梨炭疽病菌生物学特性及防治药剂的室内筛选

陈国平，赵 杰

（1上海市浦东新区农业服务中心泥城站，上海201306；2上海市浦东新区农业技术推广中心，上海201201）



梨炭疽病菌生物学特性及防治药剂的室内筛选

陈国平1，赵 杰2*

（1上海市浦东新区农业服务中心泥城站，上海201306；2上海市浦东新区农业技术推广中心，上海201201）

摘 要：研究了梨炭疽病菌的生物学特性，并对防治药剂进行了室内初步筛选。结果表明：植物煎汁培养基中以梨果和梨枝培养基较有利于菌丝生长，梨果培养基有利于产孢；PDA培养基最适宜菌落生长，葡萄糖蛋白胨琼脂培养基产孢量最多。菌丝生长的适宜温度为5—30℃，最适温度25℃；菌落产孢能适应较广的pH范围，以pH =3产孢量最多；菌丝的致死温度为56℃，黑暗条件下产孢量最大。在测试的碳源中，麦芽糖、乳糖和葡萄糖最适宜菌丝生长，蔗糖最适宜产孢；氮源中以酵母膏、蛋白胨和牛肉膏最适宜菌丝生长，蛋白胨和牛肉膏最适宜产孢。采用生长速率法测定了14种杀菌剂对病菌的抑制作用，其中多菌灵、咪鲜胺锰盐、氟啶胺、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯的毒力较高。

关键词：梨炭疽病；梨炭疽病菌；生物学特性；杀菌剂

鲜梨是我国主要果品之一，也是上海浦东新区的优势产业，其中‘翠冠’梨因果形大、外观好、风味佳，深受广大消费者喜爱，市场销售情况常供不应求，666.7 m2产值达8 900元（人民币，下同）（大众水果中仅次于葡萄）。梨炭疽病是由胶孢状炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）引起的真菌性病害，能侵染桃、梨、葡萄和柑橘等多种果树［1］，随着果树老龄化的发展，该病发生日益严重，已成为影响果品产量和品质的重要病害之一［2］。近几年，国内对梨炭疽病的病菌诊断、发生规律和药剂防治方面开展了大量研究，并取得了一定成绩［2-5］，然而目前生产上仍将化学防治作为控制该病害的主要措施。本试验通过对当地梨炭疽病菌的生物学特性和室内杀菌剂的筛选研究，以期探索改善果园环境控制病害的方法。

1　材料与方法

1.1供试病原菌

梨炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），采自浦东新区梨园，经室内组织分离、纯化［6］，病原菌于PDA培养基上培养5 d用于试验。

1.2供试药剂

50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂（江苏辉丰农化股份有限公司），12.5%腈菌唑乳油（深圳诺普信农化股份有限公司），0.3%丁子香酚可溶液剂（南通神雨绿色药业有限公司），70%代森联水分散粒剂［允发化工（上海）有限公司］，10%苯醚甲环唑水分散粒剂（江苏丰登农药有限公司），50%克菌丹可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司），80%代森锰锌可湿性粉剂（江苏省农垦生物化学有限公司），70%丙森锌可湿性粉剂［拜耳作物科学（中国）有限公司］，22.7%二氰蒽醌悬浮剂（江西禾益化工有限公司），250 g/L醚菌酯悬浮剂［先正达（苏州）作物保护有限公司］，45%咪鲜胺乳油（以色列马克西姆化学公司），50%多菌灵悬浮剂（江苏龙灯化学有限公司），500 g/L氟啶胺悬浮剂（浙江石原金牛农药有限公司），30%吡唑醚菌酯悬浮剂（深圳诺普信农化股份有限公司）。

