真武胶囊联合苯那普利治疗扩张性心肌病实验研究

高鸿山宋堃高焕萍

真武胶囊联合苯那普利治疗扩张性心肌病实验研究

高鸿山1宋堃2高焕萍1

目的观察真武胶囊联合苯那普利治疗大鼠扩张性心肌病疗效。方法32只2周龄Wistar雄性大鼠喂养呋喃唑酮8周，建立扩张性心肌病动物模型。造模成功后，随机等分为真武胶囊组、苯那普利组、联合组及模型对照组，每组8只，分别予灌胃真武胶囊[1.8g/（kg·d）]、苯那普利[3.33mg/（kg·d）]及真武胶囊联合苯那普利，模型对照组不干预，正常喂养。8周后超声测量大鼠左心室舒张末期内径（LVDD）、收缩末期内径（LVSD）、射血分数（LVEF）；检测各组大鼠心肌胶原含量、心肌细胞凋亡指数，显微镜下观察心肌结构。结果（1）大鼠左心室舒张末期内径（LVDD）：真武胶囊组（0.57±0.05）cm，苯那普利组（0.56±0.10）cm，联合组（0.51±0.11）cm，均较模型对照组（0.67± 0.03）cm明显缩小，差异有统计学意义（P＜0.05）；（2）大鼠左心室收缩末期内径（LVSD）：真武胶囊组（0.34±0.12）cm，苯那普利组（0.35±0.06）cm，联合组（0.31±0.04）cm，均小于模型对照组的（0.42± 0.01）cm，差异有统计学意义（P＜0.05）；（3）射血分数：真武胶囊组（59.3±2.1）%，苯那普利组（60.2± 2.3）%，联合组（68.3±1.2）%，均高于模型对照组的（36.1±1.1）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。联合组LVDD、LVSD及射血分数均优于真武胶囊组与苯那普利组（P＜0.05）。（4）大鼠心肌胶原含量：真武胶囊组（8.33±1.2）μg/mgprot，苯那普利组（8.22±2.1）μg/mgprot，联合组（6.34±1.1）μg/mgprot，均小于模型对照组的（10.45±2.2）μg/mgprot；（5）心肌细胞凋亡指数：真武胶囊组10.6±2.1，苯那普利组10.4±1.5，联合组8.2±1.4，均低于模型对照组的17.9±2.1，差异有统计学意义（P＜0.05）。联合组较真武胶囊组和苯那普利组减少（P＜0.05）。镜下观察，模型对照组大鼠心肌纤维排列紊乱，纤维结缔组织增生明显。联合组大鼠心肌纤维排列整齐，纤维结缔组织增生改善明显，优于真武胶囊组及苯那普利组。结论真武胶囊联合苯那普利能明显缩小大鼠扩大的心脏，提高射血分数，减少心肌胶原含量，抑制心肌细胞凋亡，改善心肌重构。

大鼠；扩张性心肌病；真武胶囊；苯那普利

扩张性心肌病（DCM）以心脏扩大，心肌收缩力降低为主要特征，临床治疗效果不理想，预后差。本研究观察真武胶囊联合苯那普利对扩张性心肌病模型大鼠的治疗效果，报道如下。

1 实验材料

1.1 动物选取2周龄，Wistar健康雄性大鼠32只，体质量（70.3±5.1）g，由山东中医药大学动物中心提供，合格证号：SCXK（鲁）20110003。饲养环境符合国家标准（GB14925-94）

1.2 药物真武胶囊处方：附子、茯苓、白芍各9g，白术6g，生姜9g，黄芪12g，丹参、降香各10g；加水煎煮两次，第一次1h，第二次0.5h，滤过后，上清液浓缩成2g/mL流浸膏，将其干燥制成粉末，装入胶囊。苯那普利片（商品名：洛丁新，北京诺华制药有限公司，H20000292）；呋喃唑酮（成都市前江制药厂，H51020009）。

