川崎病患儿外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义

祝　绚，王雪梅，刘成桂，曹登成

(成都市妇女儿童中心医院，四川成都 610091)

·临床研究·

川崎病患儿外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义

祝绚，王雪梅，刘成桂，曹登成

(成都市妇女儿童中心医院，四川成都 610091)

摘要:目的通过检测川崎病(KD)患儿不同阶段外周血中淋巴细胞亚群绝对值的变化，分析其临床意义。方法采用流式细胞术分别检测31例KD急性期(急性期组)，30例KD恢复期患儿(恢复期组)和35例健康儿童(对照组)外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和CD56+水平，并对结果进行比较。结果急性期组CD3+、CD4+、CD8+明显低于对照组，CD19+明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；恢复期组CD3+、CD8+明显低于对照组，CD19+明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；恢复期组CD3+、CD8+明显高于急性期，CD19+明显低于急性期，差异具有统计学意义(P<0.05)；CD4+/CD8+和CD56+在三组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测淋巴细胞亚群对评估KD患儿免疫状况、诊断和治疗具有重要的临床价值。

关键词:川崎病；淋巴细胞亚群；流式细胞术

川崎病(KD)是一种急性、自限性全身血管炎性疾病，1967年首次被日本川崎富所报道，好发于6个月至5岁的婴幼儿，临床表现为高烧、皮疹、淋巴结肿大和结膜充血，其发病机制尚不明确[1]。川崎病可引起免疫紊乱，累及冠状动脉，诱发心血管疾病和后天性心脏病等严重后遗症，是导致婴幼儿死亡的重要因素之一。随着发病率的日益增长，长期以来KD缺乏特异、有效的诊断方法[2]。本文通过对KD患儿急性期、恢复期外周血淋巴细胞亚群的测定，并和正常儿童进行比较，评估KD患儿免疫功能变化，为临床对KD诊断、治疗和预后提供一定帮助。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年1月至2014年12月本院儿科收治的KD患儿61例，其中男39例，女22例，年龄5个月至8岁，平均(4.1±1.3)岁。采用2002年日本川崎病研究委员会第5次修订的诊断标准[3]，按病程将61例KD患儿分为急性期组(病程10 d内未经治疗)和恢复期组(病程21～28 d)，急性期组31例，恢复期组30例；对照组35例为同期门诊健康体检儿童，两组性别和年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法分别于急性期和治疗恢复期检测外周血淋巴细胞亚群。

1.3仪器和试剂采用美国BECKMAN COULTER公司CYTOMICS FC 500流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和CD56+水平。试剂盒由美国BECKMAN COULTER公司提供，严格按照操作说明进行。

2结果

研究结果显示，急性期组CD3+、CD4+、CD8+明显低于对照组，CD19+明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；恢复期组CD3+、CD8+明显低于对照组，CD19+明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；恢复期组CD3+、CD8+明显高于急性期，CD19+明显低于急性期，差异具有统计学意义(P<0.05)；CD4+/CD8+和CD56+在三组中差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　　外周血细胞亚群比较±s)

*：P<0.05，与对照组比较；△：P<0.05，与急性期组比较。

3讨论

川崎病是一种以高烧、皮疹、黏膜炎、淋巴结肿大伴冠状动脉损害和免疫紊乱为特征的婴幼儿急性血管炎，可诱发冠状动脉扩张、心肌炎、后天性心脏病等严重并发症，是威胁婴幼儿健康的重要疾病之一。日本和美国做了大量流行病学调查发现，发病率呈逐年上升趋势，但其发病机制至今尚未清楚，也没有特异性的检测手段[2,4]，这对KD患儿的疾病诊断、病程评估、治疗和预后造成一定困扰。

