西妥昔单抗联合FOLFOX4对老年结肠癌患者组织PTEN及P13K表达的影响

虞义建，虞玲燕，王双珠

(1.浙江省台州医院 病理科，浙江 台州 317000；2.浙江省台州医院 急诊科，浙江 台州 317000)

西妥昔单抗联合FOLFOX4对老年结肠癌患者组织PTEN及P13K表达的影响

虞义建1Δ，虞玲燕2，王双珠1

(1.浙江省台州医院 病理科，浙江 台州 317000；2.浙江省台州医院 急诊科，浙江 台州 317000)

目的 探讨西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案对老年结肠癌患者组织抑癌基因PTEN及P13K表达的影响。方法 选取2013年10月～2015年7月浙江省台州医院收治的结肠癌老年患者62例，按治疗方法不同分组，对照组(n=27)采用单纯FOLFOX4方案化疗，研究组(n=35)在FOLFOX4化疗方案基础上给予西妥昔单抗治疗，疗程均为4个周期，对比2组间临床疗效，治疗前后采用免疫组化测定病理组织PTEN及P13K表达状况。结果 研究组有效率(51.4%)与对照组有效率(44.4%)，研究组疾病控制率(80.0%)与对照组疾病控制率(62.9%)比较差异均无统计学意义(χ2=0.298，P=0.585；χ2=2.223，P=0.136)。在组织PTEN及P13K表达上，研究组治疗后PTEN阳性率显著高于对照组(82.86%vs. 59.26%,P<0.05)，治疗后P13K阳性率显著低于对照组(37.14%vs. 62.96%,P<0.05)。结论 采用西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案治疗老年结肠癌能提高组织PTEN表达，降低P13K表达，效果显著。

西妥昔单抗；FOLFOX4；老年；结肠癌；PTEN；P13K

结肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,具有较高的死亡率[1]，现阶段FOLFOX4化疗方案是晚期结肠癌的标准治疗方案之一,但由于肿瘤耐药性及化疗相关的严重不良反应常导致治疗失败[2]。研究表明表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)的表达程度与西妥昔单抗的近期疗效有一定相关性[3]。有报道显示P13K/Akt是其中比较重要的一条信号传导途径,该通路与肿瘤的发生发展密切相关[4]。目前国内对于西妥昔单抗联合FOLFOX4对老年结肠癌抑癌基因PTEN及P13K表达的研究仍然相对较少，本次研究探讨西妥昔单抗联合FOLFOX4对老年结肠癌患者组织PTEN及P13K表达的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年10月～2015年7月来浙江省台州医院治疗的结肠癌老年患者62例，经病理组织学检查确诊，排除存在肝肾功能、心电图异常，存在化疗禁忌症患者，按治疗方法不同进行分组，对照组27例采用FOLFOX4方案化疗，男15例，女12例，年龄69～82岁，平均年龄(73.1±6.8)岁，病理分类高分化腺癌10例，中分化腺癌12例，低分化腺癌3例，粘液腺癌2例；研究组35例在FOLFOX4化疗方案基础上给予西妥昔单抗，男20例，女15例，年龄68～84岁，平均年龄(72.9±6.5)岁，病理分类高分化腺癌13例，中分化腺癌17例，低分化腺癌3例，粘液腺癌2例，2组一般资料比较差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：对照组采用FOLFOX4方案：静脉滴注奥沙利铂(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字号：H20000337)85 mg/m2，2 h，d1；静脉滴注亚叶酸钙(江苏恒瑞医药股份有限公司，H32022391)200 mg/m2，2 h，d1-d2；静脉注射氟尿嘧啶(上海旭东海普药业有限公司，国药准字号：H31020593)400 mg/m2，d1-d2；持续静脉滴注5-Fu 600 mg/m2，22 h，d1-d2；每14 d重复1次，为1个周期，连续治疗4个周期。研究组在FOLFOX4化疗方案基础上给予西妥昔单抗(德国默克制药厂，批准文号：S20050095)治疗，给药前30 min肌注盐酸异丙嗪(上海禾丰制药有限公司，国药准字号：H31021490)25 mg，静脉推注地塞米松(广州白云山天心制药股份有限公司，国药准字号：H44022091)5 mg，首次静脉滴注西妥昔单抗400 mg/m2，时间2 h，随后降为每周250 mg/m2，时间1 h。