1.3生物学特性观察

1.3.1植物煎汁对梨炭疽病菌菌落生长和产孢量的影响

将梨炭疽病菌于20%梨树叶片、枝条和未成熟梨果的煎汁液培养基上25℃培养7 d，观察菌落生长情况，并测产孢量［7-8］。

1.3.2不同培养基对菌落生长和产孢量的影响

选用PDA、PSA、察贝克氏、葡萄糖蛋白胨琼脂、淀粉琼脂和麦芽糖琼脂等6种培养基［7］，于直径为9 cm的平板中央接种直径为1 cm的病原菌菌丝块，25℃培养5 d后测量菌落直径，第7天测产孢量［7］。

1.3.3温度和pH对菌落生长和产孢量的影响［7］

将直径为1 cm的病原菌菌丝块接种到PDA平板中央，分别于5—40℃下培养5 d后测量菌落直径。

用乳酸和NaOH配制pH 3—10的PDA培养基，于平板中央接种直径为1 cm的病原菌菌丝块，25℃培养5 d后测量菌落直径，第7天测产孢量。

1.3.4菌落致死温度的测定

取直径为1 cm的菌丝块于不同温度的试管中处理10 min，然后接种到PDA平板中央，于25℃培养5 d，观察菌丝生长情况［9］。

1.3.5光照对菌落生长和产孢量的影响

将直径1 cm的菌丝块接种到PDA平板中央，分别于连续光照、连续黑暗、12 h光照12 h黑暗交替下，25℃培养5 d后测量菌落直径，第7天测产孢量。

1.3.6不同碳、氮源对菌落生长和产孢量的影响

采用真菌生理培养基［9］，以KNO3为氮源，测定葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖和淀粉等碳源对菌落生长的影响，25℃培养5 d测量菌落直径，第7天测产孢量。以蔗糖为碳源，测定硝酸钾、硫酸铵、氯化铵、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨和尿素等氮源对菌落生长的影响，25℃培养5 d后测量菌落直径，第7天测产孢量。

1.4杀菌剂的毒力测定

采用生长速率法［9-10］进行测定：根据试验情况，配置5个浓度的含药PDA培养基，将直径为1 cm的菌丝块放在含药培养基中央，25℃培养5 d，测量菌落直径、计算抑制率、以药剂有效成分的浓度为测试浓度计算回归方程和抑制中浓度EC50。

2　结果与分析

2.1菌落培养性状观察

梨炭疽病菌在梨果和梨枝培养基上生长较好，5 d后直径分别为6.58 cm和6.37 cm，在梨叶培养基上生长较慢；培养7 d时的产孢量以梨果培养基最多，梨叶和梨枝培养基较少（表1）。

表1　梨炭疽病菌在植物煎汁培养基上菌落生长和产孢情况Table 1 Colony growth and spore production of C.gloeosporioides in plant juice media

2.2不同培养基对菌落生长和产孢量的影响

梨炭疽病菌在PDA培养基上生长最好，培养5 d后的直径为8.48 cm，其次为麦芽糖琼脂培养基和PSA培养基；7 d后的产孢量以葡萄糖蛋白胨琼脂培养基最多，为2.900×107个/皿，其余依次为PDA、PSA、麦芽糖琼脂培养基、淀粉琼脂培养基和察贝克氏培养基（表2）。

表2　6种培养基对梨炭疽病菌菌落生长和产孢量的影响Table 2 Effects of 6 media on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.3温度和pH对菌落生长和产孢量的影响

梨炭疽病菌在温度为5—30℃均能生长，其中以25℃最为适宜，直径为8.48 cm。菌落在pH =3—10均能正常生长，且都有孢子产生，其中菌落生长以pH =5—8最为适宜，菌落直径在7 cm以上；产孢量以pH =3强酸环境最大，达到6.167×106个/皿，但菌丝稀疏，紧贴培养基，其次为pH =7—8的中性至弱碱性（表3）。

表3　温度和pH对梨炭疽病菌菌落生长和产孢量的影响Table 3 Effects of temperature and pH on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.4菌落致死温度