1.3 主要仪器及试剂GE-VIVDE7彩超，探头频率10MHz（美国GE公司）；莱卡轮转式切片机（2135型德国莱卡公司）；显微镜（BX60日本OLYMPUS）；TUNEL检测细胞凋亡试剂盒（德国BM公司）；羟脯氨酸试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

2 实验方法

2.1 造模及分组参照文献[1]方法，呋喃唑酮、羧甲基纤维素钠，配成2g/mL溶液，按0.2g/g体质量灌胃，1天1次，每周按体质量调节用药剂量，共8周。造模后，将32只大鼠随机等分为真武胶囊组、苯那普利组、联合组及模型对照组，每组8只，分别给予灌胃真武胶囊[1.8g/（kg·d）]、苯那普利[3.33mg/（kg· d）]及真武胶囊联合苯那普利（剂量同上）；模型对照组不干预，正常喂养。8周后进行指标检测。

2.2 观察指标

2.2.1 心脏超声检测10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，去胸毛后，连续测量3个心动周期的左室舒张末期内径（LVDD）、收缩末期内径（LVSD）、左室射血分数（LVEF），取其平均值。

2.2.2 心肌胶原含量测定处死大鼠后，取部分左心室，剪碎，在玻璃匀浆管中制备组织匀浆，遵照试剂盒说明操作。通过测量胶原中羟脯氨酸含量推算胶原含量。

2.2.3 光学显微镜下观察心肌结构切取部分心尖组织置于4%多聚甲醛液固定24h，脱水、石蜡包埋。供光学显微镜检查及细胞凋亡检测。

2.2.4 细胞凋亡检测采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡，将石蜡包埋心肌组织进行切片，按照试剂盒说明操作。结果判定：200倍视野下，每个切片取10个视野，计数10个视野的凋亡细胞数，取其平均值作为凋亡细胞的阳性指数（AI）。

2.3 统计学方法应用SPSS11.5统计软件进行分析。数据以（）表示，组间比较采用方差分析；P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 各组大鼠心脏超声检测情况各用药组左室舒张期及收缩期内径较模型对照组明显缩小，射血分数明显提高（P＜0.05）；联合组改善最明显，优于真武胶囊组及苯那普利组（P＜0.05），真武胶囊组及苯那普利组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

3.2 各组大鼠心肌胶原含量比较各用药组心肌胶原含量较模型对照组明显减少（P＜0.05）；联合组减少优于真武胶囊组及苯那普利组（P＜0.05）；真武胶囊组和苯那普利组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1 各组大鼠LVDD、LVSD、LVEF比较（）

表1 各组大鼠LVDD、LVSD、LVEF比较（）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05；与联合组比较，#P＜0.05；LVDD：左室舒张末期内径；LVSD：左室收缩末期内径；LVEF：左室射血分数

组别真武胶囊组苯那普利组联合组模型对照组只数8 8 8 8 LVDD（cm）0.57±0.05*#0.56±0.10*#0.51±0.11* 0.67±0.03 LVSD（cm）0.34±0.12*#0.35±0.06*#0.31±0.04* 0.42±0.01 LVEF（%）59.3±2.1*#60.2±2.3*#68.3±1.2* 36.1±1.1

3.3 各组大鼠心肌细胞凋亡指数比较模型对照组心肌细胞凋亡指数升高，各用药组凋亡指数组较模型对照组明显降低（P＜0.05）；联合组优于真武胶囊组及苯那普利组（P＜0.05）；真武胶囊组和苯那普利组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 各组大鼠心肌胶原含量及心肌细胞凋亡指数比较（）

表2 各组大鼠心肌胶原含量及心肌细胞凋亡指数比较（）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，与联合组比较，#P＜0.05

组别真武胶囊组苯那普利组联合组模型对照组只数8 8 8 8胶原含量（μg/mgprot）8.33±1.2*#8.22±2.1*#6.34±1.1* 10.45±2.2凋亡指数10.6±2.1*#10.4±1.5*#8.2±1.4* 17.9±2.1

