外周血及蜕膜组织中CD4加CD25加调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系研究

李 彬， 李长忠



外周血及蜕膜组织中CD4加CD25加调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系研究

李 彬1， 李长忠2

（1.山东省禹城市人民医院， 山东 禹城 251200 2.山东省立医院，山东 济南 250021）

【摘 要】目的：探讨外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系。方法：随机选取自2012年6月到2015年6月，我院门诊部与住院部的原因不明复发性流产患者62例（观察组）和正常妊娠妇女62例（对照组）作为研究对象。采用流式细胞四色荧光法测量两组研究对象外周血及蜕膜组织中的CD4+CD25+调节性T细胞比例。分析比较两组研究对象外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例情况。结果：观察组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例低于对照组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例，且两组差异具有统计学意义（t=2. 669，P=0.015）；观察组患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例低于对照组患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例，两组差异具有统计学意义（t=4.986，P=0.001）。结论：外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例在早孕期显著升高，参与了正常妊娠的维持，有可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素；外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例降低可能与URSA的发生有关。

【关键词】外周血； 蜕膜组织； CD4+CD25+调节性T细胞比例； 原因不明复发性流产

为了探讨外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系，选取了我院门诊部与住院部的原因不明复发性流产患者62例和正常妊娠妇女62例作为研究对象，具体研究结果如下：

1　资料与方法

1.1 一般资料：随机选取自2012年6月至2015年6月，我院门诊与住院的原因不明复发性流产患者62例（观察组）和正常妊娠妇女62例（对照组）作为研究对象。对照组患者62例，年龄22～38岁，平均年龄（24.8 ±4.9）岁；孕周3～18周，平均（8.5±2.9）周；观察组患者62例，年龄20～38岁，平均年龄（24.9±4.7）岁；孕周3～19周，平均（8.3±2.8）周。对两组患者的平均年龄、孕周进行统计学对比分析，两组差异不具有统计学意义（P＞0.05），两组患者具有可比性。具体情况见1。

表1　两组患者一般资料对比（¯x±s，n）

1.2 纳入和排除标准：纳入标准：①所有观察组患者的诊断均符合中华医学会妇产科分会制定的关于原因不明复发性流产的诊断标准［1］；②所有对照组患者均为同期在我院门诊行终止妊娠的正常早孕产妇；③两组患者均了解该研究内容，并自愿配合该研究内容中的所有检查。排除标准：①两组患者均排除有染色体、内分泌或者解剖结构异常；②排除合并有感染、自身免疫性疾病史者。

1.3 方法：①分别采集两组患者的外周血和蜕膜组织，并在无菌条件下制备蜕膜及外周血的单核细胞悬液。②将其放入离心机中，离心1500rpm×5min。③分别去除上清液，加入荧光标记抗体（小鼠抗人CD4-PE -y5.5，小鼠抗人CD15-FITC）5uL混匀，裂解细胞后再加入FoxP3-PE。④置于室温下，避光，孵化30min。⑤分别在样品中加入PBS液1mL，然后放置于离心机中，离心1500rpm×5min。⑥离心后去除上清液，加入200ulPBS，采用流式细胞检查仪进行检查。

1.4 观察指标：分别观察比较两组患者的外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例。

1.5 统计学分析：采用SPSS18.0统计学软件进行数据分析，计量资料以平均数±标准差表示，组间比较采用两独立样本的t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结 果

2.1 两组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例：比较两组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例，观察组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于对照组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例，两组差异具有统计学意义（P＜0.05）。说明原因不明复发性流产患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例低于正常妊娠妇女。见表2。

表2　两组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例比较（%，x¯±s）

2.2 两组患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例：比较两组患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例，观察组患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于对照组患者蜕膜组织中 CD4+ CD25+调节性T细胞比例，两组差异具有统计学意义（P＜0.05）。说明原因不明复发性流产患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例低于正常妊娠妇女。见表3。

表3　两组患者蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例比较（%，x¯±s）

3　讨 论

妊娠的过程类似于同种异体移植的过程，因为胎儿所携带父亲的一半的HLA抗原可以刺激孕妇产生免疫应答，同时为了保证妊娠继续，该刺激作用使孕妇的免疫抑制细胞数量也相应增加，使胎儿能在母体的免疫应答和免疫抑制动态平衡中存活至分娩［2］。生殖免疫专家认为，一旦这种免疫耐受与免疫应答机制的动态平衡被打破，正常妊娠将无法继续，最终会导致流产的发生［3］。近些年来越来越多的免疫学专家认为，不明原因复发性流产与免疫学密切相关。

