TAG-72、GRP94在乳腺癌中的表达①

王　新，廉奇鑫，周　昱，韩丽丽

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江 佳木斯 154003)



TAG-72、GRP94在乳腺癌中的表达①

王新，廉奇鑫，周昱，韩丽丽

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江 佳木斯 154003)

摘要：目的：通过检测人体乳腺癌组织中TAG-72、GRP94的表达情况，分析TAG-72、GRP94在乳腺癌组织中的表达特点，并探讨它们之间的相互关系。方法：应用免疫组化方法检测90例正常乳腺组织、乳腺癌组织中TAG-72、GRP94的表达，同时收集患者的临床病理资料进行相关的统计分析。结果：①GRP94在乳腺癌及正常乳腺组织中的阳性表达率分别为78.89%、21.11%，在正常的乳腺组织中表达相比较乳腺癌组织明显下降，比较后差异具有统计学意义(P<0.05)。GRP94在乳腺癌组织中且无淋巴结转移组中的阳性表达率为63.33%，在乳腺癌组织中且有淋巴结转移组的阳性表达率为93.33%，GRP94的蛋白表达与乳腺癌的淋巴结转移有明显相关性(P<0.05)。②TAG-72在乳腺癌组织中与正常乳腺组织中阳性表达分别为30.00%、94.44%。在正常乳腺组织相较于乳腺癌组织明显升高，比较后差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:①GRP94在乳腺癌组织的阳性表达率明显比正常的乳腺组织中的阳性率高，TAG-72蛋白在正常的乳腺的组织中的阳性表达率比在乳腺癌组织中显著高，故GRP94在乳腺癌中呈高表达，TAG-72在乳腺癌中呈现低表达，与乳腺癌的发生、发展之间有密切关系。②GRP94、TAG-72之间存在负相关性，可能在促进乳腺癌的发生、发展过程中存在着相互的联系。

关键词：乳腺癌；TAG-72；GRP94；免疫组织化学

乳腺癌(breast cancer)是全世界范围内女性一种非常常见的恶性肿瘤[1]。全球每年大概有150万人被确诊为乳腺癌，每年死于乳腺癌将近50万人。乳腺癌的发病率以每年3%的速度逐年递增，且患者的发病年龄越来越年轻化。乳腺癌的发病率在欧美等的发达国家中属于最高，据报道美国国家新进发生的乳腺癌在2007年一年之内就有178480例，在所有新发恶性肿瘤患者中乳腺癌新发例数占26%，乳腺癌的死亡率已经排在女性恶性肿瘤死因的首位；亚洲地区乳癌的发病率相对于欧美地区来说是比较低的，但是根据乳腺癌的流行病学研究，近些年亚洲地区乳腺癌的发病率也在逐年增加。在我国，乳腺癌占全身恶性肿瘤的7%～10%，有部分大城市报告结果称，乳腺癌到今日已经升为女性首位恶性肿瘤。多学科(遗传学、分子遗传学、流行病学、化学致癌动物模型等)研究证明，恶性肿瘤的发生及进展过程是多种因素在长时间作用下形成的]。研究表明，细胞信号传导反常是众多致病因素中与肿瘤的发生进展有着必不可少的关系，信号转导通路上蛋白表达的不正常表现在促生长因子的作用下轻而易举的被细胞合成，从而导致细胞发生增殖失控以及肿瘤的发生。近些年，随着分子生物学的快速发展，对于恶性肿瘤的发生、发展以及治疗也进一步深入。

本课题研究通过免疫组化方法测验90例乳腺癌、90例癌旁正常组织中TAG-72、GRP94两因子的表达情况，并探索其临床意义和TAG-72、GRP94在乳腺中是否有关系。

1资料与方法

1.1标本来源

在佳木斯大学附属第一医院病理科提取2013-05～2015-07乳腺癌石蜡包块：分别为90例乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织。术前均未行放、化疗及生物靶向治疗等治疗方案，每例样品的选取都做到有肉眼可见的淋巴结、手术切缘都未有癌浸润的正常乳腺组织及癌灶取材。在选取的90例乳癌患者中无淋巴结转移的患者标本有60例，有淋巴结转移的患者标本有30例。患者均为女性，年龄30～68岁，中位年龄49岁。全部术后的病理标本均经佳木斯大学病理科有经验的医师证实为浸润性的导管癌，淋巴结有无转移也均经病理证实。所选取的所有标本均先浸泡于10%福尔马林液中并给予固定，然后行石蜡包埋制片，后应用HE染色和免疫组化检测。肿瘤的大小技计数以最大截面剖开肿瘤后的最长横径。TNM分期以2015年新的分期系统(美国癌症联合会 AJCC和国际抗癌联盟 UICC制定)为标准进行。所有患者的临床资料(患者年龄、一般情况及既往疾病史等、肿瘤的大小、淋巴结浸润情况、疾病临床分期及脉管浸润情况)均完整并由本院病案室提供。

