转化生长因子-β诱导胃癌细胞人白细胞抗原-G表达机制的研究

关中正,任国琰,张忠宝,刘凤军*唐乾利

(聊城市第三人民医院普外科,山东 聊城 252000;*山东大学齐鲁医院普外科,山东 济南 250000；**右江民族医学院，广西 百色 533000)

转化生长因子-β诱导胃癌细胞人白细胞抗原-G表达机制的研究

关中正,任国琰,张忠宝,刘凤军*唐乾利**

(聊城市第三人民医院普外科,山东 聊城 252000;*山东大学齐鲁医院普外科,山东 济南 250000；**右江民族医学院，广西 百色 533000)

目的 探讨转化生长因子-β诱导胃癌细胞人白细胞抗原-G的表达及可能作用机制。方法 胃癌患者20例，胃癌组织及癌旁组织标本，同时采集术前1天相应患者的外周血标本。肿瘤组织和以及癌旁组织在-80°液氮冷冻保存，10%福尔马林溶液中固定2~3天洗涤、浸腊、包埋以及防脱片。相应外周血标本中可溶性人白细胞抗原-G浓度检测。采用ELISA对转化生长因子-β和人白细胞抗原-G的检测，应用转化生长因子-β kit、可溶性人白细胞抗原-G kit检测胃癌细胞转化生长因子-β与人白细胞抗原-G的浓度。应用SPSS 17.0软件，所获数据采用皮尔逊相关分析法和χ2检验。结果 在胃癌细胞以及组织中转化生长因子-β及人白细胞抗原-G呈高表达水平，两者的表达呈相关性。不同浓度转化生长因子-β刺激能上调人白细胞抗原-G不同程度表达，转化生长因子-β表达和人白细胞抗原-G的表达在胃癌组织中及外周血中的浓度呈显著正相关。结论 转化生长因子-β参与了胃癌组织中人白细胞抗原-G的表达上调说明转化生长因子-β和人白细胞抗原-G在胃癌组织及外周血中的蛋白水平呈正相关；进一步阐明转化生长因子-β不仅与胃癌的活化和转移相关。

人白细胞抗原-G；转化生长因子-β；胃癌

我国国内大多数胃癌疾病在治疗方法上有手术、放疗、化疗和生物治疗等方法[1]，如癌症患者无转移，5年生存率明显提高，一旦形成转移，生存率明显降低[2]。转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)是目前科学家发现的具有多方面生物学活性的细胞因子，它几乎控制着细胞的一系列生物过程包括细胞信号识别、细胞凋亡、细胞分化、细胞增殖以及胚胎发育。TGF-β经研究证明主要通过Smad家族转录而进行信号传递,其中发现Smad3与TGF-β较为紧密[3]。说明胃癌细胞TGF-β与人白细胞抗原-G（HLA-G）的表达对患者生存率有一定关系，但是具体机制原因不详[4]。为此，我们自2012年9月至2013年7月间对明确诊断为胃癌患者TGF-β，HLA-G进行检测，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 胃癌患者20例，男15例，女5例。病理诊断明确。首次接受胃癌方面手术。患者一般情况可，KPS评分均在60分以上。病例排除标准：（1）孕妇以及哺乳期妇女。（2）对药物高度敏感史患者。（3）患者依从性差。（4）术前接受化疗或者放疗的患者。（5）有明确手术禁忌或远处转移或其他手术禁忌患者。患者自愿接受实验并签知情同意书。肿瘤临床分期依据第6版国际抗癌协会的TNM分级分类。手术后就收集肿瘤组织和相应正常黏膜组织进行冷冻保存。将来在实验中进一步使用。标本收集收集常规胃癌术后胃癌组织标本并使用石蜡包埋，福尔马林固定肿瘤切片，并立即冻结在-80°液氮罐冷冻环境下。胃癌手术前1天采集患者的外周血标本（5 ml），进行编排序号后用浓度为1.5~2.0 mg/ml EDTA处理，经1000 rpm、15 min离心后立即放入-80°液氮罐冷冻环境下，为使用应用EDTA血浆的制备实验研究做铺垫，对胃癌患者术前留外周血样。胃癌患者中TGF-β和HLA-G之间的关系，对它们的浓度进行了分析，实验中在所选的外周血标本血清中TGF-β及HLA-G表达明显上调，呈正相关。通过皮尔森的回归分析出一个强烈的正相关关系

