定心汤对心律失常大鼠模型的影响*

胡璇，王东生

（中南大学湘雅医院 中西医结合科，湖南 长沙 410008）



论著

定心汤对心律失常大鼠模型的影响*

胡璇，王东生

（中南大学湘雅医院 中西医结合科，湖南 长沙 410008）

摘要：目的研究定心汤对心律失常大鼠模型的作用及各项相关指标的影响。方法采用乌头碱所致心律失常模型观察药物作用。结果定心汤对乌头碱致大鼠室性心律失常模型有明显作用，缩短心律失常持续时间，降低血清丙二醛（MDA）含量，增加血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，增加心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。结论定心汤有明显的抗室性心律失常作用，且呈剂量依赖性。

关键词：定心汤；心律失常；大鼠模型；超氧化物歧化酶；丙二醛；Na+-K+-ATP酶，Ca2+-ATP酶

定心汤来源于清代名医张锡纯《医学衷中参西录》方剂篇，由龙眼肉、酸枣仁等8味中药组成，运用传统中医药学基本理论，以活血通络、益气养心、宁心安神为治法，经临床病例验证，其对心律失常有良好疗效。本研究通过观察定心汤对心律失常模型的作用及各项相关指标的影响，进一步研究其抗心律失常的作用机制。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1动物SPF级SD大鼠50只，雄性，日龄54～ 57 d，购自中南大学湘雅医学院实验动物中心，合格证号：SYXK（湘）2013-0004。

1.1.2药品与试剂定心汤（龙眼肉、酸枣仁、山茱萸、柏子仁、生龙骨、生牡蛎、乳香、没药），购自中南大学湘雅医院中药房，先将生药浸泡30min，沸后文火煎煮30 min，8层纱布过滤，煎煮2次，合并滤液。稳心颗粒（山东步长制药股份有限公司，批号：Z10950026，规格：每袋5g），盐酸胺碘酮片（杭州赛诺菲制药有限公司，批号：H19993254，规格：每片0.2 g），乌头碱（上海源叶生物科技有限公司，批号：YY90196，生物纯度：高效液相色谱法≥98%，规格：每支20 mg），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）检测试剂盒（南京建成生物工程有限公司，商品编号：A001-1-96、A003-1-96），超微量Ca2+-ATP酶测定试剂盒（南京建成生物工程有限公司，商品编号：A070-4），超微量Na+–K+–ATP酶测定试剂盒（南京建成生物工程有限公司，商品编号：A070-2）。

1.1.3仪器十六通道生理仪（美国Biopac公司，MP-150型），台式冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司，TGL-16），全自动酶标洗板机（深圳市汇松科技发展有限公司，PW-812），酶标仪（深圳市汇松科技发展有限公司，MB-530），恒温振荡器（太仓市强乐实验设备有限公司，THZ-C）。

1.2方法

1.2.1分组及给药先适应性喂养7 d，再随机分为模型组（生理盐水）、稳心颗粒组（4.860 g/kg）、胺碘酮组（40 mg/kg）、定心汤低剂量组（9.72 g/kg）、定心汤高剂量组（38.88 g/kg），共5组，每组10只。每日灌胃给予相应药物1次，连续给药7d，给药体积为10ml/kg[1]。

1.2.2建模建模方法参考文献[2]，各组大鼠末次给药后30 min，腹腔注射10%水合氯醛麻醉（3.5 ml/kg），仰卧位固定，将针式电极分别插入大鼠左后、右前肢末端皮下，等心电图稳定后，记录正常Ⅱ导联心电图。然后由尾静脉恒速注入浓度为3μg/ml乌头碱，10s内注入完毕，以心电图中出现心律失常图像为建模成功。观察并记录灌药后心律失常发生时间及持续时间，1.5 h内心律失常未恢复的大鼠心律失常维持时间按90min统计。采用Mest方法评定心律失常分数[3]：0分，窦性心律；20分，Ⅰ度房室传导阻滞，室上性心律失常；40分，室性早搏二联律、三联律，Ⅱ度房室传导阻滞；60分，多源性室性早搏，阵发室速；80分，室颤；100分，死亡。

1.2.3SOD活性和MDA含量测定实验完毕后，腹主动脉取血，2500r/min离心15min，取血清，根据试剂盒说明书方法测定SOD活性和MDA含量。

1.2.4ATP酶活性测定各组大鼠取血后，取左心室肌组织，按照相应的试剂盒说明书测定Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。

1.3统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用单因素方差分析，计量资料呈正态分布且方差齐性时，用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1定心汤对抗心律失常的作用

与模型组比较，定心汤高、低剂量组、胺碘酮组、稳心颗粒组能延迟心律失常出现时间，缩短心律失常持续时间，提高乌头碱阈剂量，差异有统计学意义（t=4.067、3.441和4.161，P=0.000）。其中定心汤高剂量组延迟心率失常时间最长，心率失常持续时间最短，心率失常分数最低，差异有统计学意义（t= 6.065，P=0.000）。定心汤高剂量组乌头碱阈剂量比低剂量组高，呈剂量依赖性。见附图和表1。

