胃癌组织中Kiss-1 mRNA与Notch1 mRNA的表达及意义

段志英　李　超　赵云霞　范红云　韩双双　于卫芳

(河北医科大学第一医院消化内科，河北　石家庄　050031)



胃癌组织中Kiss-1 mRNA与Notch1 mRNA的表达及意义

段志英李超1赵云霞1范红云韩双双1于卫芳1

(河北医科大学第一医院消化内科，河北石家庄050031)

目的探讨Kiss-1 mRNA与Notch1 mRNA在胃癌组织中的表达及意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌和癌旁正常组织中Kiss-1 mRNA与Notch1 mRNA的表达情况，分析其与临床病理特征之间的关系。结果Kiss-1 mRNA在胃癌组织中的表达较癌旁正常组织中降低(P<0.05)；Kiss-1 mRNA的表达与胃癌的淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05)，与胃癌的浸润深度、分化程度、远处转移无关(P>0.05)；Notch1 mRNA在胃癌组中的表达较癌旁正常组织升高(P<0.05)；Notch1 mRNA的表达与胃癌的淋巴结转移、TNM分期、分化程度密切相关(P<0.05)，与胃癌的浸润深度、远处转移无关(P>0.05)。结论Kiss-1 在胃癌的发病过程中发挥抑癌基因作用，并通过抑制转移来影响胃癌的预后；Notch1在胃癌的发病过程中发挥癌基因作用，有潜力成为早期诊断胃癌的新型肿瘤标记物。

胃癌；Kiss-1 mRNA；Notch1 mRNA；实时荧光定量聚合酶链反应；癌转移

2014年中国肿瘤登记中心数据显示，中国每年新发胃癌24万例，在恶性肿瘤中占13.06%，每年因胃癌死亡人数15万例，死亡率为17.8%〔1〕。研究证实〔2〕，Kiss-1基因在多种恶性肿瘤发病过程中起抑癌作用。Notch1在大多数恶性肿瘤中发挥促癌作用，而在少数恶性肿瘤(如乳腺癌、甲状腺癌、肝癌和肺癌等)中则发挥抑癌作用〔3〕。本研究观察胃癌组织及癌旁正常组织Kiss-1 mRNA和Notch1 mRNA表达，并分析其与临床病理特征之间关系，探讨两者在胃癌发病过程中的作用。

1　资料与方法

1.1一般资料2013年10月至2014年10月我院34例胃癌根治术患者，术前均未接受放疗、化疗。其中男22例，女12例；年龄49～83岁，平均(66.06±9.18)岁。按照标本取材部位分为胃癌组和癌旁正常对照组。胃癌组织取自肿瘤中心部位、癌旁正常组织取自距离肿瘤边缘5 cm处，均经病理证实诊断。标本离体后迅速置于液氮中，于-80℃冰箱保存备用。

1.2主要试剂反转录试剂盒购自美国GeneCopoeia公司；Trizol、GAPDH(内参)、Kiss-1和Notch1引物均购自美国 Invitrogen 生物工程公司。Kiss-1引物序列：正义：CCACCCTCTGGACATTC，反义：GCCGAAGGAGTTCCAGTT。Notch1引物序列：正义：CGAGGTCAACACAGACGAGTG。反义：GCACAGATGCC-CAGTGAAG。

1.3方法TrizoL法提取胃癌组织及癌旁正常组织中的总RNA。根据美国GeneCopoeia公司提供的反转录试剂盒操作说明书进行反转录。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胃癌组织及癌周边正常组织中的Kiss-1 mRNA、Notch1 mRNA的表达情况。反应条件：95℃预变性10 min，然后按95℃15 s，60℃30 s，72℃10 s进行40个循环，重复3次取平均值。靶基因的表达量采用2-△CT表示，其中ΔCT为CT靶基因与CT内参的差值。

1.4统计学方法应用SPSS16.0统计软件进行t检验或Wilcoxon秩和检验；两组间独立样本采用 Mann-WhitneyU检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1Kiss-1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义Kiss-1 mRNA在胃癌组、癌旁正常对照组中的表达量〔0.033 7(0.003 8～0.377 1)，0.576 3(0.167 9～1.357 4)〕差异显著(Z=-3.548，P=0.028)。

2.2Kiss-1 mRNA与临床病理特征的关系Kiss-1 mRNA在胃癌有淋巴结转移组、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期组中的表达显著低于无淋巴结转移组及TNM分期Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05)。Kiss-1 mRNA表达与性别、年龄，及肿瘤的浸润深度、分化程度、远处转移无关(P>0.05)，见表1。

2.3Notch1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义Notch1 mRNA在胃癌组、癌旁正常对照组的表达量〔0.310 9(0.046 1～1.854 1)、0.031 3(0.004 8～0.302 4)〕差异显著(Z=-2.197，P=0.028)。

2.4Notch1 mRNA与临床病理特征的关系Notch1 mRNA在胃癌有淋巴结转移组、低分化组及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期组中的表达显著高于无淋巴结转移组、中高分化组及Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05)。Notch1 mRNA的表达与患者的性别、年龄及肿瘤的浸润深度、远处转移分组无关(P>0.05)，见表1。