3.4 各组大鼠光学显微镜下心肌结构变化模型对照组大鼠心肌纤维排列紊乱，纤维结缔组织增生明显。真武胶囊组及苯那普利组心肌纤维排列尚整齐，纤维结缔组织轻度增生。真武胶囊联合苯那普利组心肌纤维排列整齐，纤维结缔组织增生改善情况明显优于真武胶囊组及苯那普利组，见图1（封二）。

4 讨论

扩张性心肌病临床主要表现为胸闷气急，活动性喘憋，甚至端坐呼吸。属中医“胸痹”、“心痛”范畴。多属本虚标实之证，病因病机以脾肾阳虚，心阳不振，水气内停，瘀血阻滞为主，病位主要在心，涉及脾肾[2]。治疗多以温阳利水，益气活血为组方原则。真武胶囊由温阳利水的真武汤辅以益气、活血中药组成。方中君药附子温肾暖土，以助阳气；臣以茯苓甘淡渗利，以利水邪；生姜辛温，既助附子温阳祛寒，又伍茯苓温散水气；佐以白术健脾燥湿，扶脾运化，白芍缓急和中。又加黄芪以益气养心、利水消肿，加丹参、降香活血化瘀。药理[3]研究显示，黄芪能保护受损心肌细胞，抑制心肌纤维化，降低凋亡基因。实验研究显示[4]，丹参对缺血缺氧心肌有保护作用，能改善心功能，降低心肌细胞凋亡。本实验结果显示，以温阳利水、益气活血为组方原则的真武胶囊能缩小扩大的心脏，提高射血分数，降低胶原含量，抑制心肌细胞凋亡，改善心肌重构。

扩张性心肌病病理学改变以心肌细胞凋亡和细胞外间质纤维化为主。随着心肌细胞凋亡，心肌纤维化加剧，细胞外间质胶原含量或容积分数明显增高[5]。心肌细胞凋亡和细胞外间质纤维重构导致心肌变薄、心脏扩大，继而引起血流动力学紊乱。肾素-血管紧张素活性升高，特别是血浆中AngⅡ活性的升高,是心肌重构的重要因素[6]。Pu等[7]描述了在试验大鼠的心肌细胞中AngⅡ诱导的凋亡反应。ACEI在一定程度上减少AngⅡ的生成，从而防止由AngⅡ诱发的心肌细胞凋亡及心肌重构，为本实验采用ACEI类药物苯那普利提供理论依据。本实验结果证实，苯那普利抑制了细胞凋亡，逆转心肌重构，与以上文献报道一致。

本研究显示，真武胶囊及苯那普利均能缩小扩大的心脏，提高射血分数，降低心肌胶原含量，抑制心肌细胞凋亡，改善心肌重构，两者联合应用效果更显著，明显优于两个单药组治疗效果（P＜0.05）。

［1］丁永，钟家蓉，白永虹，等．呋喃唑酮诱导大鼠扩张型心肌病模型的实验研究［J］.重庆医科大学学报，2007，32（7）：718-721.

［2］彭雁，陈彦，彭正林．贾秀兰主任医师治疗扩张性心肌病的临床经验［J］.云南中医中药杂志，2008，29（12）：16-17.

［3］孔嘉欣，苏旭春，闫冰川，等．黄芪多糖注射液防治蒽环类药物心脏毒性临床观察［J］.新中医，2013，45（7）：109-111.