1.2 实验方法 酶联免疫吸附试验（ELISA）分析检测TGF-β及HLA-G的表达。应用TGF-β kit、sHLAG kit检测胃癌细胞TGF-β与HLA-G的浓度。严格按照试剂盒说明操作。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0软件，所获数据采用皮尔逊相关分析法和χ2检验。

2 结果

2.1 不同TGF-β浓度所对应不同HLA-G浓度 见表1。

表1 不同TGF-β浓度所对应不同HLA-G浓度（(ng/ml)）

图1 显示不同TGF-β浓度所对应不同HLA-G浓度

2.2 ELISA实验分析表明在TGF-β处理后24小时或48小时，HLA-G水平逐渐增高（*P＜0.05，**P＜0.01，见图表1）。

2.3 实验发现随着胃癌细胞TGF-β不同处理浓度和处理时间的增加,结果显示,HLA-G表达逐渐上调，见图表2。

图2 显示胃癌细胞TGF-β和HLA-G相关性

3 讨论

转化生长因子β（TGF-β）具有多种生物学功能[5]，TGF-β在肿瘤研究中包括了良性和恶性肿瘤，它对各种炎性疾病的发生发展均有一些特定的影响。由于所处环境不同，TGF-β发挥的上调以及下调作用也不一样，其受体和一些信号分子表达已成为临床治疗研究，尤其是癌症研究的热点[6]。现在发现TGF-β实际上是一种信号分子，具有共同的生物学特性大家族，被称为TGF超家族。国内外许多学者对这一复杂的肿瘤免疫机制进行了大量的研究工作[7]。目前只有揭示肿瘤在逃避免疫攻击时各个途径的生理机制才能揭示肿瘤基因治疗机制[8]，所以肿瘤的免疫逃逸机制是目前研究的重点热点问题,有可能在进行特异性的治疗方案上取得突破[9]。有实验发现在免疫应答功能的发挥中、免疫细胞分化发育成熟过程中以及造血系统中,都与TGF-β有一定关系。研究显示TGF-β显著影响着正常免疫调节系统，TGF-β调控很可能在其异常免疫调节中发挥着作用,但目前相关的研究报道甚少。

有研究还发现TGF-β细胞因子对于胃癌转移有一定关系，TGF-β的上调是胃部恶性肿瘤血管加速生成重要机制之一[9]。最近的研究强调TGF-β的多信号通路是和精细调整的信号的结果是相级联反应的而不是一个简单的线性结果信号转导途径。这些差异可能被解释为配体浓度受体和下游信号成分的表达变化。此外，有研究证实，TGF-β可以通过诱导激活不同类别的Smads，可以通过不同受体复合物的形成起抑制肿瘤免疫逃逸的作用。

相关分析表明，TGF-β 表达可能与HLA-G mRNA密切正相关关系，但是尚需进一步实验证实。同时在研究中发现TGF-β在免疫治疗中肿瘤逃逸机制受到越来越多的关注。这是和我们研究TGF-β在肿瘤逃逸和HLA-G的表达的肿瘤逃逸机制密切相关的。

在胃癌细胞以及组织中TGF-β及HLA-G呈高表达，统计学分析显示两者的表达呈相关性。在胃癌中不同浓度TGF-β刺激能上调HLA-G不同程度表达。TGF-β表达和HLA-G的表达在胃癌组织中及外周血中的浓度呈显著正相关。由此可与推测在胃癌TGF-β和HLA-G表达呈正相关，胃癌细胞中HLA-G高表达为进一步研究证实与其他因素关系做了铺垫。进一步阐明TGF-β不仅与胃癌的活化和转移相关,而且在普通外科领域可能成为判断胃癌患者预后的指标之一应用于临床实践。

[1]Gallione CJ,Repetto GM,Legius E,et al.A combined syndrome of juvenile polyposis and hereditary hemorrhagic telangiectasia associated with mutations in MADH4(SMAD4)[J].Lancet,2004,363(9412): 852–859.