1.2主要试剂

TAG-72兔抗单克隆抗体GRP94兔抗单克隆抗体都由北京博奥森生物技术有限公司产品生产，通用Elivision法试剂盒以及DAB显色试剂都是从北京中衫金桥生物技术有限公司买入。

1.3免疫组化

通过免疫组化方法(Elivision法)探索TAG-72、GRP94在乳腺癌及正常癌旁组织中的表达情况。

1.4结果判定

TAG-72蛋白主要位于细胞质，部分位于细胞膜，阳性者可见细胞质染色呈棕黄色颗粒，在肿瘤组织中呈弥漫或片状分布。运用二级的计分法进行结果判定: 染色数量的计数(每高倍视野下5个以上阳性细胞比例计数)：<5%为0分； 5%～25%为1分；26%～50%为2分；>50%为3分。染色强度分类: 镜下见淡黄色计为1分；镜下见染色黄色或深黄色为2分；褐色或者是棕褐色为3分。最后将两者所得计数相乘大于1 分者为阳性。GRP94蛋白主要表达于细胞质，免疫组化结果可见细胞膜与细胞质分别呈猩红色和暗紫色。以高倍镜( 400×)观察5个视野，每个视野观察100个细胞。染色强度分级为: 阴性(-):细胞不显色或显色<25%；弱阳性(+):25%～50% 细胞显色；中度阳性():51%～ 75% 细胞显色，着色较深；强阳性():>75%细胞显色，着色深。弱阳性、中度和强阳性均记为阳性。所有免疫组化结果由两位高年资病理医师双盲阅片，对于不一致的判定结果，经讨论后得出一致结果。

1.5统计学方法

2结果

2.1GRP94在正常乳腺组织、乳腺癌组织中的表达

经观察GRP94在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的阳性染色位于细胞质内， GRP94分别在正常乳腺组织以及乳腺癌组织中阳性表达见表1。从结果中可以看到GRP94在正常乳腺组织中的阳性率为21.11%(19/90)，在癌组织中表达的阳性率为78.89%(71/90)，GRP94蛋白在乳腺癌组织中的表达相较于正常乳腺组织中的表达明显升高，两者的差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1　GRP94在正常乳腺组织、乳腺癌组织的表达

2.2TAG-72在正常乳腺组织、乳腺癌组织中的表达

TAG-72在正常乳腺组织以及乳腺癌组织中的阳性染色位于细胞质内。 TAG-72蛋白在正常乳腺组织以及乳腺癌组织中的阳性表达见表2。从结果中可以看出TAG-72在正常乳腺组织中的阳性表达率是94.44%(85/90)，在癌组织中的表达的阳性率是30.00%(27/90)，TAG-72蛋白在乳腺癌中的表达情况相较于正常乳腺组织明显降低，两者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。

表2　TAG-72在正常乳腺组织、乳腺癌组织的表达

2.3GRP94表达与TAG-72表达的相关性分析

GRP94蛋白表达结果与TAG-72蛋白表达结果之间的相关性分析，见表3；71例GRP94蛋白表达阳性的乳腺癌组织中有18例标本TAG-72蛋白呈阳性表达；63例TAG-72蛋白表达阴性的乳腺癌组织中有10例GRP94蛋白呈阴性表达；GRP94表达与TAG-72表达具有明显的负相关性(r=-0.635，P=0.002，P<0.05)，比较后差异具有统计学意义。

表3　GRP94表达与TAG-72表达的相关性分析

3讨论

GRP葡萄糖调节蛋白它是作用在细胞内质网的一种应激蛋白，每当细胞的内环境发生改变时候都会马立即做出反应，比如细胞内低糖时、细胞内缺氧时、以及细胞内钙失衡时候或内质网中出现蛋白质的错误折叠时等一系列可导致细胞应激反应的细胞事件。GRP94是分子质量为94kD的蛋白质，只存在于真核生物中，是内质网中数量最多的糖蛋白。GRP94作为分子伴侣，在细胞内环境发生变化时，如：内质网应激，可与未折叠的多肽链结合，阻止错误蛋白质聚集，抑制错误蛋白质的分泌。目前研究表明，GRP94在肿瘤的发生、发展中起着重要作用，对肿瘤的治疗及预后具有重要的临床意义。

