结核感染T细胞斑点试验在结核性疾病中的诊断价值研究∗

林燕平， 黄溢华， 李自顺， 黄共产， 林玉娟， 李建盛， 苏菊花(福建省厦门市第三医院检验科， 福建 厦门 361100)



结核感染T细胞斑点试验在结核性疾病中的诊断价值研究∗

林燕平， 黄溢华， 李自顺， 黄共产， 林玉娟， 李建盛， 苏菊花
(福建省厦门市第三医院检验科， 福建 厦门 361100)

摘 要:目的:观察结核感染T细胞斑点试验在结核性疾病中的诊断价值。方法:230例肺结核患者作为观察组，另选择230例健康患者作为对照组，对所有患者均进行痰涂片结核杆菌检测、T细胞斑点试验检测、TB-DNA检测和抗结核抗体检测。结果:痰涂片特异性最高，敏感性较低；TB-DNA敏感性最高，但特异性较低；抗结核抗体的敏感性和特异性虽然高于痰涂片和TB-DNA相关指标的最低水平，但其总体水平相对较低。T细胞斑点试验的敏感性和特异性虽然低于痰涂片和TB-DNA相关指标的最高水平，但其总体水平相对较高。结论:T细胞斑点试验具有快速，准确度高的特点，其综合诊断价值较高，值得临床考虑。

关键词:结核分枝杆菌； T细胞斑点试验； 结 核

结核性疾病的治疗难度较大，给患者带来了很大痛苦，一般发现越早，预后越好[1]。我们回顾性分析肺结核患者的临床资料，以探讨结核分枝杆菌T细胞斑点试验诊断的诊断价值，现报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料:研究对象为2013年1月至2014年5月本院收治的230例肺结核患者作为实验组，均经过结核分枝杆菌培养确诊。另选择230例健康患者作为对照组。年龄(57.9±11.5)岁。病程(5.2±1.3)年。男161例，女69例。疾病类型:原发性肺结核36例，继发性肺结核118例，血型播散型肺结核76例。

1.2方法:所有患者均同时采取4种方法进行检测。①痰涂片结核杆菌检测。痰涂片采用萋一尼抗酸染色法，第1次镜检阴性痰标本重复两次留标本检查。蓝色为阴性，红色为阳性。②T细胞斑点试验检测，试剂盒为英国Oxford Immunotec Limited公司提供，按照试剂盒说明书操作，阳性结果:对照孔斑点数为≤5个，样本孔斑点数为比对照孔斑点数≥6个。对照孔斑点数为≥6，样本孔斑点数为比对照孔斑点数≥2倍。③TB-DNA检测:试剂盒为华大基因公司产品，采用实时荧光PCR法，Ct值＜30为阳性，否则为阴性。④抗结核抗体检测。试剂盒为宜昌人福药业产品，按照试剂盒说明书进行操作，用酶标仪读取光密度值(OD值)，并在标准滴度曲线表中查找出相应标本中抗结核抗体滴度，阳性为＞400U/ mL。

1.3数据处理:统计4种检测方法的灵敏性，特异性和准确率，以P＜0.05为有统计学差异，SPSS12.0软件处理相关数据，卡方检验计数资料。

2　结 果

4种检测方法相关指标如表1所示。

表1　4种检测方法相关指标统计

表2　肺结核组和肺外结核组的T-SPOT.TB检测结果

细菌学检测结果列于表2，从表中可以看出，结核病组中菌阴患者201例，T-SPOT阳性159例，灵敏度为79.1%，其中菌阴肺结核灵敏度为76. 7%(112/ 146)，菌阴肺外结核灵敏度为85.5%(47/55)；结核病组中菌阳患者308例，T-SPOT阳性281例，灵敏度为91.2%，其中菌阳肺结核灵敏度为91.5%(270/295)，菌阳肺外结核灵敏度为84.6%(11/13)。

