鸡IGF2基因外显子1的多态性及其与生产性能的相关性

陈则东++沈晓鹏++穆洪云

摘要：为研究胰岛素样生长因子2基因（IGF2）多态性及其对鸡生产性能的影响，采用DNA测序、PCR-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术分析基因单核苷酸多态性，并对鸡的生产性能进行相关分析。结果可知：共发现2个SNPs位点，P1位点对4周龄鸡体质量具有显著影响（P<0.05）。研究结果初步表明：IGF2基因可能是影响鸡生长繁殖性状的1个主效基因或是与其存在紧密遗传连锁的1个标记。

关键词：鸡；IGF2基因；外显子1；遗传多态性；生产性能

中图分类号： S831.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）06-0331-02

收稿日期：2015-05-19

作者简介：陈则东（1985—），男，江苏宿迁人，硕士，助教，从事实验动物科学与教学研究。E-mail：m15852953053@163.com。

IGF2（insulin-like growth factor2）基因是最早发现的内源性印迹基因[1]，IGF2为单链多态，分子量7.5 ku[2]。研究发现，IGF2是影响动物胚胎生长分化的重要因子，参与多种代谢的调节[3]。IGF2基因表达具有时间特异性，如小鼠胚胎中IGF2基因开始为双等位基因表达，但在胚胎形成后期则表现为母源单等位基因表达[4-5]。本研究以鸡为研究对象，以IGF2基因为候选基因，采用PCR-单链构象多态性（PCR-SSCP）方法[6]检测基因是否存在单核苷酸多态性，探讨不同基因型与鸡生产性能的相关性。

1材料与方法

1.1试验材料与处理

210羽母鸡血样采自翔龙企业有限公司，同时记录其生长性状（初始质量、4、8、12、16周龄体质量）及繁殖性状（开产日龄、开产体质量、开产蛋质量、300日龄产蛋数）；翅静脉采集血样1.5 mL，肝素钠抗凝，-20 ℃保存；DNA提取试剂盒[Omega Blood DNA Kit（200次）]法抽提基因组DNA。

1.2引物设计

根据GenBank中鸡的IGF2基因（GenBank登录号：NC_006092）设计IGF2基因第1外显子引物P1，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物的详细信息：F：5′-TGTGCTGCCAGGCAGATAC-3′；R：5′-CCCCAACCCAGCTCTATCT-3′。

1.3PCR-SSCP分析

将3 μL PCR产物加入7 μL变性缓冲液中，98 ℃变性 10 min，然后迅速冰浴5 min。将变性好的PCR产物点样加入到10%聚丙烯酰胺凝胶中，于140 V电泳12 h。在电泳结束后，进行银染显色并拍照记录结果。

1.4IGF2基因统计分析

配合以下模型进行方差分析：

yijk =μ+Gi+Gj+Gij+eijk。

式中：yijk为性状测定值；μ为群体平均值；Gi、Gj为基因型效应；Gij为位点i与位点j间的互作效应；eijk为第i个品种在第j个环境、第k次重复的试验误差。

2结果与分析

2.1PCR-SSCP结果

P1引物扩增片段采用PCR-SSCP分析。由图1可知，P1扩增片段有3种带型，分别定义为AA、AB、BB。

2.2序列分析结果

测序结果（图2）显示，P1引物扩增的IGF2基因外显子1检测到2个突变位点：1个为C-A突变，导致苏氨酸变化为赖氨酸；另一个为G-A突变，导致丙氨酸变成苏氨酸。

2.3IGF2基因P1引物扩增的不同基因型与生产性能的关联分析

由表1可知：在4周龄，AA基因型体质量显著低于AB基因型（P<0.05）。

3讨论

SNPs指基因组中单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性，包括碱基转换（A与G之间或T与C之间的替换）、颠换（嘌呤和嘧啶之间的替换）、单碱基插入或缺失等变化，而且其中最少的一种等位基因在群体中的频率不低于1%。研究表明，DNA序列中单个碱基发生转换、颠换约占DNA变异的90%以上，是最常见的一种变异形式[7]。本试验在鸡的IGF2基因外显子1中检测到2个突变位点，1个为C-A颠换，导致苏氨酸变化为赖氨酸，另一个为G-A转换，导致丙氨酸变化为苏氨酸；P1位点AA型个体4周龄体质量显著低于AB型（P<0.05），因此初步认为AB与4周龄体质量呈正相关。

参考文献：

[1]杨玉华，何小兵. 印记基因IGF2和H19的研究进展[J]. 医学分子生物学杂记，2002，24（4）：254-256.

[2]李瑗. 胰岛素样生长因子Ⅱ与人及实验动物的肝细胞癌[J]. 临床与实验病理学杂志，1998，14（5）：86-87.

[3]ODell S D，Day I N M. Molecules in focus insulin-like growth factor Ⅱ（IGF-Ⅱ）[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology，1998，30（7）：767-771.

[4]李志辉，王启贵，赵建国，等. 类胰岛素生长因子Ⅱ（IGF2）基因多态性与鸡体脂性状的相关研究[J]. 中国农业科学，2004，37（4）：600-604.

[5]杨凤萍，李其松，戴国俊，等. 京海黄鸡IGF-Ⅱ基因SNPs及其与生产性能关系研究[J]. 畜牧兽医学报，2008，39（11）：1470-1475.

[6]王利红，袁旭红，魏萍萍，等. 苏姜猪Lrh-1基因PCR-SSCP多态性及其与产仔数的关系[J]. 江苏农业科学，2015，43（5）：21-25.

[7]雷秋霞，周艳. 浅谈数量遗传学与家禽育种[J]. 家禽科学，2009（3）：45-47.