两种提取方法对生殖营养胶囊提取条件的研究

王秀文，闫润红，裴晓丽，翟晓艳，霍俊凤，鹿兆飞（山西中医学院，山西太原030024）

两种提取方法对生殖营养胶囊提取条件的研究

王秀文，闫润红，裴晓丽，翟晓艳，霍俊凤，鹿兆飞
（山西中医学院，山西太原030024）

目的：对生殖营养胶囊的提取条件进行初步探索。方法：运用正交设计法，对回流提取法和超声提取法的提取条件进行优化，并对这两种方法进行比较。结果：采用回流提取法，较适宜的提取条件为提取时间1h，料液比1∶16，提取溶剂为水。超声提取法适宜的提取条件是超声时间15min，料液比1∶16，提取溶剂为水，超声次数为3次。在适宜的条件下，回流提取法的浸膏率（33.11%）远大于超声提取法的浸膏率（11.31%），因此回流提取法优于超声提取法。结论：回流提取法简单易操作、成本低，可作为制备生殖营养胶囊生产工艺的参考。

生殖营养胶囊；回流提取；超声提取；浸膏率；正交试验

五子衍宗丸起源于唐代，记载于《悬解录》中，方由五味子、枸杞子、菟丝子、覆盆子和车前子组成。方中用枸杞子、菟丝子补肾，覆盆子滋精，五味子生血，车前子利尿固精，具有明显的补肾壮阳生精作用［1］。在我国，五子衍宗丸一般仍以传统丸剂入药，丸剂服用剂量大，溶散时限较长，而且微生物容易超标，口感差［2］。为了克服这些缺点，一些研究人员研究了片剂［3］、口服液［4］和胶囊剂［5-6］。对于胶囊剂，他们只是研究了质量标准［5-6］，胶囊剂的提取条件未见报道。而且为了增加疗效，减小药物副作用，我们深入研究了祖国医学传统理论和现代生殖营养最新理论，在胶囊剂基础上添加了一些生殖营养必需物质牛磺酸、氧化锌和破壁松花粉。研究表明这些物质能促进生长发育，调整性腺分泌功能，提高精子质量，同时还能提高机体免疫功能［7-9］，对人体各系统都有良好的调整作用。因此，本文研究的加味五子衍宗胶囊即生殖营养胶囊既能提高精子质量，治疗由此导致的男性不育，也能通过保护生殖细胞而维护全身的健康，系中医补肾填精养生与现代生殖营养学说的完美结合。本文对生殖营养胶囊的提取条件进行了初步探索。

1　材料与方法

1.1实验材料

1.1.1药材与试剂枸杞子、菟丝子（炒）、五味子（蒸）、覆盆子、车前子（盐）（均由北京同仁堂购买），药经山西中医学院裴香萍副教授鉴定为正品。

75%乙醇（山东利尔康消毒科技有限公司），破壁松花粉（中国农业科学院，北京中农科技术开发公司），医用级牛磺酸（郑州浩力化工有限公司），食用级氧化锌（河南海顺化工有限公司）。

1.1.2实验仪器FA1004N分析天平（上海方瑞仪器厂）、AB135-S十万分之一分析天平（上海方瑞仪器厂）、数显恒温水浴锅（上海申勝生物技术有限公司）、XMTH数显温控仪烘干箱（浙江余姚市远东数控仪器生产有限公司）、KQ5200V型超声清洗仪（浙江余姚市远东数控仪器生产有限公司）。

1.2实验方法

1.2.1生殖营养胶囊的回流提取方法

1.2.1.1回流提取方法在生殖营养胶囊的回流提取工艺中，我们考察的主要因素有：回流时间、提取溶剂和料液比3个因素。根据预实验取值分别为：回流时间：1h、2h、3h；提取溶剂：75%乙醇、40%乙醇、水；料液比：1∶8、1∶12、1∶16；提取次数为2次。根据正交实验表中的L9（34）设计出实验方案。结果见表1。

表1　生殖营养胶囊的回流提取正交实验方案　（n=2）

1.2.1.2回流提取过程分别把炒菟丝子、五味子、覆盆子和车前子药材用粉碎机粉碎，过20目筛。分别称取枸杞子8.0g，菟丝子8.0g，五味子1.0g，覆盆子4.0g和车前子2.0g于圆底烧瓶中。按表1设计方法回流提取。

1.2.1.3干膏的制备将2次提取液合并，静置1h，然后置于离心机上离心10min，取上层溶液。将离心完成的药液进行抽滤，滤液置于电炉上浓缩至浓稠液体，然后再置于水浴锅上浓缩成稠膏。将稠膏置于60℃恒温干燥箱中干燥，直至成干膏。干膏的含水量依据文献［10］测定。将干膏研细，置于干燥器中，备用。

1.2.2生殖营养胶囊的超声提取方法

1.2.2.1超声提取方法在生殖营养胶囊的超声提取工艺中，我们考察的主要因素有：超声时间、提取溶剂、料液比和超声次数4个因素。根据预实验取值分别为：超声时间：15min、25min、35min；提取溶剂：75%乙醇、40%乙醇、水；料液比：1∶8、1∶12、 1∶16；提取次数：1次、2次、3次。根据正交实验表中L9（34）设计出实验方案。结果见表2。

表2　生殖营养胶囊的超声提取正交实验方案

1.2.2.2超声提取过程分别把炒菟丝子、五味子、覆盆子和车前子药材用粉碎机粉碎，过20目筛。分别称取枸杞子8.0g，菟丝子8.0g，五味子1.0g，覆盆子4.0g和车前子2.0g于具塞锥形瓶中。按表2设计方案超声提取。