3　讨 论

对于肺结核疑似患者来说，许多患者缺乏典型的影像学征象，部分初发患者也缺乏典型的结核症状。细菌培养是诊断结核病情的金标准，具有非常高的特异性和灵敏性，但其最大的局限在于所需时间较长[2]，最快也要两周左右，不利于结核病情的大规模快速筛查，而且医疗资源紧张在相当长的时间内难以有较大改观，花费大量的人力和时间成本检测病情对于大多数医院来说都不太现实，此外，对于结核性脑膜炎患者来说，诊断所需时间太长，可能延误治疗，因此寻找合适的检测方法，对于提高结核疾病的检出率具有重要意义。

痰涂片方法所需时间较短，技术要求低，即使在很多基层医院也可开展，由于其基于结核分枝杆菌对特定染料显现特定颜色的原理，特异性较高，因此在临床上应用广泛。但由于提取和制作标本的过程中，主观因素较大，特别在含菌量少的情况下，敏感性较低。本次结果显示，痰涂片方法在4种方法中特异性最高，敏感性最低，其具有较为明显的局限性。抗结核抗体检测具有快速的特点，其原理是基于结核分枝杆菌对特定抗体产生反应，从而成为临床上可观察到的指标，从理论上来说，具有较高的特异性，但由于许多患者有卡介苗接种史[3]，假阳性率较高，从而使其特异性较低，此外，由于特异反应受所取样本浓度影响，敏感性相对较低。本次结果显示，抗结核抗体的敏感性和特异性较为均衡，但均处于较低水平，这对于提高检出率是不利的。TB-DNA是利用PCR反应，将原本浓度很低的结核分枝杆菌DNA序列扩增到较大水平，从而使其更容易检测到，具有很高的敏感性，而且可以很快拿到结果，但由于非特异性序列也可能随之扩增[4]，影响到对定性结果的评定，因此其特异性较低。本次结果显示，TB-DNA检测在在4种方法中敏感性最高，特异性最低，这同样不利于大规模筛查。

在结核分枝杆菌中存在RD1基因序列，这种序列在大部分其他分枝杆菌基因序列和卡介苗菌株基因序列中不存在，交叉反应少，从而保证了较高的特异性。RD1基因序列编码产生CFP-10和ESAT-6蛋白，其作为特异性抗原，可刺激T淋巴细胞成为致敏T淋巴细胞，并释放特异性的IFN-γ细胞因子。T细胞斑点试验本质上是一种酶免疫技术，每1个显色斑点代表1个致敏T淋巴细胞，根据斑点数来判断是否存在结核分枝杆菌。其可以从单细胞水平进行检测，有报道显示，其可以从6万个致敏T淋巴细胞中检出1个细胞，具有很高的特异性。此外，由于致敏T淋巴细胞是受刺激而产生，且寿命较短，因此T细胞斑点试验还可以判断患者治疗后体内是否还存在结核分枝杆菌。本次结果显示，T细胞斑点试验具有较高的灵敏性和特异性，显示了较高的诊断价值。灵敏度高的原因是在实验过程中，需要对受试者的白细胞进行计数，使每位受试者加入反应孔的白细胞数均为25万个，细胞计数虽不能完全克服免疫力异常的问题，但能让受试者基本在相同的水平进行测试。特异性高的原因是CFP-10和ESAT-6两个抗原的高特异，能排除绝大多数非结核分枝杆菌和卡介苗接种的影响。但此方法检测结核特异效应T淋巴细胞，不能区分活动性和潜伏性结核，因此也是导致特异性较低的原因。

参考文献:

[1] 储新民，孔建新.酶联免疫斑点试验诊断结核的敏感性和特异性研究[J].安徽医科大学学报，2012，47(5)：613～615.

[2] 吴静，徐建，张映铭，等.γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的诊断价值[J].中华实用诊断与治疗杂志，2011，25 (12)：1154～1155.

[3] 张瑛，孙亚蒙，徐欣晖，等.结核感染T细胞斑点试验在结核性疾病中的诊断价值[J].中华临床医师杂志(电子版)，2010，4(12)：2431～2434.

[4] 韦海旭，席薇莲，陆利欢，等.γ-干扰素释放分析T-SPOT. TB在结核性疾病中的诊断价值[J].临床肺科杂志，2012，17(8)：1439～1440.

文献标识码:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.048

文章编号:1006-6233(2016)02-0305-03

基金项目：∗福建省厦门市科技计划项目，(编号：2011S0409)