1.2.2 免疫组化检测方法：准备：取出石蜡包埋组织，加4%聚甲醛磷酸盐缓冲液内固定；切片：石蜡包埋组织切片2张，标记P13K(A)、PTEN(B)，每片4 μm；脱蜡水化：二甲苯Ⅰ、Ⅱ浸泡15 min，无水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中浸泡3 min，流水冲洗5 min。放入PBS液中，放在震荡仪上震荡2 min/次×3；高压修复抗原：取适量EDTA(pH9.0)抗原修复液、柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)高压锅加热，2、3 min后取出切片；置于PBS液，震荡仪上震荡2 min/次×3；擦去PBS液，滴加第一抗体(P13K、PTEN)，室温下孵育15 min，PBS液中置于震荡仪上震荡3 min/次×3；擦去PBS液，滴加MaxVision TMHRP-Polymeranti -Rabbit IHC，室温下孵育15min，PBS液中置于震荡仪上震荡3 min/次×3；擦去PBS液，滴加新配制的DAB ingrain agent，混匀后加至切片，37 ℃反应10～30 min后观察显色情况；反复冲洗3次，苏木素复染，脱水、透明、树脂胶封片，显微镜下观察记录显色情况。

1.2.3 观测指标：

① 临床疗效：完全缓解(CR)为所有目标病灶消失并持续>1个月；部分缓解(PR)为肿瘤病灶长径总和缩小≥35%，并持续>1个月；稳定(SD)为肿瘤病灶长径总和缩小未达PR，有增大而未达PD；进展(PD)为肿瘤病灶长径总和增大≥20%或存在新发病灶。有效率=完全缓解率+部分缓解率，疾病控制率=完全缓解率+部分缓解率+稳定率。

② PTEN及P13K表达：采用免疫组化测定治疗前后病理组织：PTEN、P13K免疫组化染色结果=阳性细胞百分比+着色强度，积分0～3分为-，积分3～5分为+，积分5～9分为++，积分9～12分为+++。阳性细胞百分比计分：阳性细胞百分比0为0分，阳性细胞百分比<25%为1分，阳性细胞百分比25%～50%为2分，阳性细胞百分比50%～75%为3分，阳性细胞百分比>75%计为4分；着色强度：着色强度无着色为0分，着色强度黄色为1分，着色强度棕黄色为2分，着色强度黄褐色为3分。

2 结果

2.1 2组患者治疗后临床效果分析 研究组有效率(51.4%)与对照组有效率(44.4%)，研究组疾病控制率(80.0%)与对照组疾病控制率(62.9%)比较差异均无统计学意义(χ2=0.298，P=0.585；χ2=2.223，P=0.136)。见表1。

表1 2组患者治疗后临床效果分析[n(%)]

2.2 2组患者治疗前后组织PTEN及P13K表达状况分析 细胞膜或细胞质存在黄色或黄棕色颗粒为PTEN阳性，细胞质中存在黄棕色颗粒为P13K阳性，见图1。

图1 结肠腺癌细胞中PTEN与P13K免疫组化结果(×100)Fig.1 Immunohistochemical results of PTEN and P13K in colon cancer cells(×100)

治疗前，对照组PTEN阳性率(51.85%)与研究组比较PTEN阳性率(54.29%)比较差异无统计学意义，治疗后研究组PTEN阳性率(82.86%)高于对照组PTEN阳性率(62.96%)(χ2=4.265，P<0.05)。

治疗前，对照组P13K阳性率(70.37%)与研究组P13K阳性率(71.43%)比较差异无统计学意义，治疗后研究组P13K阳性率(37.14%)显着低于对照组P13K阳性率(62.96%)(χ2=4.069，P<0.05)。见表3。

