正交试验法优选冠舒颗粒提取工艺

蒋殿欣，王钰涵，张炜煜

(长春中医药大学，长春 130117)

正交试验法优选冠舒颗粒提取工艺

蒋殿欣，王钰涵，张炜煜*

(长春中医药大学，长春 130117)

摘要：目的优选冠舒颗粒的醇提工艺和水提工艺。方法采用单因素考察法和L9(34)正交试验法，以总皂苷含量为考察指标，考察乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数对醇提工艺的影响。以总多糖含量为考察指标，考察提取时间、提取次数、加水量对水提工艺的影响。结果最佳醇提工艺为加8倍于药材量70%乙醇提取3次，每次2 h；最佳水提工艺为加6倍于药材量水提取3次，每次2 h。结论冠舒颗粒提取工艺稳定可行，适合大工业生产。

关键词：冠舒颗粒；总皂苷；总多糖；提取工艺

冠舒颗粒为吉林省科技厅重点科技攻关项目，由人参、三七、栀子、甘草组成，是临床用于治疗冠心病的有效药物。人参的主要活性成分为多糖和皂苷[1-4]，三七富含皂苷类成分，迄今已从三七的不同部位分离鉴定70多个达玛烷型皂苷[5-7]，具有广泛的药理作用[8]。现代植物化学研究[9]发现，栀子中含有一些有机酸、黄酮、香豆素、挥发油、皂苷、木脂素、多糖及其他类化合物，具有抗炎、抗氧化、利胆、利尿、抗肿瘤、解热、镇痛、辐射防护、降血脂等多种药理活性。故本实验拟选择总皂苷、总多糖含量分别为冠舒颗粒的醇提工艺、水提工艺的评价指标，采用正交试验优选提取工艺，为该制剂的工业化生产提供有力的技术支持。

1材料

WFH-203J型三用紫外可见分析仪(上海精科实业有限公司)，AR2140型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，JA5103N电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)，RE- 52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。人参皂苷、葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号111129,110833-200904)，人参、三七、栀子、甘草均购于安徽易元堂中药饮片科技有限公司，经长春中医药大学姜大成教授鉴定，均符合2015版《中国药典》一部相关项下要求，乙醇为分析纯，乙腈、甲醇均为色谱纯，娃哈哈纯净水。

2方法与结果

2.1总皂苷提取工艺的优选2.1.1乙醇浓度的考察按处方比例称取药材，共5分，各67.5 g，加入8倍于药材量浓度分别为65%、70%、75%、80%、85%的乙醇回流提取2次，每次1.5 h，提取液滤过，滤液合并，减压回收乙醇至无醇味，浓缩，干燥至恒重；取粉末0.3 g，精密称定，按总皂苷含量测量方法进行测定，结果分别为326.249、656.041、403.174、214.192、153.515 mg/100 g，表明乙醇浓度在70%时，总皂苷含量最高，故确定乙醇浓度为65%～75%。

2.1.2正交试验设计以提取物中总皂苷的含量为考察指标，采用L9(34)正交试验考察乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数对考察指标的影响，优选乙醇回流提取工艺。按处方比例称取药材，共9分，各100 g，按因素水平表(表1)设计的条件进行回流提取，提取液滤过，滤液合并，减压回收乙醇至无醇味，浓缩，干燥至恒重，依法测定干膏中总皂苷的含量，计算提取率。试验安排及结果见表2，方差分析见表3。

表1　总皂苷提取工艺正交试验因素水平

表2　总皂苷提取工艺正交试验安排

表3　总皂苷提取工艺方差分析

注：#P<0.05F0.05(2，2)=19.00F0.01(2，2)=99.00

表2、表3结果表明，以总皂苷含量为指标，影响醇提工艺的因素作用顺序为：回流次数>醇浓度>提取时间>加醇量，回流次数的影响因素有显著性差异(P<0.05)，结合经济合理适合工业化生产及处方中其他有效成分的影响，确定最佳工艺为A2B2C3D3。即处方加8倍于药材量70%乙醇提取3次，每次2 h。