川崎病的早诊断、早治疗对减少川崎病及其并发症具有重要意义。虽然川崎病的发病机制尚不清楚，但很多研究都显示KD发病与淋巴细胞感染密切相关。近年研究发现，病毒、细菌、超抗原、遗传因素等都可能参与了KD的病理机制[1]。Burns等[4]认为，KD患儿的血管炎和免疫紊乱可能与亲淋巴细胞性病毒同时对内皮细胞和淋巴样细胞存在亲和性有关。通过检测KD患儿和健康儿童外周血单个核细胞培养的上清液颗粒部分发现，KD患儿的外周血单个核细胞上清液颗粒部分有逆转录病毒活化，而这种逆转录病毒的活化传达到固定的T细胞系，从而证明了KD与淋巴细胞的外源感染有关。丙种球蛋白是目前治疗KD的主要方法之一[2]，其作用机制可能与延缓了淋巴细胞的凋亡时间，降低了淋巴细胞凋亡比例和DNA片段有关，提示KD与自身免疫性疾病和无功能淋巴细胞凋亡相关[5]。而Lee等[6]的研究表明，免疫球蛋白和阿司匹林联合治疗组的患者比单独用阿司匹林治疗组的患者CD4+、CD8+和T细胞总数上升更明显，B细胞下降更明显，认为丙种球蛋白对KD患儿的治疗可修复T、B细胞的紊乱，特别是B细胞的紊乱。因此，外周血淋巴细胞水平变化与KD患儿病程发展密切相关，不容忽视。

淋巴细胞是机体免疫系统功能中最重要的细胞群，是反映机体免疫状态的重要指标。当淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常或变化时，就会导致机体免疫紊系统乱并产生病理变化，尤其是T淋巴细胞以及T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的数量和相对比值的变化在免疫系统中占主导地位[7]。本研究结果显示，KD急性期与恢复期CD3+、CD8+明显低于正常组，CD19+明显高于对照组。CD3+的降低说明了T淋巴细胞总数的减少导致了KD患儿T细胞的异常，免疫应答使机体免疫系统处于失衡状态，特别是CD8+的明显减少，提示作为Ts细胞减少可能导致机体免疫系统的过度激活，引起细胞免疫的紊乱。另一方面，Th细胞和Ts比例在机体正常情况下维持一个相对平衡状态，一旦这个平衡打破，机体免疫系统也会出现紊乱。虽然三组中CD4+/CD8+的差异无统计学意义(P>0.05)，但在急性期CD4+是明显低于正常组，到了恢复期CD4+与正常组并无差别，说明CD4+降低的速度相对CD8+速度慢，说明Th细胞相对Ts细胞增加，B细胞的激活又依赖于Th细胞和Ts细胞的调节，CD19+的明显增高可能与Ts的减少伴有Th的增加有关，从而造成B细胞抑制降低，活化增加，导致B淋巴细胞功能亢进，并产生大量抗体，使得患儿的体液免疫发生紊乱。此外，处于恢复期的患儿CD3+、CD8+明显高于急性期，CD4+恢复到正常，CD19+也明显降低，说明细胞免疫和体液免疫的紊乱无论在T淋巴细胞总数，还是Th/Ts细胞的比例以及B淋巴细胞的总数在恢复期都处于一个逐渐修复平衡的状态，这对病程的判断和治疗有重要意义。

综上所述，动态检测淋巴细胞亚群对对评估患儿的免疫状况、病理进程、疗效和预后有一定的帮助。

参考文献

[1]Ashrafi AH,Wang J,Stockwell CA,et al.Kawasaki disease:four case reports of cardiopathy with an institutional and literature review[J].Pediatr Dev Pathol,2007,10(6):491-499.

[2]Pinna G,Kafetzis D,Tselkas O,et al.Kawasaki disease:an overview[J].Curr Opin Infect Dis,2008,21(3):263-270.

[3]Levison ME,Thomas M,Pallasch J,et al.Diagnosis,treatment,and long-term management of Kawasaki disease:a statement for health professionals from the Committee on Rheumatic Fever,Endocarditis,and Kawasaki Disease,Council on Cardiovascular Disease in the Young,American Heart Association[J].Pediatrics,2004,114(6):1708-1733.

[4]Burns JC,Geha RS,Schneeberger EE,et al.Polymerase activity in lymphocyte culture supernatants from patients with Kawasaki disease[J].Nature,1986,323(6091):814-816.

[5]Yi QJ,Li CR,Yang XQ.Effect of intravenous immunoglobulin on inhibiting peripheral blood lymphocyte apoptosis in acute Kawasaki disease[J].Acta Paediatr,2001,90(6):623-627.

[6]Lee HK,Kim DS,Noh GW,et al.Effects of intravenous immune globulin on the peripheral lymphocyte phenotypes in Kawasaki disease[J].Yonsei Med J,1996,37(5):357-363.

[7]Santana MA，Esquivel-Guadarrama F.Cell biology of T cell activation and differentiation[J].Int Rev Cytol,2006,250(250):217-274.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.039

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)10-1393-03

(收稿日期：2016-01-23)