表2 2组患者治疗前后组织PTEN表达状况比较

#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

表3 2组患者治疗前后组织P13K表达状况比较

#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

3 讨论

结肠癌是常见的恶性肿瘤之一,在我国的发病率呈逐年上升趋势[5],严重威胁人类生命与健康。许多结肠癌患者出现明显症状时，往往已进入晚期，且容易发生转移，从而失去了手术机会[6]。化疗是治疗结肠癌主要治疗手段之一，可延长患者生存时间。FOLFOX4化疗方案存在肿瘤耐药性及化疗相关的严重不良反应，化疗结果不良。近年来，单克隆抗体与化疗药物的联合使用提高了结肠癌的治疗效果，西妥昔单抗(cetuximab) 作用靶点为表皮生长因子受体(EGFR)，能逆转肿瘤细胞对细胞毒类药物的抗药性而达到抑制肿瘤进展的目的[7]。随着对肿瘤发病机制的进一步认识，与肿瘤细胞增殖分化等有关信号传导通路被报道，PTEN/P13K/AKT信号转导通路是其中之一，以该通路为靶点治疗肿瘤的小分子特异性抑制剂正成为热点研究之一。国内尚缺乏西妥昔单抗联合FOLFOX方案 对抑制PTEN/P13K/AKT信号转导通路的依据，大规模临床研究数据显示，cetuximab联合化疗用于KRAS野生型mCRC患者的一线治疗已得到广泛认可[8]。随着对肿瘤分子靶向治疗研究深入，靶向治疗药物具有毒性低、靶向性好、效能高等特点，在改善晚期患者生活质量及控制肿瘤进展方面表现出独特优势。本次研究发现不论在疗效及疾病控制率上，虽然在统计学上无差异，但两者合用均高于单纯化疗，说明西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案近期疗效明显，其对结直肠癌细胞株具有明显的抑制作用，可有效抑制肿瘤细胞生长。

研究发现在结直肠癌发生、发展过程中,可能由于PTEN蛋白的低表达或失表达不能有效抑制ERK磷酸化,使细胞发生癌变,并促进癌变细胞的浸润、转移[9]。各种外界刺激可通过细胞内的多种受体激活P13K，激活后的第二信使与下游Akt结合，不仅能导致Akt从细胞质到细胞膜转位，还可促使其构象发生改变，激活AKT，通过磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白参与调节细胞的生长、增殖等多种生命活动。研究发现PTEN在结肠癌中的缺失表达有可能激活了P13K信号传导通路，两者共同参与了结肠癌的发生[10]，为结肠癌的个体化治疗提供依据。在组织PTEN及P13K表达上，研究组治疗后PTEN阳性率显著高于对照组，治疗后P13K阳性率显著低于对照组(P<0.05)，说明西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案治疗老年结肠癌能降低P13K表达，提高PTEN表达，可能与西妥昔单抗对PTEN/P13K/AKT信号通路具有靶向作用有关。

本次研究发现采用西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案治疗老年结肠癌能提高组织PTEN表达，降低P13K表达，效果显著。西妥昔单抗是肿瘤分子靶向治疗的最新研究成果之一，其对直肠癌患者的个体化治疗意义重大。本次由于人数及时间限制，对于西妥昔单抗通过何种机制对PTEN/P13K/AKT信号通路起到靶向作用尚不清楚，需要进一步研究。

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(编校：王俨俨)

Effect of cetuximab combined with FOLFOX4 on expressions of PTEN and P13K in colon cancer tissue of elderly patients

YU Yi-jian1Δ, YU Ling-yan2, WANG Shuang-zhu1

(1.Department of Pathology, Taizhou Hospital of Zhejiang Province, Taizhou 317000, China; 2. Department of Emergency,Taizhou Hospital of Zhejiang Province, Taizhou 317000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of cetuximab combined with FOLFOX4 chemotherapy on expressions of cancer suppressor gene PTEN and P13K in colon cancer tissue of elderly patients.Methods62 cases of elderly patients with colon cancer from October 2013 to July 2015 in our hospital were selected and divided into two groups according to the different therapy. The control group (n=27)

pure FOLFOX4 chemotherapy and treatment group(n=35)received cetuximab on the basis of FOLFOX4 chemotherapy, with a consecutive treatment of 4 courses. The clinical curative effect and expressions of PTEN and P13K in colon cancer tissue were compared between two groups.ResultsThere were no significant difference in effective rate and disease control rate between treatment group and control group (51.4% vs. 44.4%,χ2=0.298,P=0.585; 80.0%vs. 62.9%,χ2=2.223,P=0.136 ). After treatment, the cells positive rate of PTEN in treatment group was higher than that in control group post-treatment (82.86%vs. 59.26%,P<0.05), and the cells positive rate of P13K in treatment group was lower than that in control group (37.14%vs. 62.96%,P<0.05).ConclusionCetuximab combined FOLFOX4 chemotherapy regimen could increase expression of PTEN and reduce P13K expression, which effect is remarkable in the treatment of elderly colon cancer.

cetuximab; FOLFOX4; elderly;colon cancer; PTEN; P13K

浙江省自然科学基金(LY13H160024)

虞义建，通信作者，男，本科，主治医师，研究方向：肿瘤病理，E-mail：poyisb@163.com。

R735.3+5

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.04.50