丹参茎叶提取工艺研究

刘　涛， 焦　芳， 张　敏， 徐腾达， 周蔚昕

(成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都　610106)



丹参茎叶提取工艺研究

刘涛， 焦芳， 张敏， 徐腾达， 周蔚昕

(成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都610106)

摘要：目的：优选丹参茎叶的提取工艺.方法：采用HPLC测定含量，流动相甲醇—乙腈—甲酸—水(30∶10∶1∶59)，检测波长286 nm.以丹酚酸B和迷迭香酸提取量的综合评分为指标，通过正交试验考察溶媒用量、提取时间和提取次数对丹参茎叶提取工艺的影响.结果：优选的提取工艺为A2B3C2，即12倍量的20%乙醇，提取2次，每次1.5 h.结论:优选的提取工艺稳定、合理，指标成分提取率较高，可为丹参资源的开发利用提供参考.关键词： 丹参茎叶；正交；丹酚酸B；迷迭香酸

0引言

中药材丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，是中药中应用最早、最广泛的药物之一，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痛之功效[1],临床常用于心血管疾病、急慢性肝炎等疾病的抗菌消炎[2].丹参根中主要含脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分.随着临床应用范围的扩大,急需寻找新药源.丹参传统用药部位为根和根茎，弃去茎叶部分，但现代药理试验证明丹参茎叶的药理作用与根、根茎相似,临床疗效也类似[3-4].据统计，丹参地上部分约占全植株的67%，药源丰富，对于其开发和利用意义重大.本课题选择采收于四川中江县的丹参茎叶为原药材，参照文献[5]的相关方法，对丹参茎叶提取工艺进行了研究，为其生产和使用提供实验依据.

1仪器与试剂

1.1试剂

实验所用试剂包括：迷迭香酸对照品(批号，111871-201404)、丹酚酸B对照品(批号，111562-201212)，购自中国食品药品检定研究所；丹参茎叶(批号，20141203)，采自中江石泉乡；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为怡宝纯净水.

1.2仪器

实验所用仪器为：IChrom5100型高效液相色谱仪，大连依利特仪器有限公司生产.

2方法与结果

2.1迷迭香酸、丹酚酸B含量测定

2.1.1色谱条件.

实验的色谱条件为：SinoChrom ODS-BP色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相，甲醇—乙腈—甲酸—水(30∶10∶1∶59)，流速1.0 mL·min-1，检测波长为286 nm，进样量10 μL，柱温为室温.

2.1.2对照品的制备.

取迷迭香酸、丹酚酸B对照品适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，加75%甲醇制成每1 mL含迷迭香酸0.0923 mg、丹酚酸B 0.0634 mg的混合对照品溶液.

2.1.3供试品溶液的制备.

取提取液适量，混匀，滤过，作为供试品溶液备用.2.1.4线性关系考察.

精密吸取迷迭香酸、丹酚酸B混合对照品溶液2、4、8、10、14、20 μL分别进样，测定峰面积.以峰面积Y对进样量X进行线性回归，得迷迭香酸线性回归方程，Y=181.44X-10.493，r=0.9999；丹酚酸B线性回归方程，Y=59.180X+18.303，r=0.9993.结果表明，迷迭香酸与丹酚酸B分别在0.1846～1.18460 μg及0.1268～1.2680 μg范围内进样量与峰面积成良好线性关系.

2.1.5精密度试验.

精密吸取迷迭香酸、丹酚酸B混合对照品溶液10 μL，按照“2.1.1”项下色谱条件，重复进样6次，记录峰面积，迷迭香酸、丹酚酸B峰面积RSD分别为0.80%和1.54%，表明精密度较好.

2.1.6稳定性实验.

精密吸取同一供试品溶液10 μL，按照“2.1.1”项下色谱条件，分别于0、1、2、4、6、8 h进样，测定峰面积，迷迭香酸、丹酚酸B峰面积RSD分别为0.51%和1.95%，表明供试品溶液在8 h内稳定.

2.1.7重复性实验.

取同一批样品，照“2.1.3”项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照“2.1.1”项下色谱条件测定峰面积，并计算含量，迷迭香酸、丹酚酸B RSD分别为0.75%和1.93%，表明本方法重复性良好.

2.1.8回收率实验.

取已知含量的丹参茎叶粉末6份，每份约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入迷迭香酸对照品4 mL(0.4792 mg/mL)，丹酚酸B对照品2.3 mL(0.1273 mg/mL)，按照“2.1.3”项下方法制成供试品溶液，按“2.1.1”色谱条件测定其含量，计算平均加样回收率，迷迭香酸、丹酚酸B分别为99.26%、96.45%，其RSD分别为3.52%、1.08%.表明本方法回收率良好.

表1　加样回收率实验结果(n=6)

2.1.9原药材含量测定.

取样品约2.0 g，精密称定，按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件测定含量，测定结果为，丹酚酸B含量为0.74%，迷迭香酸含量为1.66%.

2.2丹参茎叶提取工艺研究

2.2.1提取溶剂考察.

取丹参茎叶粗粉5份，每份100 g，分别加入10倍量的60%乙醇、50%乙醇、40%乙醇、20%乙醇、水，提取2次，每次0.5 h，滤过，滤液合并，作为供试品溶液备用.按照“2.1.1"项下色谱条件测定其含量，结果如表2所示.

