HPLC法测定药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量

李齐激 南莹 杨艳 王道平 杨小生

【摘要】目的：建立药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量测定方法。方法：刺梨以75%乙醇水浴回流提取，采用Pntulips TM BP-C18（4.6 mm×250mm，5 μm）色谱柱，乙腈-0.05 %三氟醋酸溶液（27∶73）为流动相，流速1 ml/min，检测波长208 nm，柱温30℃，进样量为10μl。结果：刺梨苷在0.23～2.3μg范围内具有良好的线性关系，平均回收率为97.82 %，RSD为2.44 %（n=6）。结论：利用HPLC建立了药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量测定方法，经方法学验证，该法简便、准确、稳定，为药食两用植物刺梨的合理开发利用提供质量评价依据。

【关键词】刺梨；刺梨苷；HPLC

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）09-0022-03

[JP+1]刺梨为蔷薇科植物缫丝花Rose roxburghii Tratt的果实，广泛分布于暖温带及亚热带地区，在我国主要分布在四川、云南和贵州三省，其中又以贵州野生与栽培资源最为丰富[1-2]。刺梨具有消食健脾，收敛止泻的功效，主要用于治疗积食腹胀，泄泻等疾病[3]。研究表明，三萜和黄酮类成分为刺梨的主要活性物质，并在增强免疫力、延缓衰老、抗动脉粥样硬化、健胃消食等方面均具有较好的活性[4-6]。作为药食两用植物，1994版、2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》和2004年卫生部食品新资源品种17号公告先后收录该品种，目前在食品、保健用品、医药领域广泛应用。但其质量控制方法仍处于空白，尤其是在医药、保健用品应用领域。课题组结合前期研究发现的活性三萜类成分[7]，选择其中较具有代表性的活性三萜—刺梨苷进行含量测定，旨在建立药食两用植物刺梨的质量控制方法，为该植物药材及其产品开发提供品质评价与检测方法参考。[JP]

1仪器与材料

1.1仪器Agilent 1100高效液相色谱（含柱温箱、可见-紫外检测器、四元泵、在线脱气机和自动进样器，美国安捷伦科技有限公司）；电子天平（Mettler Toledo，26115102-0）；旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；ZK-82A 型真空干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2材料刺梨苷对照品为实验室自制，经NMR、MS等光谱数据确定其化学结构，通过HPLC纯度检测为98.91%；乙腈为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），三氟醋酸为分析纯（天津市光复精细化工研究所），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

1.3药材刺梨药材于2014年8月采自贵州龙里县，经贵州大学安华明教授教授鉴定为蔷薇科植物缫丝花Rosa roxburghii Tratt的果实（刺梨），标本凭证（201408003）保存于贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Pntulips TM BP-C18（4.6 mm×250mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.05 %三氟醋酸溶液（27∶[KG-*3/5]73）；柱温：25 ℃；流速：1 ml/min；检测波长：208 nm；进样量：10μl。在此色谱条件下，理论板数按刺梨苷峰计算≥3 000，与其他峰分离度>1.5。色谱图详见图1。

2.2对照品溶液的配置取刺梨苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.23 mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的配置取刺梨粗粉（过三号筛）约5 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加75 %乙醇100 ml，水浴回流提取3次，每次2 h，滤过，合并滤液，减压浓缩近干，加适量蒸馏水溶解，再用乙酸乙酯萃取至无色，合并乙酸乙酯萃取层，减压浓缩近干，立即加甲醇使溶解，转移至至100 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4线性关系考察精密吸取2.2项下对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X，mg）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=270.71X+9.7049，R2=0.9998。结果表明，刺梨苷在0.23～2.3μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5[JP+1]精密度考察精密吸取“2.2”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，记录峰面积。结果峰面积RSD为1.38 % （n=6），表明仪器精密度良好。[JP]

2.6重复性试验称取同一批次（20150801）刺梨样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样，记录峰面积。结果峰面积RSD为1.91 %（n=6），表明该方法重复性良好。

2.7稳定性考察取同一批次（20150801）刺梨供试品溶液，分别于0、2、4、8、10、12 h时按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。结果峰面积RSD为2.61 %（n=6），表明供试品在12 h内稳定性良好。

2.8加样回收率试验称取已知含量的刺梨样品（20150801）6份，每份约2.5 g，分别加入刺梨苷4.4 mg，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，计算回收率，测定结果见表1。

2.9样品测定取不同批次刺梨样品约5g，按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液各2份，再按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算样品中刺梨苷的含量，结果3批样品（20150801、20150802、2015080）中刺梨苷的含量分别为0.176、0.180、0.183 mg/g。

3讨论

3.1检测指标的选择刺梨总三萜为该植物的主要活性成分，在恶性肿瘤、糖尿病方面效果较好，具有较高的应用价值和良好的应用前景[7-9]。试验综合考察了其中3种活

性三萜刺梨苷、野蔷薇苷、arjunetin的色谱条件、含量高低和代表性，最终选择了分离度较好，含量较高，且尤具代表性的刺梨苷作为质量控制的检测指标。

3.2提取条件的考察通过比较超声、索氏回流、冷浸及水浴回流提取，结果刺梨苷含量高低依次为水浴回流>索氏回流>冷浸>超声。其次，还比较了甲醇、乙醇、水作为溶剂的提取效果，结果三者提取含量变化较小，水提取含量稍高但杂质峰较多，且分离度较差，考虑到经济、环保，确定选择以乙醇为溶剂，最终通过单因素考察最终确定以75%乙醇进行提取。最后，还比较了乙酸乙酯萃取次数对含量的影响，发现以水-乙酸乙酯体积比为1∶[KG-*3/5]2时重复萃取3次可萃取完全。

参考文献

[1]中国植物志编辑委员会.中国植物志（37卷）[M].北京：科学出版社，1998：452.

[2]贵州植物志编辑委员会.贵州植物志（7卷）[M].贵阳：贵州人民出版社，1982：223.

[3]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[M].贵阳：贵州科学技术出版社，2003：230

[4]戴支凯，余丽梅，杨小生，等.刺梨三萜化合物CL1体外抗人子宫内膜腺癌作用[J].时珍国医国药，2011，22（7）：1656-1658.

[5]秦晶晶，李齐激，薛琰，等.刺梨总三萜提取方法及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].食品工业科技，2014，10（33）：186-189.

[6]赵转地，张爱华，洪峰.刺梨及其产品的营养及保健药用价值研究进展[J].环境与职业医学，2007，24（1）：82-84.

[7]杨小生，马琳，梁冰，等.刺梨果活性提取物及其制备方法、检测方法和应用[P].中国专利：ZL201110080922，2013-03-20.

[8]南莹，李齐激，马琳，等.紫外分光光度法测定刺梨总三萜与总黄酮含量[J].遵义医学院学报，2012，35（6）：473-476.

[9]秦晶晶，李齐激，薛琰，等.刺梨总三萜提取方法及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].食品工业科技，2014，10（33）：186-189.

（收稿日期：2016.03.21）