正交试验法筛选芪术胶囊的提取工艺

崔翠翠　王瑛兰　刘元昆

（威海市中医院，山东 威海 264200）

正交试验法筛选芪术胶囊的提取工艺

崔翠翠王瑛兰刘元昆

（威海市中医院，山东 威海 264200）

目的：筛选芪术胶囊的最佳提取工艺。方法：以提取次数、时间、加水量为考察因素，以出膏率、没食子酸和马钱苷含量为指标，采用正交设计，优选芪术胶囊的最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺为：药材加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。结论：优选出的提取工艺合理可行，为实际生产及其质量控制提供了依据。

芪术胶囊；提取工艺；出膏率；没食子酸；马钱苷；正交设计

芪术胶囊是本院专家的临床经验方，已经作为院内制剂在本院生产使用，并取得了良好的治疗效果。该处方由山茱萸、山药、白术、黄芪、丹参、甘草等11味中药组成，功于补肾健脾、益气通阳、活血化瘀。适用于脾肾阳虚，血脉瘀阻证的慢性萎缩性胃炎。症见胃脘疼痛、食欲不振、疲乏无力、烦躁易怒、胃部发凉，舌质淡或有瘀斑、苔薄白，脉虚弱等。为了规范该制剂的提取工艺，本文以出膏率、没食子酸和马钱苷的含量为指标，采用正交设计对芪术胶囊的提取工艺进行研究，以期筛选该制剂提取的最佳工艺条件。

1　仪器和试药

Agilent1220高效液相色谱仪（美国 Agilent公司）。

试验所用药材均购于山东菏泽泰山中药饮片有限公司，符合2010年版《中国药典》（一部）相关规定。所用样品均由威海市中医院制剂室生产。没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110831-200803）；马钱苷对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：111640-201005）；高效液相用乙腈（色谱纯）；其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1试验设计

对该处方中有效成分为水溶性成分的5味中药采用传统水提取的制备方法。方中君药山茱萸的主要有效成分为挥发油类、糖苷类和有机酸类［1］。马钱苷为山茱萸的主要有效成分，具有明显的免疫抑制活性和抗炎作用［2］，山茱萸抗家兔失血性休克和心源性休克的作用成分初步研究表明是马钱苷等［1］，没食子酸具有抗炎、抗氧化、抗突变、抗肿瘤等多种生物学活性［3］。本试验以出膏率、没食子酸和马钱苷的含量作为指标，以提取次数、加水量和提取时间为考察因素，每个因素3个水平，见表1。

表1　因素水平

2.2样品的制备

药材投料量为处方的 1/10，共计 36 g，取 9份，按照正交试验安排进行提取，滤过，合并滤液，浓缩至100 mL。

2.3出膏率的测定

取各样品25 mL，浓缩，干燥，精密称定，计算出膏率。

出膏率=干膏质量×4/原药材质量×100%。

2.4没食子酸和马钱苷含量测定［4］

2.4.1供试品溶液制备取样品1 mL用甲醇稀释溶解至5 mL，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4.2对照品溶液制备分别精密称定没食子酸和马钱苷对照品适量，加75%甲醇溶解并定容得混合对照品，使没食子酸和马钱苷的浓度分别为5 mg/L和10 mg/L。

2.4.3阴性对照样品溶液制备取除山茱萸外其他药材处方量的 1/10，共计 30 g，加 8倍量水煎煮两次，每次煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至100 mL。作为阴性对照溶液。

2.4.4色谱条件色谱柱：Agilent SB C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相：A为乙腈，B为0.1%磷酸溶液，采用梯度洗脱法洗脱，具体洗脱程序见表2；检测波长 0～ 7 min：270 nm，7～ 26 min：240 nm；柱温30℃；流速：1 mL/min。图谱见图1。

表2　梯度洗脱程序

2.4.5样品含量测定分别精密吸取混合对照品溶液10，20 μL，供试品溶液 20 μL，阴性对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

A对照品；B样品；C阴性对照；1没食子酸；2马钱苷图1　没食子酸和马钱苷HPLC图

2.5数据处理与分析

有关试验数据及其计算分析结果见表3～4。出膏率、没食子酸和马钱苷含量3个指标进行加权，分别为50，25，25分，对总分进行方差分析。可见空白列D项R值小，为误差项，计算可知A、B因素对结果有显著差异，C因素对结果影响不显著。由表3的简单比较可知，对于A，K2＞K3＞K1，故因素A选择水平2，即提取2次；对于B，K3＞K2＞K1，因素B选择水平3，即加水量10倍，对于C，K1＞K2＞K3，因素C选择水平1，即提取时间1 h，从而确定最佳提取工艺为A2B3C1，即加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。

2.6验证试验

按照“2.5”项下优选出的芪术胶囊提取工艺条件制备3批样品，分别测定指标成分的含量，并按“2.3”及“2.4”项下的方法计算出膏率、没食子酸和马钱苷的含量，结果见表5。

3小结和讨论

3.1以提取次数、加水量和提取时间为考察因素，以出膏率、没食子酸和马钱苷的含量作为指标，采用正交试验设计法，优选芪术胶囊的提取工艺，结果其最佳工艺为加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。加水量是影响煎出液质量的主要因素。验证试验说明优选的工艺条件稳定可行。

3.2在预试验中曾选择将5号样品定溶于75%的乙醇和75%的甲醇溶液中，分别对其进行稳定性

表3　芪术胶囊正交试验设计与结果

表4方差分析考察，发现75%的乙醇溶液稳定性差，2 h以后马钱苷的含量明显降低；75%的甲醇溶液稳定性好，分别放置0，2，4，8，12 h后进样测定，结果计算得马钱苷和没食子酸峰面积的RSD分别为1.83% 和1.36%，表明定溶于75%甲醇溶液的样品溶液在12 h内稳定性良好。

注：F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00

表5　验证试验样品各指标成分含量测定结果

［1］刘洪，许惠琴.山茱萸及其主要成分的药理学研究进展［J］.南京中医药大学学报，2003，19（4）：254-256.

［2］率晓东，杨胜，齐春会，等.山茱萸免疫活性部位F-1C的免疫抑制作用［J］.中国天然药物，2004，2（1）：50-53.

［3］ 李肖玲，崔岚，祝德秋.没食子酸生物学作用的研究进展［J］.中国药师，2004，7（10）：767-769.

［4］杨凌，朱昱，王晓华.HPLC检测山茱萸中没食子酸和马钱苷的含量［J］.陕西中医，2013，34（8）：1057-1059.

Optimization of Extraction Process of Qizhu Capsules by Orthogonal Experiment

Cui Cuicui，Wang Yinglan，Liu Yuankun（Weihai TCM Hospital，Shandong Weihai 264200，China）

Objective：To screening the optimal extraction process of qizhu capsules.Methods：The extraction process of qizhu capsules was optimized by orthogonal experiment using the extraction rate and the contents of gallic acid and loganin as indexes，while extraction times，time duration for extraction and water volume as factors. Results：The extraction process was optimized as extraction with 10 times of volume of water for 2 times，1 hour for each.Conclusion：The optimized extraction process is reasonable and feasible，which provides a basis for the actual production and quality control of the drug.

Qizhu Capsules；Extraction Process；Extraction Rate；Gallic Acid；Loganin；Orthogonal Experiment

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.06.007

崔翠翠，女，硕士，主管药师。研究方向：中药学。通讯作者E-mail：cuiatpingdu@163.com

2016-02-19）