［4］李雪莲，关会林，王璐，等．丹参酮IIA调节microRNA-1保护缺氧心肌细胞的作用研究［J］．现代生物医学进展，2014，14（28）：5463-5467．

［5］Van Linthout S,Seeland U，Riad A，et al．Reduced MMP-2 activity contributes to cardiac fibrosis in experimental diabetic cardiomyopathy［J］．Basic Res Cardiol，2008，103（5）：319-327．

［6］Bader M，Ganten D.Update on tissue rennin angiotensin system［J］.J Mol Med，2008，86（6）：615-621．

［7］Pu J，Yuan A，Shan PR，et al．Cardiomyocyte-expressed farnesoid-X-receptor is a novel apoptosis mediator and contributes to myocardial ischaemia/reperfusion injury［J］.Eur Heart J，2013，（24）：1834-1835.

（收稿：2015-11-27修回：2016-02-24）

Effect of Zhenwu Capsule Combined with Benazepril on Dilated Cardiomyopathy in Rats

GAO Hongshan1, SONG Kun2,GAO Huanping1.1 Department of Critical Care Medicine,the Central Hospital of Zaozhuang Mining Group,Zaozhuang(277000),China;2 Department of Geriatrics,Zaozhuang Chinese Medical Hospital,Zaozhuang (277000),China

ObjectiveTo investigate the effect of Zhenwu capsule combined with benazepril on dilated cardiomyopathy（DCM）in rats.MethodsThirty-two male Wistar rats（2 weeks old）were fed with furazolidone for 8 weeks to establish DCM model,then were randomly and equally divided into 4 groups：Zhenwu capsule group,benazepril group,Zhenwu capsule combined with benazepril group,and control group.Rats were given Zhenwu capsule[1.8g/（kg·d）],benazepril[3.33mg/（kg·d）]and Zhenwu capsule combined with benazepril by gavage in 3 treatment groups,respectively,while rats in control group were fed normally in absence of intervention.After 8 weeks, all rats were measured on left ventricular end-diastolic diameter（LVDD）,left ventricular end-systolic diameter（LVSD）and left ventricular ejection fraction（LVEF）by color doppler ultrasound,then were sacrificedto detect cardiac collagen contents,measure apoptosis index and observe themicrostructure of myocardium by microscope. ResultsThe LVDD was 0.57±0.05cm in Zhenwu capsule group,0.56±0.10cm in benazepril group,and 0.51± 0.11cm in Zhenwu capsule combined with benazepril group,which were all higher than that in control group（0.67±0.03cm,P＜0.05）.The LVSD was 0.34±0.12cm,0.35±0.06cm,0.31±0.04cm in Zhenwu capsule group,benazepril group,and Zhenwu capsule combined with benazepril group,repectively,which were all lower than that in control group（0.42±0.01cm,P＜0.05）.The LVEF was higher in 3 treatment groups than that in control group（59.3%± 2.1%,60.2%±2.3%,68.3%±1.2%vs 36.1%±1.1%,P＜0.05）.The collagen content and myocardial apoptosis index were both lower in 3 treatment groups than that in control group（collagen：8.33±1.20μg/mgprot,8.22±2.1μg/mgprot, 6.34±1.10μg/mgprot vs 10.45±2.2μg/mgprot;myocardial apoptosis index：10.6±2.11,10.4±1.5,8.2±1.4 vs17.9±2.1; all P＜0.05）;a significant difference in myocardial apoptosis index was also found between combined drugs group and single drug groups（P＜0.05）.The cardiac fibrosis arranged in disorder and was significant proliferated in control group.Zhenwu capsule combined with benazepril improved the disorder and attenuated the proliferation of myocardial fibrosis,which was better than the effect in Zhenwu capsule and benazepri single drug groups.Conclusion Zhenwu capsule combined with benazepril can obviously reduce enlarged heart,enhance ejection fraction,lower collagen content,inhibit myocardial apoptosis,and improve myocardial remodeling.

rats;dilated cardiomyopathy;Zhenwu capsule;benazepril

1山东省枣庄矿业集团中心医院重症医学科（枣庄277000）；2山东省枣庄市中医医院老年病科（枣庄277000）

高鸿山，Tel：13589607545；E-mail：13589607545@163.com