MUC1基因表达与其它肿瘤标志物在乳腺癌诊断中的应用

邓 君，刘 蔚，洪 华，孙昌瑞(四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川 成都 610071)

MUC1基因表达与其它肿瘤标志物在乳腺癌诊断中的应用

邓 君，刘 蔚，洪 华，孙昌瑞
(四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川 成都 610071)

目的 探讨MUC1基因表达水平在乳腺癌诊断中的应用。方法 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测50例健康女性体检者、87例良性乳腺肿瘤和106例乳腺癌外周血中MUC1基因表达量，用化学发光法检测CA125、CA153和CEA，并进行对比分析研究。结果 MUC1对乳腺癌诊断灵敏度显著高于CA153、CA125和CEA。结论 采用FQ-PCR检测MUC1基因表达水平可有效监测乳腺癌的诊断。

MUC1；CA153；CA125；CEA；乳腺癌

分子生物学技术已广泛应用于乳腺癌的基因研究，目前发现多种癌基因表达异常与乳腺癌的发生、发展和预后有关，如C-ERBB2[1]、CK19[2]和MUC1[3]等。本文采用FQ-PCR检测50例健康女性体检者、87例良性乳腺肿瘤和106例乳腺癌外周血中MUC1 基因表达量，同时用化学发光法检测其CA153、CA125和CEA，并进行对比分析研究。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年1月至2015年12月四川省人民医院体检中心的50例健康女性体检者(正常对照组)，年龄25～75岁；106例乳腺癌患者，年龄27～78岁；87例良性乳腺肿瘤患者，年龄23～77岁。87例良性乳腺肿瘤中47例为纤维瘤，40例为脂肪瘤，106例乳腺癌患者均为经病理确诊的初诊者，排除患其它肿瘤的可能性，术前采取静脉血。

1.2 方法

1.2.1 细胞分离和总RNA的提取 取5 ml静脉血，经过1 mg/mL EDTA抗凝处理后，加入10 ml左右的生理盐水稀释2～3倍，再使用淋巴细胞分离液将淋巴细胞分离，采用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法[4]将细胞总RNA提取处理。

1.2.2 引物和探针 采用PE公司Primer Express软件设计MUC1的引物和探针，由广州达安基因生物公司合成。MUC1 正义引物，5’-3’CGTCGTGGACATTGATGGTACC，MUC1反义引物，5’-3’GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA。

1.2.3 GAPDH内对照试剂盒 由美国ABI生物公司生产。

1.2.4 FQ-PCR ①cDNA合成[5]；②FQ-PCR反应[5]：在7700 Sequence Detector 分析仪(美国ABI公司)上进行DNA扩增和分析，每份标本均作MUC1和GAPDH测定。扩增参数为：50 ℃2 min，95 ℃15 min后；再94 ℃0.5 min，65 ℃1 min，42次循环；③制备标准曲线：每次扩增均使用标准曲线，范围为102～106拷贝/ml。④定量分析：仪器根据标准曲线自动计算GAPDH和MUC1拷贝数/mL，以MUC1和GAPDH比值作为MUC1的表达水平。

1.2.5 CEA、CA153和CA125的检测 采用IMMELITE WANG化学发光仪(天津得普)进行测定。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件进行数据处理。计量资料以均值±标准差表示。组间比较采用t检验；率的比较采用卡方检验。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MUC1、CA153、CA125和CEA测定结果 乳腺癌组与正常对照组和良性乳腺疾病组比较，差异均有统计学意义(P< 0.05)，正常对照组和良性乳腺疾病组比较，差异无统计学意义，结果见表1。

表1 三组MUC1、CA153、CA125和CEA测定结果比较

#以MUC1 /GAPDH比值作为MUC1基因表达水平；* 与正常对照组和良性乳腺疾病组比较，P< 0.01

2.2 MUC1和肿瘤标记物用于乳腺癌诊断的评价

表2 MUC1、CA153、CA125和CEA对乳腺癌诊断的方法学评价

3 讨论

MUC1基因定位于染色体1q21，是一类高分子量糖蛋白，广泛表达于消化系统、呼吸系统和生殖系统的正常黏膜表面，其异常表达与肿瘤细胞的生长、分化、浸润转移、粘附以及机体的免疫监控有关[6]。研究表明MUC1在95%的乳腺癌中呈50～100倍高表达，并伴随着极性消失。MUC1 异常表达与肿瘤的恶性程度及预后不良密切相关[7]。人们越来越多地将其用于乳腺癌相关基因的研究[8]，但是对于MUC1和其它用于乳腺癌诊断的肿瘤标记物，如CA153、CA125和CEA等的相关性研究较少，本研究采用FQ-PCR法定量检测了MUC1在外周血中的表达，并与其它的肿瘤标志物进行了比较，现报道如下。

临床上目前用于乳腺癌诊断的肿瘤血清学标记物主要有CEA、CA153和CA125等，但这些标志物的灵敏度均很低，CA153是报道较多的对乳腺癌特异性较高的标记物，但阳性率较低[9，10]，CA125和CEA的阳性率则更低，且对早期乳腺癌诊断的阳性率亦很低。

本试验用FQ-PCR检测了50例健康女性体检者、87例良性乳腺肿瘤和106例乳腺癌的外周血中MUC1的基因表达，并与CA153、CA125和CEA进行了对比分析。结果发现MUC1对乳腺癌诊断灵敏度(46.2%)显著高于CA153(35.8%)、CA125(32.1%)和CEA(28.3%)。

FQ-PCR具有高特异性、高灵敏性、高精确性和污染小等优于常规PCR的特点[11]，采用FQ-PCR检测MUC1的基因表达水平在外周血的表达，标本来源容易，可有效监测乳腺癌的诊断。

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Application of MUC1 gene expression and other tumor markers in the diagnosis of breast cancer

DENGJun，LIUWei，HONGHua，SUNChang-rui
(ClinicalLaboratory，SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital，Chengdu610071，China)

Objective To investigate the application of MUC1 gene expression in the diagnosis of breast cancer.Methods Clinical samples of 50 health women，87 patients with benign breast disease and 106 patients with breast cancer were detected by FQ-PCR. Serum levels of CA125，CA153 and CEA were detected by chemical luminous method. The results were analyzed comparatively.Results The sensitivity of MUC1 in the diagnosis breast cancer was higher when compared to CA153，CA125 and CEA.Conclusion Gene expression of MUC1 detected by FQ-PCR can give objective evidence for the diagnosis of patients with breast cancer.

MUC1；CA153；CA125；CEA；Breast cancer

四川省青年科研基金资助项目(编号：2007-5-345)；四川省卫生厅科研基金资助项目(编号：050034)

R446.11；R737.9

A

1672-6170(2016)06-0023-03

2016-07-20；

2016-08-24)