2.2SOD活性和MDA含量变化

与模型组比较，定心汤高、低剂量组、胺碘酮组、稳心颗粒组大鼠血清中SOD活性升高，MDA含量降低，差异有统计学意义（t=13.512和4.355，P=0.000）。其中定心汤高剂量组的SOD活性最高，MDA含量降低最多，差异有统计学意义（t=15.188和5.575，P= 0.000）。见表2。

附图　注射乌头碱后各组心律失常出现时间比较

表1　乌头碱造模后各组大鼠心律失常比较 （n=10±s）

表1　乌头碱造模后各组大鼠心律失常比较 （n=10±s）

注：1）与定心汤高剂量组比较，P<0.05；2）与胺碘酮组比较，P<0.05；3）与定心汤低剂量组比较，P<0.05；4）与稳心颗粒组比较，P<0.05

乌头碱阈剂量/（μg/kg）模型组　145.500±47.1131）2）　4657.500±1428.4621）3）　66.000±32.7271）3）　7.000±1.4804）定心汤高剂量组　709.200±343.938　842.800±263.150　22.000±6.325　10.933±1.140定心汤低剂量组　361.900±128.2071）　2568.300±1024.8821）　32.000±19.322　8.533±0.8201）胺碘酮组　460.000±329.239　3736.500±1812.7991）　42.000±27.406　9.533±1.573稳心颗粒组　269.900±116.3571）　4387.300±1333.9891）3）　38.000±28.983　9.000±1.1001）F值　8.777　14.846　4.357　13.110 P值　0.000　0.000　0.005　0.000组别心律失常出现时间/s 心律失常持续时间/s Mest/分

表2　各组大鼠血清中SOD活性和MDA含量比较（n=10±s）

表2　各组大鼠血清中SOD活性和MDA含量比较（n=10±s）

注：1）与定心汤高剂量组比较，P<0.05；2）与定心汤低剂量组比较，P<0.05；3）与胺碘酮组比较，P<0.05；4）与稳心颗粒组比较，P<0.05

MDA/（nmol/ml）模型组　146.631±29.1911）2）3）4）　12.084±1.3481）2）定心汤高剂量组　820.699±82.475　7.692±0.890定心汤低剂量组　633.542±97.0831）　9.348±0.7691）胺碘酮组　380.735±118.3191）2）　10.681±0.6531）稳心颗粒组　421.257±98.9121）2）　11.909±1.3791）2）3）F值　80.786　30.784 P值　0.000　0.000组别SOD/（u/ml）

2.3Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性

与模型组比较，定心汤高、低剂量组、胺碘酮组、稳心颗粒组大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均升高，但是定心汤高剂量组两项酶活性与其他各组比较最高，差异有统计学意义（t=10.461和11.236，P=0.000）。见表3。

表3　各组大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性比较 （n=10，u/mgprot±s）

表3　各组大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性比较 （n=10，u/mgprot±s）

注：1）与定心汤高剂量组比较，P<0.05；2）与定心汤低剂量组比较，P<0.05；3）与胺碘酮组比较，P<0.05

Ca2+-ATP模型组　0.156±0.0801）2）　0.086±0.0371）2）定心汤高剂量组　2.219±0.618　0.433±0.091定心汤低剂量组　1.291±0.7391）　0.230±0.0641）胺碘酮组　0.565±0.4871）2）　0.141±0.0501）2）稳心颗粒组　0.910±0.4561）3）　0.149±0.0581）2）F值　22.446　51.830 P值　0.000　0.000组别Na+-K+-ATP

3　讨论

从西医角度上看，心律失常是由于窦房结激动异常或激动产生于窦房结以外，激动的传导缓慢、阻滞或经异常通道传导，即心脏活动的起源和传导障碍导致心脏搏动的频率和节律异常。通常见于各种器质性心脏病，其中以冠状动脉粥样硬化性心脏病、心肌病等为多见。

心律失常性质的确诊大多数要依靠心电图来判定，特别是发作时的心电图记录是确诊心律失常的重要依据。因此本实验中笔者通过比较大鼠正常心电图与注药后心电图的不同来判断各药物抗心律失常的作用。

SOD活性和MDA含量是评定氧自由基生成膜结构破坏的指标。其中SOD能消除生物体在新陈代谢中所产生的有害物质，增加血清中SOD的含量就能够提高抗心律失常的能力。MDA是过氧化脂质的分解产物，能够引起蛋白质变性和交联，使DNA损伤、酶及激素失活，损害细胞及细胞膜，其含量变化可以反映组织氧化损伤的程度。Na+-K+-ATP酶是生物体内广泛存在的生物膜酶系统，对维持细胞正常生理功能具有非常重要的作用，提高Na+-K+-ATP酶活性就能更好地维持心肌细胞冲动传导，提高抗心律失常的能力。Ca2+-ATP酶能够催化质膜内侧的ATP水解，从而释放能量，是神经-肌肉传递过程中的重要介质。提高Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性即能够提高保护心肌的能力，改善心脏电传导过程，起到改善心律失常的作用。

