寻常型银屑病患者皮损miR-146a的表达及意义

邓蕙妍，林玲，周欣，刘炜钰，罗权（广州市皮肤病防治所，广州 510095）

寻常型银屑病患者皮损miR-146a的表达及意义

邓蕙妍，林玲，周欣，刘炜钰，罗权
（广州市皮肤病防治所，广州 510095）

目的检测寻常型银屑病患者皮损中miR-146a的表达情况，并探讨其与寻常型银屑病发病的相关性。方法应用实时定量逆转录一聚合酶链反应（qRT-PCR）比较30例寻常型银屑病患者皮损及正常对照组相同部位皮肤中miR-146a的相对表达量。并探讨其与寻常型银屑病患者病情活动指标之间的关系。结果 寻常型银屑病患者皮损中的miR-146a的拷贝数显著高于正常对照组（P＜0.05），并发现miR-146a表达量与寻常型银屑病的皮损面积和严重程度有一定关系。结论寻常型银屑病患者皮损中的miR-146a异常高表达，并与寻常型银屑病的严重程度相关，提示miR-146a在寻常型银屑病的发病中起重要作用。

银屑病；寻常型；miR-146a

微小RNA（microRNA，miRNA）是一类进化高度保守的微小非编码RNA，其通过影响翻译后水平而调节靶基因的表达。MicroRNA是20 nt左右的调控非编码小分子RNA，由具有发夹结构的单链miR剪切加工而成，并在转录后水平发挥调节基因表达功能，其通过与mRNA 3段非编码区（UTR）结合，抑制mRNA翻译［1］。MicroRNAs参与细胞内多种生命过程［2］，已有很多报道miR-146a在多种疾病中异常表达，比如，参与肿瘤转移、抗病毒作用、肌无力等［3-4］，但miR-146a在寻常型银屑病皮损中的表达研究报道甚少。我们应用实时定量逆转录一聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-146a在寻常型银屑病皮损的表达，探讨其与寻常型银屑病的关系。

1　材料与方法

1.1研究对象2012年10月—2013年10月在我所门诊就治的寻常型银屑病患者共30例，根据《中国临床皮肤病学》［4］的诊断标准确诊。男21例，女9例，年龄24～73岁，平均40岁。进行期18例，静止期12例，病程6个月～17年。银屑病患者的皮损面积和严重程度按银屑病面积与严重程度指数（PASI）评分为7.9～28.5分，平均（17.22±6.34）分。所有银屑病患者近2个月内未系统服用维A酸、糖皮质激素、免疫抑制剂等药物，无并发症及各种系统性疾病。另取30例正常人作为对照，男17例，女13例，年龄20～44岁，平均29岁，无免疫性疾病及系统性疾病，无银屑病家族史。正常人对照组与银屑病患者组在性别及年龄上差异无统计学意义。本试验得到患者本人同意和医院医学伦理委员会审查通过。

1.2总RNA的提取和纯化一般选取患者背部皮损，若背部无皮损，选取患者四肢典型皮损，由组织活检获得标本，根据说明书采用Trizol（Invitrogen，USA）提取细胞系总RNA，RecoverAllTM总核酸提取试剂盒（Ambion，USA）提取组织总RNA，SmartSpec Plus分光光度计（Bio-Rad，USA）对总RNA进行定量分析。

1.3cDNA合成与qRT-PCR取100 ng总RNA按操作说明书进行反转录cDNA，反应程序：16℃30 min，42℃30 min，85℃5 min。按Taqman MicroRNA Assays（Applied Biosystems，USA）说明检测成熟的miR，以miR-146a和U6作模板，miR-146a和U6荧光探针作引物扩增，反应程序为：95℃45 s，95℃15 s，60℃15 s，45个循环，所有试验重复3次，相对定量分析2-△△Ct法测定miR变化。

2　结果

2.1总RNA质量及PCR扩增效率所有组织标本抽提之总 RNA A260/A280值在 1.79～1.98，A260/A230值在1.95～2.11。miR-146a及内参PCR扩增效率为91.5%～96.0%。

2.22组研究对象miR-146a表达的比较我们用qRT-PCR检测了30份寻常型银屑病患者皮损样本及30份正常对照同一部位皮肤中miR-146a的表达量，寻常型银屑病患者皮损miR-146a表达量比正常皮肤表达量高，其中18份进行期寻常型银屑病患者皮损平均上调3.75倍，12份静止期寻常型银屑病患者皮损平均上调2.0倍，平均上调2.63倍，见图1。