1.2.2.3超声提取干膏的制备及干燥按照1.2.1.3项下所述方法制备干膏及干燥。

1.2.3生殖营养胶囊的制备

精密称取回流（或超声）提取的3号干膏约3g，添加适量的120 mg/kg食用级氧化锌，3g/kg医药级牛磺酸，30g/kg破壁松花粉，研细，充分混匀。用0号胶囊装粒，每粒重量为0.3g，共装9粒。

2结果

2.1回流提取结果与分析

按1.2.1.2项下方法进行回流提取。实验结果如表3和表4所示。

表3　回流提取正交实验直观分析表

由表3可知，B因素极差最大，其次为C因素、A因素，因此3个因素主次顺序为BCA。由表4可知，B因素对实验结果有显著性影响，而C和A对实验结果的影响不显著，因此选取B因素的最高水平B3作为B因素的最佳水平，结合生产成本和实际生产效率综合考虑，A因素和C因素较适合的水平为A1和C3。故3号实验方案A1B3C3为优选方案。即：提取时间为1h、提取溶剂为水、料液比为1∶16。F0.05（2，2）=19.00，F0.01（2，2）=99.00

2.2超声提取结果与分析

结果见表5、表6。

表4　回流提取正交实验方差分析表

表5　超声提取正交实验直观分析表

表6　超声提取正交实验方差分析表

由表5可知，B因素极差最大，其次为D、C、A，因此4个因素主次顺序为BDCA。由表6可知，A、B和C对实验结果的影响均不显著。由表5所示，3号实验组浸膏率最大，为12.43%，而9号的浸膏率次之，为11.31%。综合考虑成本和操作便利问题，确定9号实验方案为优选方案。即：提取时间为35min、提取溶剂为水、料液比为1∶12、超声次数为1次。

2.3工艺验证

2.3.1回流提取工艺验证按照1.2.1.2项下方法平行称取5味药材各3份，并按照1.2.1.3项下方法制备干膏，计算浸膏率，所得浸膏率分别为32.81%，33.21%，32.62%，3次浸膏率的RSD为0.31%，说明该工艺稳定性、重复性好。

2.3.2超声提取工艺验证按照1.2.1.2项下方法平行称取5味药材各3份，并按照1.2.2.3项下方法制备干膏，计算浸膏率，所得浸膏率分别为11.72%，11.12%，10.91%，3次浸膏率的RSD为0.42%，说明该工艺稳定性、重复性好。

3讨　论

本实验采用正交法设计实验方案对生殖营养胶囊提取条件进行了初步探索，分别对回流提取方法和超声提取方法进行了研究。回流提取方法适宜的提取条件是：提取时间为1h、料液比为1∶16、提取溶剂为水。超声提取方法适宜的提取条件是：超声时间为35min、料液比为1∶12、提取溶剂为水、提取次数为1次。在适宜的条件下，回流提取方法的浸膏率（33.11%）远大于超声提取方法的浸膏率（11.31%）。因此传统的回流提取法优于现代超声提取方法，传统的回流提取法是生殖营养胶囊适合的提取方法。

［1］孙志伟，李玉洲，张长城.五子衍宗丸药理作用及其临床研究进展［J］.亚太传统医药，2010，6（12）：179.

［2］张兆旺.中药药剂学［M］.北京：中国中医药出版社，2007：304-307.

［3］仇雅静.五子衍宗片质量标准研究［J］.现代中药研究与实践，2007，21（5）：30-32.

［4］冯志成.五子衍宗口服液联合复方玄驹胶囊治疗少弱精子症的临床观察［J］.中国热带医学，2007，7（11）：2 113，2 128.

［5］丁伟杰，白敦耀，黄丹，等.高效液相色谱法测定五子衍宗胶囊中五味子醇甲的含量［J］.中国医院药学杂志，2008，28（4），315-316.

［6］孙永慧，姚琳，王建明.五子衍宗胶囊的质量标准研究［J］.中成药，2006，28（4）：597-598.

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［8］赵立新.松花粉的作用机理及临床研究［J］.吉林中医药，2004，25（1）：49-51.

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［10］曾元儿，张凌.分析化学［M］.北京：科学出版社，2007：31.

（编辑：翟春涛）

Optimization of the orthogonal extraction conditions for Shengzhi Yingyang capsule

Wang Xiuwen，Yan Runhong，Pei Xiaoli，Zhai Xiaoyan，Huo Junfeng，Lu Zhaofei
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：The privary research in optimize extracting terms of nutrition capsule.Methods：By using the method of orthogonal design，we optimized extraction condition of refluxing extraction and sonic extraction，and also compared these two methods.Results：For the refluxing method，the suitable extracting time is 1h，the material to liquid ratio is 1∶16 and extraction solvent is water.For the sonic extraction wltrasonic time of 15min，the material to liquid ratio is 1∶16，ultrasonic frequency is three times.Under the obove conditions，the extract rate of reflux extraction（33.11%）is more higher than that of ultrasonic extraction method（11.31%）.Therefore，refluxing extraction is superior to the ultrasonic extraction. Conclusion：The reflux extraction is easy to operate and its costs are low which can be used as the reference of produce the reproductive shengzhi Yingyang capsule.

Shengzhi Yingyang capsule；reflux extraction；ultrasonic extraction；extract rate；'orthogonal design

R285.5

A

1671-0258（2016）03-0026-03

太原市科技局产学研战略联盟专项项目资助（10011618）

王秀文，硕士研究生，讲师，E-mail：13934089917@163.com

闫润红，教授，E-mail：yanrunhong999@126.com