表2　提取溶剂考察

注：综合评分=丹酚酸B的量*50%+迷迭香酸的量*50%

由表2结果可见，水提取综合评分较低，所得的指标成分含量明显低于乙醇提取，而不同浓度乙醇提取效果相差也较大，经加权评分计算，20%乙醇提取的加权评分值大于其他乙醇浓度提取，故选择20%乙醇为提取溶剂.

2.2.2正交试验.

参考已有的文献资料数据和单因素实验结果，本研究选取提取次数(A)、提取时间(B)及溶媒倍量(C)为考察因素，以丹酚酸B和迷迭香酸含量的综合评分为考察指标.取干燥丹参茎叶粗粉9份，每份100 g，按照 L9(34)正交设计表进行正交试验，因素水平见表3，结果见表4，方差分析见表5.

表3　因素水平表

表4　正交试验结果

注：综合评分=丹酚酸B的量*50%+迷迭香酸的量*50%

表5　方差分析表

由直观分析及方差分析可知，影响丹参茎叶提取工艺因素顺序依次为C>B>A，其中，C对提取工艺有显著影响，A、B无显著影响.本研究最终确定提取工艺为，A2B3C2,即，12倍量20%乙醇，提取2次，每次1.5 h.

2.2.3正交验证实验.

称取丹参茎叶粗粉3份，每份为100 g，分别加12倍量20%乙醇，提取2次，每次1.5 h，滤过，滤液合并，摇匀，作为供试品溶液进行验证实验.实验结果得，丹酚酸B的量分别为0.528 g、0.441 g、0.529 g，迷迭香酸的量分别为0.923 g、0.947、1.005 g.结果表明，所选择的工艺稳定、可行.

3讨论

丹参是我国使用最广泛的中药之一，传统药用部位为根和根茎，在采收时将茎叶部分去除.现代药理试验证明其药理作用与丹参根及根茎相似，且丹参茎叶的产量远远高于丹参根及根茎，因此，将其开发利用可以扩大药材来源.本实验从溶媒种类、溶媒倍量、提取时间、提取次数4个因素出发，在单因素的基础上设计正交试验来研究丹参茎叶的提取工艺条件.最终筛选出提取工艺为，12倍量的20%乙醇提取2次，每次1.5h.此工艺条件下，丹酚酸B和迷迭香酸的得率分别为0.499%、0.958%.

本研究还发现，丹参茎叶采用回流提取法，工艺简单可行，且溶媒可以回收再利用，大大提高了实验可行性.迷迭香酸对热稳定，实验提取率较高，而丹酚酸B热稳定性较差[8]，提取时间不宜过长.

参考文献：

[1]肖禾,宋民宪,赖娟.国家药品标准中丹参的质量控制情况[J].中国药事,2006,20(1):57-59.

[2]王新胜,吴艳芳,赵瑞娜.丹参地上部分活性成分TLC分析[J].海峡医学,2007,19(12):46-47.

[3]倪学武,苏静.丹参地上部分有效成分的初步研究[J].中国药学杂志,1995,30(6):336-338.

[4]齐永秀,曹明亮,万建建,等.高效液相色谱法测定白花丹参根、茎、叶中丹参素和原儿茶醛的含量[J].中国医院药学杂志,2007,27(12):1772.

[5]王小平,刘峰,韩翠，等.丹参总酚酸提取工艺的优化[J].云南中医学院学报,2010,33(2):32-38.

[6]史国玉,刘艳辉,郭庆梅,等.丹参叶中水溶性成分提取工艺研究[J].山东中医杂志,2012,31(2):132-134.

[7]刘涛,罗小伟,梁悦,等.丹参茎叶质量标准研究[J].成都大学学报,2015,34(3):231-233.

[8]晋迎申.丹酚酸B热稳定性研究[J].上海医药,2014,35(21):78-80.

Extraction Technology of Salvia Miltiorrhiza Stem and Leaf

LIUTao,JIAOFang,ZHANGMin,XUTengda,ZHOUWeixin

(School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

Abstract:The paper is going to optimize the extraction process of Salvia Miltiorrhiza stem and leaf.HPLC is used to determine the content of mobile phase methanol-acetonitrile-formic acid water(30∶10∶1∶59),and the detection wavelength is 286 nm.By using the comprehensive score of salvianolic acid B and the extraction of rosmarinic acid content as the index,the effects of solvent dosage,extraction time and extraction frequency on the stems and leaves of Salvia Miltiorrhiza extraction process are tested through orthogonal test.The results show that the optimal extraction process is A2B3C2,that is,12 times of the amount of 20% ethanol,2 times of extraction with 1.5 h each time.The conclusion drawn in the paper is that the optimized extraction process is efficient and stable.The extraction rate of the index component is comparatively high.Therefore,the optimized extraction process can be used for reference for the development and utilization of Salvia Miltiorrhiza.

Key words:Salvia Miltiorrhiza stem and leaf;orthogonal;salvianolic acid B;rosemarinic acid

文章编号：1004-5422(2016)02-0127-03

收稿日期：2016-04-06.

作者简介：刘涛(1976 — )， 男， 博士， 高级工程师， 从事中成药新药开发与再评价研究.

中图分类号：R284.2；S567.5+3

文献标志码：A