将菌丝块在40—54℃的水浴中处理10 min，于PDA平板上培养7 d后均能形成菌落，而56℃以上不能生长，因此菌落的致死温度为56℃处理10 min。

2.5光照对菌落生长和产孢量的影响

病原菌不同光照条件下菌落生长差异不大；产孢量以全暗条件下最大，为1.4833×107个/皿，其次为光暗交替和全光条件（表4）。

表4　光照条件对梨炭疽病菌菌落生长和产孢量的影响Table 4 Effects of light on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.6不同碳、氮源对菌落生长和产孢量的影响

菌落生长最适宜的碳源为麦芽糖、乳糖和葡萄糖，菌落直径分别为6.15 cm、5.68 cm和5.60 cm，最不适宜的为果糖；产孢量最适宜的碳源为蔗糖，产孢量为5.833×106个/皿（表5）。

表5　碳源对梨炭疽病菌菌落生长和产孢量的影响Table 5 Effects of carbon sources on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

菌落生长最适宜的氮源为酵母膏、蛋白胨和牛肉膏等有机氮源，菌落直径大于6 cm，最不适宜的是硫酸铵和氯化铵；较适宜产孢的氮源为蛋白胨和牛肉膏，产孢量分别为8.767×107个/皿和5.150×107个/皿（表6）。

表6　氮源对菌落生长和产孢量的影响Table 6 Effects of nitrogen sources oncolony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.7杀菌剂对梨炭疽病菌的毒力测定

14种杀菌剂对梨炭疽病菌的毒力存在明显差异，其中以多菌灵、咪鲜胺锰盐、氟啶胺、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯的毒力较高，EC50小于1 mg/L；咪鲜胺、丁子香酚、醚菌酯和腈菌唑，EC50小于10 mg/L；二氰蒽醌的EC50为35.1509 mg/L；克菌丹、代森联、代森锰锌和丙森锌的毒力较低（表7）。

表7　14种杀菌剂对梨炭疽病菌的毒力Table 7 Toxicities of 14 fungicides to C.gloeosporioides

3　结论与讨论

梨炭疽病菌在梨叶、梨枝和梨果煎汁培养基上能正常生长，其中以梨果和梨枝培养基生长较好，以梨果培养基分生孢子产量较高，可能梨果中含有的糖类有利于菌丝生长和产孢。不同培养基中，以PDA最适宜菌落生长，但以葡萄糖蛋白胨琼脂培养基产孢量最多。

病原菌无论单糖或多糖都可以利用，但菌落生长最适宜的碳源为麦芽糖、乳糖和葡萄糖，产孢最适宜的碳源为蔗糖。病原菌能利用有机和无机氮，但菌落生长最适宜有机氮，产孢较适宜的氮源为蛋白胨。病原菌在5—30℃下均能生长，最适25℃，pH =3—10的条件下能产生孢子，最适宜pH为3；菌丝块的致死温度为56℃；菌落生长对光照的要求不严格，但产孢量以全暗条件下最大。

刘邮洲等［11］研究了梨炭疽病菌部分特性，在菌丝生长温度和pH方面与本研究结果相似；而适宜的碳源和氮源与本研究结果有一定差异，这可能与病菌长期生存的环境有关。

有机肥（有机氮）用量过大、过剩，速效肥偏少，会削弱梨树生长势，有利于炭疽病的发生。选择高地建园，沟系畅通，科学施肥，合理修剪，改善梨园土壤环境，能有效控制发病，说明改变环境和科学种植是控制病害的重要途径之一。

目前，蜜梨等果品产业正在向规模化、省工化、保护地的方向发展，为梨炭疽病的标准化防控提供了条件。本试验表明，多菌灵、咪鲜胺锰盐、氟啶胺、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯的毒力较高，其中苯醚甲环唑用于防治果树多种病害，取得了良好效果。传统农药多菌灵不仅对梨炭疽病菌具有较高的毒力，研究发现，其对甜瓜枯萎病菌［9］、黄瓜菌核病菌［10］、葡萄灰霉病菌［12］、桃褐腐病菌［13］和水稻恶苗病病菌［14］等多种病菌也有很高的毒力，在当前普遍追求新农药的形势下，传统农药仍值得继续合理利用。

参 考 文 献

［1］吕佩珂，苏慧兰，庞震，等.中国现代果树病虫原色图签［M］.北京：化学工业出版社，2013：97-98，164-165，322-323，471-472.