CD4+CD25+调节性T细胞是一类具有重要免疫功能的T细胞亚群，具有免疫抑制功能，在母胎免疫耐受中发挥着重要的作用［4］。目前CD4+CD25+调节性T细胞的作用机制尚未清楚，多数专家认为其主要通过两种机制发挥免疫调节作用：①CD4+CD25+调节性T细胞可以分泌多种免疫抑制因子（IL-10、TGF-β等），间接的发挥免疫抑制作用，保护胚胎的生长；②CD4+CD25+调节性T细胞通过直接或间接接触，参与人体自身免疫耐受的调节，同时其种植类似同种异体移植以及肿瘤免疫调节，维持人体内环境的稳定。国外有研究报道［5］，通过增加调节性T细胞的功能和数量可以治疗自身免疫性疾病、变态反应性疾病等。

该研究通过检测两组患者外周血以及蜕膜组织的CD4+CD25+调节性T细胞比例可知：观察组患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于对照组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例，两组差异具有统计学意义（P＜0.05），说明原因不明复发性流产患者外周血中的D4+CD25+调节性T细胞比例低于正常妊娠孕妇，与国内外专家学者的报道一致；另外观察组患者蜕膜组织CD4+CD25+调节性T细胞比例低于对照组患者蜕膜组织CD4+CD25+调节性T细胞的比例，两组差异具有统计学意义（P＜0.05），说明正常妊娠孕妇的蜕膜组织中的D4+CD25+调节性T细胞比例高于原因不明复发性流产患者，这与国外专家学者的报道一致。而且正常妊娠者蜕膜组织中的CD4+CD25+调节性T细胞比例高于外周血，说明CD4+CD25+调节性T细胞在蜕膜组织中有更高的表达。

综上所述，外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例在早孕期升高，参与了正常妊娠的维持，有可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素；外周血及蜕膜组织中CD4+CD25+调节性T细胞比例降低可能与原因不明习惯性流产的发生有关。

【参考文献】

［1］ 李成，张强.复发性流产患者外周血调节性T细胞检测及临床意义［J］.安徽医学，2009，30（11）：1340～1342.

［2］ 刘长明.CD4+T辅助细胞中Treg及Th17在原因不明性复发性流产发病中作用的探讨［D］.安徽医科大学，2012.

［3］ 冯晓玲，鲍薇薇，张素冰，等.CD4+CD25+调节T细胞与原因不明复发性流产研究进展［J］.中国医疗前沿（上半月），2011，6（5）：27～28.

［4］ 王文娟.CD4+T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展［J］.国际妇产科学杂志，2013，40（6）：525～529.

［5］ 章卫国，张蔚卿，陈葆国，等.原因不明复发性流产病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表达［J］.全科医学临床与教育，2011，9（4）：368～371.

【文章编号】1006-6233（2016）07-1065-03

【文献标识码】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.07.04

【基金项目】山东省自然科学基金资助项目，（编号：ZR2013HM165）

Peripheral Blood and Decidua Tissue Proportion of CD4+CD25+Regulatory T Cells in Relations with Unexplained Recurrent Abortion

LI Bin， et al
（The People＇s Hospital of Yucheng City，Shandong Yucheng251200，China）

【Abstract】Objective：To explore the relationship between the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in the peripheral blood and decidua tissue and unexplained recurrent abortion.Methods：Randomly selected from June 2012 to June 2015 in our hospital outpatient and hospitalization of patients with unexplained recurrent abortion，62 cases（observation group）and 62 cases of normal pregnant women（control group）as the research objects.Using flow cytometry four-color fluorescence method to measure the CD4+CD25+regulatory T cells proportion of peripheral blood and decidua tissue.Comparative analysis of two groups of peripheral blood and decidua tissue proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in case.Results：The CD4+CD25+regulatory T cells proportion of peripheral blood and decidua tissue of observation group patients were significantly lower than control group in patients.The difference between the two groups was statistically significant（T=2. 669，p=0.015，p＜0.05）；The proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in decidual tissue of observation group patients was significantly lower than that in the control group patients.There was obvious difference between the two groups，with a statistical significance（T=4.986，p=0.001，p＜0.05）.Conclusion：The proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood and decidua tissue has a significant rise in early pregnancy.It should involve in maintaining normal pregnancy.It is possible that local immune tolerance control of maternal-fetal interface formed an important factor；The lower of the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood and decidua tissue may be associated with the occurrence of URSA.

【Key words】Peripheral blood； Decidual tissue； CD4+CD25+regulatory T cells； Unexplained recurrent miscarriage