PTEN基因甲基化及其表达异常与胃癌的关系分析

陈倩倩　朱永刚　冯　丽

PTEN基因甲基化及其表达异常与胃癌的关系分析

陈倩倩朱永刚冯丽

【摘要】目的探讨PTEN基因甲基化及其表达异常与胃癌的关系。方法从我院选取120例胃癌患者作为临床研究对象。对患者PTEN基因甲基化及其表达异常情况进行分析，并探讨PTEN基因甲基化以及PTEN基因表达异常与胃癌的关系。结果胃癌组织表达呈阳性的患者例数，多于阴性的患者例数，同时，癌旁正常组织表达呈阳性的患者少于阴性患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论胃癌患者PTEN基因和表达异常情况都与癌症组织的启动子区甲基化有较大关系，是患者胃癌发生和发展以及转移的原因之一。

【关键词】胃癌；PTEN基因甲基化；表达异常

Objective To probe into the relation between the methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene and gastric cancer.Methods 120 cases of patients with gastric cancer from our hospital were selected as the objects of clinical study.The methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene in patients was analyzed，and the relation between the methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene and the gastric cancer was discussed and investigated.Results Gastric cancer tissue expression positive in patients was significantly more than the negative patients，at the same time，the adjacent normal tissue expression positive was significantly less than the negative patients，the difference was significantly different（P＜0.05）. Conclusion The PTEN gene as well as its abnormal expression in gastric cancer patients was greatly related to the methylation in the promotor region of the gastric cancer tissue，which was one of the reasons accounting for the genesis，development and metastasis of gastric cancer in patients.

【Key words】Gastric cancer，PTEN gene methylation，Abnormal expression

临床研究发现，胃癌发病有家族易感性，即同一家族中胃癌发病率高于散发人群，且发病年龄较轻，最近文献将其称之为“遗传性癌症综合征”。人体内第十号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因PTEN是临床癌症治疗研究中发现的首个具有磷酸酶活性的抑癌基因［1-2］。PTEN正常的表达情况下，肿瘤细胞在它的影响下无法正常生长，主要是由于肿瘤细胞在生长过程中会出现被动抑制性变化，从而导致肿瘤细胞的凋亡，同时PTEN还参与细胞周期的调控以及抑制细胞的粘附及肿瘤转移的功能［3-4］。选取本院2011年6月～2014年6月的部分胃癌患者，对PTEN基因甲基化及其表达异常与胃癌的关系进行相关研究，现将研究过程报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

自2011年6月～2014年6月，在我院选取120例胃癌患者作为临床研究对象，女性40例，男性80例，年龄在28～62岁，平均年龄为（40.23±18.95）岁，患者平均体质量为（56.82±9.56）kg，平均身高为（164.45±8.15）cm。120例患者中初中学历及以下有40例，高中学历55例，大专及以上学历25例。所有患者均符合胃癌诊断标准，平均病程为（2.25±1.12）年。所有参与本次实验的患者对本实验项目有足够的了解，均属于自愿行为，同时签署实验相关自愿协议。为贯彻伦理学原则，在整个实验进行过程中，所有患者均可以随时退出。以上所有患者在一般资料方面，如性别、年龄和文化程度以及病程等差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。

1.2方法

具体方法为：首先切取患者癌症组织标本和非癌症组织标本，离体后立即放入液氮，然后放进-70℃的冷藏库进行保存。免疫组化：PTEN单克隆抗体4℃过夜孵育，PBS冲洗3次，5 min/次。生物素标记的鼠抗人ІgG室温孵育20 min，PBS冲洗3次，5 min/次。滴加SABC室温孵育20 min后PBS充分冲洗。DAB显色，苏木素染色，封片，光镜下观察［5］。PTEN异常甲基化检测：两份标本均使用蛋白酶K-苯酚抽提法抽提总DNA，然后对DNA进行纯化，同时使用亚硫酸氢盐修饰，最后进行聚合酶链式反应观察。患者癌症组织标本上游引物和下游引物确定后，扩增片段长度为71 bp。患者非癌症组织标本DNA上游引物和下游引物确定后，扩增片段长度为162 bp。引物各为0.4μg，在94℃环境下放置5 min预变性，然后开始35个循环，循环为94℃30s-57℃30S-72℃30 S，最后于72℃延伸5 min，最后在4℃环境下保存。PCR产物使用含量为2%的琼脂糖凝胶电泳后，对条带进行观察［6］。