表1　Kiss-1 mRNA和Notch1 mRNA表达与胃癌临床病理特征之间的关系

3　讨　论

癌基因和抑癌基因的表达变化在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。Kiss-1基因是首先在黑色素瘤细胞株中被发现的肿瘤转移抑制基因，其定位于染色体1q32-q41，编码1个包含145个氨基酸组成的亲水性蛋白，在多数恶性肿瘤中发挥着抑癌基因的作用〔4〕。Notch1最初是在人类T淋巴母细胞白血病中被鉴定出来，并证实其信号通路与肿瘤存在关系〔5〕。Buchler等〔6〕指出，Notch1在胰腺癌组织中呈高表达，发挥癌基因作用。Lu等〔7〕研究发现，Notch1信号途径的激活引起食管癌EC9706细胞的凋亡，提示Notch1在食管癌中发挥抑癌基因作用。目前，Notch1在癌症发生过程中究竟发挥抑癌或促癌作用，并无定论。

本研究提示Kiss-1与胃癌的生物学行为密切相关，在胃癌发病过程中可能发挥抑癌基因的作用。Dhar等〔8〕通过核酸酶保护分析法检测Kiss-1在40例胃癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，显示Kiss-1在胃癌组织中呈低表达。Mitchell等〔9〕也得到相似的实验结果。两项研究同样印证了本组关于Kiss-1在胃癌的发病过程中发挥抑癌基因作用的观点。本文提示Kiss-1可能通过抑制胃癌的转移来影响预后，有潜力成为判断胃癌预后的生物学指标。Mitchell等〔9〕的研究结果显示，Kiss-1的表达随着胃癌进展而逐渐降低，并与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、远处转移等关系密切。冯斌〔10〕发现，Kiss-1 mRNA的低表达直接关系到患者的5年存活率，并与胃癌的浸润和淋巴结转移密切相关。两项研究结果均指出，Kiss-1的表达与胃癌的分期及转移密切相关，印证了本组结论。

目前，Notch1究竟在胃癌中发挥癌基因还是抑癌基因作用，尚不明确。本组结果提示Notch1 mRNA在胃癌发病过程中发挥癌基因的作用，Notch1 mRNA的高表达促进了胃癌进展，与胃癌的恶性程度密切相关，有潜力成为胃癌早期诊断、判断恶性程度和预后的新型肿瘤标记物。张佑蕊等〔11〕发现，Notch1在胃癌伴有淋巴结转移组呈高表达，而在胃癌无淋巴结转移组呈相对低表达；在TNM分期分组中，Notch1 mRNA表达量从Ⅰ期到Ⅳ期组逐渐升高，各期之间表达量存在显著差异。李大卫等〔12〕发现，Notch1在胃癌组织中的阳性率明显高于正常胃黏膜组织，并证实其高表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关。两项研究结果与本组结论相似，印证了Notch1在胃癌发病过程中的癌基因作用及与预后的关系。

综上，在胃癌的发病过程中，Kiss-1起着抑癌基因的作用，有潜力成为预测胃癌预后的指标。Notch1在胃癌的发生发展过程中发挥癌基因作用，其高表达与胃癌恶性程度及预后相关，有潜力成为胃癌的新型肿瘤标志物。

1邹文斌，李兆申.中国胃癌发病率及死亡率研究进展〔J〕.中国实用内科杂志，2014;12(4)：36-7.

2Li N，Wang HX，Zhang J，etal.Kiss-1 inhibits the proliferation and invasion of gastric carcinoma cells〔J〕.World J Gastroenterol，2012;18(15)：1872-83.

3任涛文，吴静，周永宁，等.HER-2在胃癌及其淋巴结组织中表达的临床意义〔J〕.第四军医大学学报，2009；30(21)：2323，2326.

4龙孝斌，李汉贤.Kiss-1基因在肿瘤中的研究进展〔J〕.实用癌症杂志，2008；23(3)：316-8.

5Armstrong F，Brunetde Ia Grange P，Gerby B，etal.NOTCH is a key regulator of human T-cell acute leukemia initiating cell activity〔J〕.Blood，2009；113(8)：1730-40.

6Buchler P，Gazdhar A，Schubert M，etal.The Notch signa-ling pathway is related to neurovascular progression of pancreatic cancer〔J〕.Ann Surg，2005；242(6)：791-800.

7Lu Z，Liu H，Xue L，etal.An activated Notch1 signaling pathway inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma cell line EC9706〔J〕.Int J Oncol，2008；32(3)：643-51.

8Dhar DK，Naora H，Kubota H，etal.Downregulation of Kiss-1 expression is responsible for tumor invasion and worse prognosis in gastric carcinoma〔J〕.Int J Cancer，2004；111：868-72.

9Mitchell DC，Abdelrahin M，Weng JS，etal.Regulation of KI SS-1 metastasis suppressor gene expression in breast cancer cells by direct interaction of transcription factors activator protein-2 alpha and specificity protein-1〔J〕.J Biol Chem，2006；281(1)：51-8.

10冯斌.Kiss-1基因在胃癌组织中的表达与胃癌复发转移的关系〔J〕.现代肿瘤医学，2013；21(10)：2289-91.

11张佑蕊，师水生.胃癌中KLF4的表达与Sp1、Notch表达的关系及意义〔D〕.太原：山西医科大学，2011.

12李大卫，吴晴，彭志海，等.Notch1和PTEN在胃癌组织中的表达及其意义〔J〕.癌症杂志，2007；26(11)：1183-7.

〔2014-12-16修回〕

(编辑苑云杰)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.047

河北省科技惠民计划课题基金资助(No.14277752D)

于卫芳(1973-)，女，硕士，主任医师，主要从事消化道肿瘤早诊早治研究。

段志英(1978-)，女，主治医师，主要从事消化道肿瘤研究。

R735.3

A

1005-9202(2016)14-3454-03；

1河北医科大学第一医院内镜中心