2.1.3验证试验取8倍于处方量的药材，共3分，按最佳的工艺条件进行提取，提取液滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，干燥至恒重，测定提取物中总皂苷的含量为614.242 mg/100 g，RSD值为1.55%。验证结果表明该工艺稳定可行。

2.2总多糖提取工艺的优选

2.2.1正交试验设计取最佳醇提工艺提取后的药渣，平均分为9分，以总多糖的提取率为考察指标，采用L9(34)的正交设计进行试验。按因素水平表设计的条件进行煎煮，提取液滤过，滤液合并，浓缩，干燥至恒重，测定提取物中总多糖的含量，计算提取率。试验安排及结果表明，以总多糖含量为指标，影响水煎工艺的因素作用顺序为：提取时间>提取次数>加水量，提取时间的影响因素有显著性差异(P<0.05)，结合经济合理适合工业化生产及处方中其他有效成分的影响，确定最佳工艺为A1B3C3D3。即处方加6倍于药材量水提取3次，每次2 h。2.2.2验证试验取醇提验证试验中药渣按最佳水提工艺提取，提取液滤过，滤液合并，浓缩，干燥至恒重，测定提取物中总多糖含量为1 862.602 mg/100 g，RSD值为1.2%。验证结果表明该工艺稳定可行。

3小结

确定以君药人参中脂溶性有效成分皂苷和水溶性成分多糖为考察指标，但兼顾臣药三七的有效成分同样为多糖和皂苷，臣药也在处方中发挥着重要的作用，因此，最终确定脂溶性的有效成分为总皂苷，水溶性成分为总多糖，进行提取工艺的研究[10-17]。经过醇提和水煎工艺制成颗粒。通过口服的方式给药，达到治疗疾病的效果。冠舒颗粒具有使用方便、携带方便、疗效确切的优点，并避免了传统中药汤剂味苦，服用量大，久置易霉变的缺点。本研究通过单因素考察法和正交试验法确定了处方中有效成分的最佳提取工艺，为后续的大工业生产提供可靠的参数。

比较了超声提取和乙醇回流提取方法[18]，当采用超声提取法时，测得总皂苷含量重复性差，且总皂苷含量低于乙醇回流提取法。可能原因为采用超声提取法时，总皂苷提取不完全。当采用乙醇回流提取法时，总皂苷含量重复性好，工艺稳定可行。故确定醇提工艺为乙醇回流提取法。

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Optimization of extraction process for Guanshu Granules by orthogonal test

JIANG Dianxin,WANG Yuhan,ZHANG Weiyu*

(Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：ObjectiveOptimize alcohol and water extraction processes of Guanshu granules.Methods According to the single factor method and L9(34) orthogonal test,the content of total saponins as test index,to optimize alcohol extraction process with ethanol concentration,ethanol amount,extracting time,extracting times.The total polysaccharides contents as test index,to optimize water extraction process with extracting time,extracting times,amount of water.ResultsThe best ethanol extraction process is extracting three times with 8 times the amount of 70% ethanol for 2 h per time;the best water extraction process is extracting three times with 6 times the amount of water for 2 h per time.ConclusionThe optimized process is reliable and feasible,and is suitable for industrial production.

Keywords：Guanshu Granules;total saponins;total polysaccharides;extraction process

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.03.011

基金项目：吉林省科学技术厅项目(20140204032YY)。

作者简介：蒋殿欣(1989-)，男，硕士研究生，主要从事药物新剂型及新型给药系统。

*通信作者：张炜煜，电话-13500881796，电子信箱- weiyuzhang2003@126.com

中图分类号：R284.2

文献标志码：A

文章编号：2095-6258(2016)03-0469-03

(收稿日期:2016-01-12)