[2]Park S,Wankhede M.Lee YJ,et al.Real-time imaging of de novo arteriovenous malformation in a mouse model of hereditary hemorrhagic telangiectasia.J[J].Clin.Invest,2009,119(11):3487–3496.

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[5]Bauditz J，Schachschal G,Wedel S,et al.Thalidomide for treatment of severe intestinal bleeding[J].Gut,2004,53(4):609-12.

[6]Bauditz J,Lochs H.Angiogenesis and vascular malformations:antiangiogenic drugs for treatment of gastrointestinal bleeding.World J [J].Gastroenterol,2007,13(47):5979–5984.

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[8]Hawinkels,L.J.A.C.Kuiper P，Wiercinska E,et al.MMP-14(MT1-MMP)mediated endoglin shedding regulates tumor angiogenesis[J]. Canc.Res,2010,70(10):4141–4150.

[9]Pardali E，Dijke P.Transforming growth factor-beta signaling and tumor angiogenesis[J].Front.Biosci,2013,14:4848–4861.

Transforming Growth Factor-β Erson Leucocyte Antigen Induced Gastric Cancer Cells-G Express Mechanism Research

Guan Zhongzheng,Ren Guoyan,Zhang Zhongbao,Liu Fengjun⋆

(The Third People's Hospital of Liaocheng City,Liaocheng 252000,Shandong;Qilu Hospital Affiliated to Shandong University,Jinan 250000,Shandong)

ObjectiveTo study the transforming growth factor-β person leucocyte antigen induced gastric cancer cells-G expression and the possible mechanism.Methods20 patients with gastric cancer,gastric cancer tissue and tis⁃sue adjacent to carcinoma specimens,1 day corresponding peripheral blood in patients with preoperative samples at the same time.Tumor tissue and tissue adjacent to carcinoma in-80°liquid nitrogen cryopreservation,fixed in 10%formalin solution 2～3 days washing,impregnated,embedding and overhand slice.Corresponding peripheral blood specimens of sol⁃uble leucocyte antigen-G concentration detection.By ELISA for transforming growth factor beta and human leukocyte antigen-G testing.Application of transforming growth factor-β kit,soluble human leukocyte antigen-G kit to detect gastric cancer cells transforming growth factor-β and the concentration of human leucocyte antigen-G.The application of SPSS 17.0 software.The data obtained using Pearson correlation analysis and χ2test.ResultsIn gastric cancer cells and tissues transforming growth factor-β and person leucocyte antigen-G has high expression level,both the expression of correlation.Different concentrations of transforming growth factor-β stimulation can raise leucocyte antigen-G express different level.Transforming growth factor beta expression and the expression of human leucocyte antigen-G in gastric cancer tissues and peripheral blood was significantly positively related to the con⁃centration.ConclusionTransforming growth factor-β involved in gastric cancer tissue expression of human leucocyte antigen-G raised that transforming growth factor-β and human leukocyte antigen-G protein levels in gastric cancer tissue and peripheral blood were positively correlated.Growth factors further clarify-β is not only associated with the acti⁃vation and transfer of gastric cancer.

Human leucocyte antigen-G;Transforming growth factor-β;Cancer of the stomach

R735.2

A

1008-4118（2016）03-0017-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.03.006

2016-06-30

关中正，男，山东聊城人，主治医师，医学博士。研究方向：普外分子生物学。