肿瘤相关糖蛋白72(TAG-72),抗原是一种广泛在肿瘤中表达阳性率较高的肿瘤相关抗原,可于消化道肿瘤、卵巢肿瘤及肺癌中强势表达,其表达常提示肿瘤预后差[2～4]。已有研究TAG-72对多种恶性肿瘤有提示诊断价值,但其在乳腺癌织中的表达及其参与乳腺癌发生发展的相关研究并不多。本实验应用免疫组化的方法得出GRP94、TAG-72在乳腺组织及乳腺癌组织中均可以表达，但表达水平不一致其中GRP94呈高表达，TAG-72呈低表达，进而推断出乳腺癌组织中存在未折叠蛋白反应、内网应激及凋亡通路抑制。

葡萄糖调节蛋白94(GRP94)[6]员在乳腺癌组织中阳性表达患者生存率明显低于阴性者， 由此认

为该因子可以作为判断肿瘤生物学行为及预后的指标。因此研究二者表达情况对乳腺癌的诊断及预后有着积极的作用。本实验采用免疫组化的方法，对于TAG-72、GRP94在乳腺癌中的表达做定性加定量分析。对本实验的90例患者进行免疫组化实验，预实验检查GRP94、TAG-72是否在乳腺癌组织中表达。其结果显示：GRP94在乳腺癌呈高表达，TAG-72在乳腺癌中呈低表达，该结果符合前人的部分研究结论[6，7]。

本实验中，GRP94、TAG-72在乳腺癌及癌旁组织中均有表达，但在 90例乳腺癌标本中， GRP94、TAG-72其阳性表达率分别78.89%、30%，90例癌旁组织中阳性表达率分别为21.11%、94.44%。结果显示GRP94在乳腺癌中阳性表达率明显高于癌旁组织，TAG-72在乳腺癌中阳性表达率明显低于癌旁组织。提示：GRP94是乳腺癌组织中高表达因子，TAG-72是乳腺癌组织中低表达因子，二者有望成为乳腺癌的新诊断目的因子。在关于GRP94、TAG-72在乳腺癌临床分期及临床病理之间的研究中，根据免疫组化结果显示：GRP94、TAG-72在不同分化程度的乳腺癌组织中的表达差异有统计学意义，本研究结果显示，TAG-72、GRP94在乳腺癌之间呈负相关关系。TAG-72、GRP94在乳腺正常组织之间仍呈负相关。TAG-72、GRP94可能在未来成为乳腺癌新的肿瘤参考因子。

参考文献：

[1]王新，范立君，李壮，等.GRP78、GRP94在乳腺癌中的表达及其意义[J].黑龙江医药科学，2014，37(6)：89-91

[2]Lindquist S,Craig EA. The heat-shock proteins[J].Annu Rev Genet ，1988，22：631-677

[3]Morimoto RI. Cells in stress:transcriptional activation of heat shock genes[J].Science，2010，259:1409-1410

[4]Schlesinger MJ.Heat shock proteins[J].J Biol Chem，1990，265:12111-12114

[5]李壮、田寅、苏俊强，等.GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表达及意义[J].黑龙江医药科学，2015,38(4):89-91

[6]应小平,杨守京,王敏,等.人乳腺癌中葡萄糖调节蛋白94(Grp94/Gp96)的表达及意义[J].现代肿瘤医学,2011,11(3): 176-177

[7]Ito T, Shiraki K, Sugimoto K. Survivin promotes cell proliferation in human hepatocellular carcinoma [J].Hepatology,2013,31(5):1080-1085

基金项目：①1.黑龙江省青年基金，批准号：QC2013C013；2.佳木斯大学青年基金，编号：sq2013-013。

作者简介：王新(1962～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。 通讯作者：周昱(1969～)男，黑龙江集贤人，学士，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail:zhouyu731@126.com。

中图分类号：R737.9

文献标识码：A

文章编号：1008-0104(2016)03-0017-02

(收稿日期：2015-11-07)