［2］岳兰菊.安徽砀山梨炭疽病的发生规律及防治措施［J］.中国果树，2011（3）：54-56.

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［4］吴良庆，朱立武，衡伟，等.砀山梨炭疽病病原鉴定及其抑菌药剂筛选［J］.中国农业科学，2010，43（18）：3750-3758.

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［9］赵杰，庄隽怡，唐亚芹，等.甜瓜枯萎病菌的生物学特性及防治药剂的室内筛选［J］.上海农业学报，2010，26（1）：129-132.

［10］赵杰，周超英，顾振芳.腐霉利和多菌灵及其复配剂对黄瓜菌核病菌的毒力测定［J］.上海交通大学学报（农业科学版），2008，26（4）：223-325.

［11］刘邮洲，陈志谊，钱国良，等.梨胶胞炭疽病菌的分离、鉴定及其生物学特性［J］.江苏农业学报，2013，29（1）：60-64.

［12］赵杰，徐心，周超英.7种杀菌剂对葡萄灰霉病的抑菌试验［J］.上海农业科技，2014（4）：145.

［13］赵杰，徐心，曹忠.五种杀菌剂对桃褐腐病菌的抑菌作用初探［J］.上海农业科技，2014（5）：151.

［14］李斌，赵杰，黄玉人.5种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力测定［J］.上海农业科技，2015（1）：122.

（责任编辑：程智强）

Biological characteristics of Colletotrichum gloeosporioides Penz.and indoor screening of fungicides

CHEN Guo-ping1，ZHAO Jie2*
（1Nicheng Station of Pudong New District Agricultural Service Center，Shanghai 201306，China；2Pudong New District Agro-Technology Extension Center，Shanghai 201201，China）

Abstract：The biological characteristics of Colletotrichum gloeosporioides Penz.were studied and the fungicides of controlling pear anthracnose were preliminarily selected in a laboratory.The results showed that pear fruit medium and pear branch medium were both plant juice media suitable for the mycelial growth，and pear fruit medium was also suitable for the spore production；Potato dextrose agar（PDA）medium and dextrose peptone agar medium were the most suitable for the colony growth and spore production respectively.The temperature suitable for the mycelial growth was 5—30℃and the best was 25℃；The pH limits suitable for the colony to produce spores was quite wide and at pH 3 the spore production was the greatest；The thermal death point of the mycelia was 56℃；The spore production was the greatest in darkness.Among the tested carbon sources，maltose，lactose and dextrose were favorable for the mycelial growth，and sucrose was the most favorable for the spore production；Among the tested nitrogen sources，yeast extract，peptone and beef extract were favorable for the mycelial growth，and peptone and beef extract were favorable for the spore production.Testing the inhibiting effects of 14 fungicides on C.gloeosporioides by growth rate method indicated that carbendazim，prochloraz-manganese chloride complex，fluazinam，difenoconazole and pyraclostrobin had high toxicity.

Key words：Pear anthracnose；Colletotrichum gloeosporioides Penz.；Biological characteristics；Fungicides

中图分类号：S436.612

文献标识码：A

文章编号：1000-3924（2016）03-105-05

DOI：10.15955/j.issn1000-3924.2016.03.21

收稿日期：2015-09-29

基金项目：上海市科技兴农推广项目［沪农推字（2015）第1-4号］

作者简介：陈国平（1958—），男，大专，农艺师，研究方向：植物保护。Tel：021-58077713，E-mail：2746448530@qq.com

*通信作者：赵杰（1979—），男，硕士，高级农艺师，研究方向：园艺作物栽培与植物保护。Tel：021-58588032，E-mail：zhaocaoyou@163.com