从20世纪40年代青霉素问世以来，葡萄球菌引起的感染性疾病得到较大程度的控制，但随着青霉素的广泛使用，有些葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β-内酰胺环，表现为对青霉素耐药。科学家研究出一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林。1959年应用于临床后曾有效地控制了葡萄球菌产酶株的感染，但自英国的Jevons首次发现了耐甲氧西林葡萄球菌以后，耐甲氧西林葡萄球菌感染几乎遍及全球[3-4]，已成为医院内和社区感染的重要病原菌之一，为此，检测患者感染菌种及其耐药性显得意义重要。

耐甲氧西林葡萄球菌耐药特点表现为不均一耐药性或广谱耐药性。本次回顾性分析发现：耐甲氧西林葡萄球菌中，一部分对甲氧西林高度耐药，部分却表现为敏感。但是，研究中我们同样发现，少数耐甲氧西林葡萄球菌菌株体外药敏结果敏感但在患者体内使用无反应[5-7]，这一现象值得临床关注，提示临床医生在治疗该类患者时，若依据药敏结果治疗无效，应该适时更换其他敏感抗菌药物。其次，耐甲氧西林葡萄球菌广谱耐药性，也是本次分析的要点。其主要表现在：耐甲氧西林葡萄球菌除对甲氧西林耐药外，对其他所有与甲氧西林相同结构的β-内酰胺类和头孢类抗菌药物均耐药，耐甲氧西林葡萄球菌通过改变抗菌药物作用靶位，产生修饰酶，降低膜通透性产生大量PABA等不同机制，对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、磺胺类、利福平均产生不同程度的耐药，唯对万古霉素敏感，这一现象给临床治疗耐甲氧西林葡萄球菌导致的感染带来挑战。与凝固酶阴性葡萄球菌相比，耐甲氧西林葡萄球菌的耐药更广泛，其对苯唑西林、左氧氟沙星、克林霉素等均有较高耐药性，这一结果与文献资料相近[8-10]。研究认为：耐甲氧西林葡萄球菌的耐药机制与染色质介导有关，同时与细菌本身产生的青霉素结合蛋白(PBPS)关系密切，后者与β-内酰胺类抗菌药物亲和力很低,因而很少或不被β-内酰胺类药结合。在β-内酰胺类抗菌药物存在的情况下，细菌仍能生长，故而出现耐药性。耐甲氧西林葡萄球菌对青霉素G和苯唑西林已经表现出100.0%的耐药性，提示临床医生应该避免经验性使用该药物。

本研究中发现：阻塞型老年慢性支气管炎患者耐甲氧西林葡萄球菌分离率显著高于喘息型及单纯型，且患者病情明显反复，提示临床医生在针对该类患者进行治疗时，应该优先考虑选用对耐甲氧西林葡萄球菌敏感的抗菌药物进行治疗。

综上所述，耐甲氧西林葡萄球菌感染已越来越常见，预防耐甲氧西林葡萄球菌成为每个临床医生面临的艰巨任务。对此建议：合理使用抗菌药物，杜绝滥用抗菌药物的行为；针对特殊病患如烧伤患者、ICU患者，宜尽早进行细菌培养，以便发现耐甲氧西林葡萄球菌菌株后及早控制并隔离治疗。

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Detection of methicillin-resistant staphylococcus in elderly patients with chronic bronchitis

YANG Juhong

(DepartmentofClinicalLaboratory,LuoyangMunicipalFirstPeople′sHospital,Luoyang,Henan471002,China)

ObjectiveTo study the infection situation of methicillin-resistant staphylococcus in the elderly patients with chronic bronchitis and to analyze its drug resistance.MethodsThe included cases adopted the French Biomerieux API bacterial automatic analysis software to conduct the throat swab culture and identification.Then in 362 isolated strains of staphylococcus,the distribution rule and drug resistance of methicillin-resistant staphylococcus strains were retrospectively analyzed.ResultsAmong 362 isolated strains of staphylococci,171 strains were methicillin-resistant staphylococcus,the isolation rate was 47.23%,its resistance to levofloxacin,oxacillin,clindamycin,azithromycin,cefepime,piperacillin/tazobactam had statistical difference compared with those of coagulase negative staphylococcus(P<0.05).ConclusionMethicillin-resistant staphylococcus is an important pathogen in elderly patients with chronic bronchitis,and has multi-drug resistance to commonly used antibiotics,therefore using antibiotics according to the drug susceptibility test results is the key to effective anti-infection treatment.

upper respiratory tract infection;methicillin-resistant staphylococcus;drug resistance

2016-02-01修回日期：2016-05-12)

杨举红，女，主管检验技师，主要从事临床免疫及微生物方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.028

A

1673-4130(2016)15-2124-02

·论著·