表1　患者PTEN基因的表达情况n（%）

1.3观察指标

甲基化阳性：U引物未扩增出条带，而M引物扩增出71 bp的条带。甲基化阴性：M引物未扩增出条带，U引物扩增出162 bp的条带。

1.4统计学方法

本研究数据使用SPSS 10.0软件分析，计数资料以n（%）形式表示，用χ2检验。可信区间以95%作为标准。当P＜0.05时，差异具有统计学意义。

2　结果

根据对患者基因表达情况的观察可知，胃癌组织表达呈阳性的有72例，多于阴性患者48例，差异具有统计学意义（χ2=100.52；P＜0.05）；同时，癌旁正常组织表达呈阳性的患者仅有4例，呈阴性的有116例，二者差异具有统计学意义（χ2=20.67；P＜0.05），详见表1。

3讨论

PTEN具有抑制生长，促进细胞凋亡，并参与细胞周期的调控以及抑制细胞的粘附及肿瘤转移的功能，自其1997年发现以来就成为研究的热点［7］。研究PTEN的表达和启动子甲基化的关系及作用机制也将有利于我国胃癌发病机制的研究［8］。PTEN的异常表达与胃癌等恶性肿瘤的发生发展生物学行为和预后有密切的关系。研究结果显示胃癌组织表达呈阳性的患者多于阴性的患者例数，同时，癌旁正常组织表达呈阳性的患者少于阴性患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）。本研究通过检测PTEN在胃癌组织和非胃癌组织中的表达，已明确PTEN可作为胃癌的检测项目之一。

综上所述，胃癌患者PTEN基因和表达异常情况都和癌症组织的启动子区甲基化有关系，是患者胃癌发生和发展以及转移的原因之一。

参考文献

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［2］叶新青，覃思繁，陈发龙.生存素和磷酸酶基因在胃癌中的表达［J］.中国基层医药，2010，17（12）：1587-1589.

［3］葛恒发.胃癌及癌前病变组织中survivin、PTEN蛋白的表达变化及其与HP感染的相关性［J］.山东医药，2010，50（18）：62-63.

［4］孙波.HP相关性胃病变组织Survivin和VEGF的表达及其意义［J］.中华肿瘤防治杂志，2010，17（8）：571-573.

［5］张芬，王志红，赵敏，等.良恶性胃溃疡组织中PTEN、survivin的表达及意义［J］.临床与实验病理学杂志，2013，29（2）：167-170.

［6］鹿强，臧爱民，冯树明.PTEN和P27kip1蛋白在胃癌及癌前病变中的表达和意义［J］.重庆医学，2013，42（5）：508-510.

［7］王志红，鲍德明，石振旺，等.溃疡型胃癌和癌前病变中PTEN、Survivin的表达及临床意义［J］.临床与实验病理学杂志，2015，31（10）：1153-1156.

［8］甘伟平，罗陈飘，陈喜志，等.抑癌基因PTEN和p53在胃癌中的表达及意义［J］.中华实用诊断与治疗杂志，2016，30（1）：68-70.

【中图分类号】R735.2

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）11-0186-02

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.11.127

基金项目：吉林省卫生厅课题。课题名称：抑癌基因PTEN的表达及启动子甲基化与胃癌遗传易感性的相关性研究。课题编号（20122113）

作者单位：吉林大学中日联谊医院放疗科，吉林长春130033

Analysis of Methylation of PTEN Gene and Abnormal Expression and its Relationship With Gastric Cancer

CHEN Qianqian ZHU Yonggang FENG Li Department of Radiotherapy，China and Japan Union Hospital of Jilin University，Changchun Jilin 130033，China

【Abstract】