现代药理研究证实，龙眼肉具有抗氧化、抗衰老、增强免疫的作用[4]。山茱萸总萜可能通过清除氧自由基来保护心肌组织，并且显著提高心肌的抗氧化能力，提高SOD活性，降低MDA含量[5]。从酸枣仁中提取的脂肪油有超过90%的化合物成分为不饱和脂肪酸，而这些脂肪酸具有明显的强心作用[6]，有实验证实酸枣仁的提取物及酸枣仁皂苷A有抗心律失常作用[7]。龙骨、牡蛎都有很好的镇静、催眠、抗惊厥作用[8]，而牡蛎提取物能显著缩短左心室乳头肌各个阶段复极化的动作电位持续时间[9]，牡蛎糖胺聚糖可以有效防止因血管内皮损伤而引起的高血压、动脉硬化、脑卒中等多种心血管疾病的发生[10]。乳香、没药均能降低血小板黏附性[11]。

心律失常属于中医范畴中的心悸、怔仲，临床常见心悸不安，伴气短乏力，夜寐不安，舌质淡或暗红，苔薄白或少苔，脉象多见促、结、数等。其基本病机是气血阴阳亏虚，心失所养，或邪扰心神，心神不宁。前期临床观察结果表明，定心汤对心律失常患者有良好的治疗效果。方中龙眼肉补心肝之血，酸枣仁、柏子仁补心气，龙骨入肝以安魂，牡蛎入肺以定魄，二药与萸肉并用，能够收敛心气之耗散，三焦之气化亦可以因之团聚，又少加乳香、没药之流通气血者以调和诸药。方中诸药合用，共成补益气血，养心安神之功效。

本实验笔者以乌头碱致大鼠心律失常模型观察药物对心律失常的作用及其他相关指标（SOD、MDA 及Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP）的影响。结果发现，乌头碱诱发心率失常后，各实验组均能够推迟心律失常出现的时间，缩短出现时间，降低心律失常分数，其中定心汤高剂量组优于其他各组，且差异有统计学意义。说明定心汤高剂量组对推迟心律失常出现时间，减少持续时间具有明显的作用，对乌头碱引发的心脏毒性有良好的解毒作用。在乌头碱阈剂量方面，4组均高于模型组，定心汤高剂量组高于低剂量组，呈剂量依赖性。从大鼠血清中SOD活性、MDA含量比较发现，实验各组SOD含量均明显高于模型组，其中定心汤高剂量组含量最高，与其他各组比较差异有统计学意义，各实验组血清中MDA含量均低于模型组，其中定心汤高剂量组最低，说明高剂量定心汤具有明显提升大鼠血清中SOD活性，降低MDA含量的作用。实验各组的Na+-K+-ATP和Ca2+-ATP酶活性均高于模型组，其中高剂量定心汤组的酶活性明显高于其余各组，提示高剂量定心汤对提高Na+-K+-ATP和Ca2+-ATP酶活性具有重要作用。

本研究发现，定心汤对乌头碱诱发的室性心律失常具有明显的对抗作用，且呈剂量依赖性。

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（申海菊编辑）

中图分类号：R 541.7；R 285.5

文献标识码：A

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.13.004

文章编号：1005-8982（2016）13-0018-04

收稿日期：2016-01-12

*基金项目：国家自然科学基金（No:81373554）；湖南省中医药大学中医诊断重点学科开放基金（No:2014-3）

[通信作者]王东生，E-mail：wdsh66@aliyun.com

Effect of Dingxin decoction on arrhythmia in rat model*

Xuan Hu，Dong-sheng Wang
（Department of TCM Combined with Western Medicine，Xiangya Hospital，Central South University，Changsha，Hunan 410008，China）

Abstract:Objective To study the effect of Dingxin decoction on arrhythmia rat model and related indicators.Methods Aconitine-induced arrhythmia model was used to observe drug effects.Results Dingxin decoction had obvious effects on ventricular arrhythmia rat model caused by aconitine，which included shorter arrhythmia duration，lower serum malondialdehyde（MDA）content，increased the serum superoxide dismutase （SOD）activity，and increased Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase activity in the myocardial tissue.Conclusions Dingxin decoction has significant anti-ventricular arrhythmia effects in a dose-dependent manner.

Keywords:Dingxin decoction；arrhythmia；rat model；superoxide dismutase；malondialdehyde；Na+-K+-ATPase；Ca2+-ATPase