图1　miR-146a在寻常型银屑病患者组皮损和正常对照组同一部位皮肤中的表达比较

2.3miR-146a表达量与寻常型银屑病临床病理特征之间的关系分析这些样品与患者年龄、性别、病程和临床分期等病理特征发现，miR-146a表达量与在不同年龄、性别和病程的寻常型银屑病患者差异无统计学意义（P＞0.05），与患者临床分期有关，进行期患者皮损中的miR-146a表达水平更高，与静止期患者的miR-146a表达水平差异有统计学意义（t=8.37，P＜0.05），见表1。

表1 miR-146a在寻常型银屑病患者和正常人皮损中的表达与临床特征的关系

2.4miR-146a表达量与PASI评分的相关性分析30例寻常型银屑病患者的PASI评分为7.9～28.5分，平均（17.22±6.34）分。采用rs检验分析寻常型银屑病患者皮损中miR-146a表达量及其PASI评分的相关性，两者呈显著正相关（r=0.838，P＜0.05），见图2。

图2　miR-146a表达量与PASI评分的相关性分析

3　讨论

微小RNA（miRNA）是内源性非编码小RNA，可以在转录后水平调节基因表达。它们通过结合到目标mRNA互补位点的3'非翻译区（UTR），阻止或减少mRNA的翻译，导致靶mRNA的降解［5］。作为重要的基因调节器，miRNA已被证实参与人类的各种生理过程，它们的异常表达也参与了许多疾病的发病机制［1］。此外，最近的证据表明，miRNA的单核苷酸多态性（SNP）可以影响它们的表达和功能［6-7］，从而影响多种疾病的表型和发展［8-9］。miR-146a基因定位于染色体5q34［10］，编码的miR-146a已被发现影响各种疾病。miR-146a上一些多态位点如rs2910164［11］、rs291016［12］等被证明能影响成熟miR-146a的水平和增加各种癌症和炎性疾病的风险。其中miR-146a内的rs2910164有可能对细胞表面蛋白表皮生长因子受体（EGFR）中的miR-146a受体有潜在的影响，Kogo等［13］也报道了miR-146a可锚定EGFR的mRNA，从而下调基因的转录水平，影响角质形成细胞的增殖。

笔者的试验结果表明银屑病患者皮损中的miR-146a水平比正常人同一部位皮肤要高（t= 11.8，P＜0.05），而且患者PASI评分越高，miR-146a的水平越高，提示miR-146a在寻常型银屑病的发生、发展中起重要作用。笔者的前期研究发现，miR-146a在银屑病皮损部位及T细胞等免疫细胞中表达增加，提示miR-146a参与了银屑病炎症的病理过程［14］。国内外研究提示，异常的miR可调控银屑病相关基因和相应蛋白的表达，从而促发一系列发病相关细胞因子的异常表达［15］。同时，银屑病的主要病理特征是表皮中角质形成细胞的过度增殖，而结合于表皮生长因子的EGFR在银屑病皮损中过度表达［16］。结合笔者的研究，推测EGFR有可能受miR-146a的调节，从而影响银屑病的发生。

分析患者的临床分期和PASI评分发现，皮损面积越大，严重程度越高，miR-146a表达水平相应增高（P＜0.05）。同时进行期患者皮损中的miR-146a表达水平更高，说明miR-146a在临床上影响银屑病的病理变化，而与患者性别、年龄没有显著相关性，提示miR-146a可望作为评估寻常型银屑病严重程度的指标，对患者病情判断和治疗有指导作用。

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Expression of MiR-146a in the Lesions of Patients with Psoriasis Vulgaris and Its Significance

Deng Huiyan，Lin Ling，Zhou Xin，Liu Weiyu，Luo Quan
Guangzhou Institute of Dermatology，Guangzhou 510095，China

ObjectiveIn order to investigate the expression of miR-146a in the lesions of patients with psoriasis vulgaris，and to discuss the relationship between it and psoriasis vulgaris.Methods The relative expression of miR-146a in the skin of 30 patients with psoriasis vulgaris and normal control group with qRT-PCR was compared.The relationship between miR-146a and the activity index of psoriasis vulgaris was also analyzed.ResultsCopy of miR-146a in the skin lesions of patients with psoriasis vulgaris was significantly higher than that of the normal control group（P＜0.05）.MiR-146a expression in psoriatic lesion area had a relationship with psoriasis vulgaris.ConclusionExpression of miR-146a in the skin lesions of patients with psoriasis vulgaris is significantly higher，and has a relationship with psoriasis vulgaris，which suggests that miR-146a plays an important role in the pathogenesis of psoriasis vulgaris.

Psoriasis；Vulgaris；miR-146a

R758.63

A

1672-0709（2016）03-0142-03

广州市医药卫生科技一般引导项目（20141A011070），广东省医学科研基金（A2015305）

罗权，E-mail：luoquan666@126.com

2016-01-28）