酸柏栀油软胶囊抗氧化作用初步研究*

延安大学医学院(延安716000)

张正祥　付佳廷　景东华△　吉金山　王　璐　米志宽　李宝莉　张　强　李　静　宋伟欣　苗乃周



酸柏栀油软胶囊抗氧化作用初步研究*

延安大学医学院(延安716000)

张正祥付佳廷景东华△吉金山王璐米志宽李宝莉张强李静宋伟欣苗乃周

摘要目的：探讨酸柏栀油软胶囊抗氧化作用。方法：将60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、高、中、低酸柏栀软胶囊组和辛伐他汀组。对照组正常饮食，其他组高脂饮食，4周后，眼眶采血全自动生化分析仪测定血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(CH)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平。高脂血症大鼠模型建立后，对照组不做处理，其他组均在每天上午9:00按1ml/100g剂量灌胃：模型对照组给予生理盐水，阳性对照组给予辛伐他汀(0.3 mg/100g)，高剂量组给予酸柏栀油软胶囊(0.45g/100g)，中剂量组给予酸柏栀油软胶囊(0.18g/100g)，低剂量组给予酸柏栀油软胶囊(0.072g/100g)。5周后，水合氯醛腹腔麻醉，腹主动脉采血测定血浆中TG、CH、HDL、LDL及总超氧化物歧化酶(T-SOD)水平。结果：高脂饮食4周后，高脂饮食大鼠血浆CH、HDL、LDL水平高于对照组，TG水平低于对照组(P<0.05)。干预5周后，酸柏栀油软胶囊均可降低高脂血症大鼠血清TC、升高血清T-SOD(P<0.01)；高剂量组降低LDL-C和TG水平(P<0.05)。结论：酸柏栀油软胶囊具有降低高脂血症大鼠血脂和升高高脂血症大鼠血清总超氧化物歧化酶作用。

主题词@酸柏栀油软胶囊高脂血症模型，动物抗氧化剂大鼠

酸柏栀油软胶囊(Soft capsule of compound oil of jujube , arboruitae and gardenia , SCCOJAG)是将酸枣仁、柏子仁、栀子的有效提取成分-酸枣仁油、柏子仁油、栀子油按照3∶3∶1配伍组成的复方制剂，其主要成分为多不饱和脂肪酸和维生素E[1]。现代研究表明， SCCOJAG具有降低血纤维蛋白原浓度、降低血液粘度、促进学习记忆、耐缺氧和缓解体力疲劳的功能[2-4]。本实验研究SCCOJAG降血脂和抗氧化作用。

资料与方法

1材料

1.1药品：SCCOJAG由西安东盛医药研究所生产，酸枣仁油、柏子仁油、栀子油配比为3∶ 3∶ 1，0. 5 g /粒，批号：081120。辛伐他汀片山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司生产，100mg/片，批号：131104。

1.2试剂：猪胆固醇、猪胆盐、丙基硫氧嘧啶购自北京博奥拓达公司，蛋黄、普通饲料购自第四军医大学实验动物中心，猪油自制。

1.3动物：5周龄SD大鼠60只(180±20g，雌雄各半)由第四军医大学实验动物中心提供。

1.4 仪器：全自动生化分析仪，规格型号：Cobas c 7 01 模块；生产地址：德国罗氏诊断有限公司；产品序列号：1145-05。

2方法

2.1高脂饲料配置：5%胆固醇、5%蛋黄、0. 5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、10%猪油、80%普通饲料混匀，压制成条，50℃烘干。

2.2建立SD大鼠高脂血症模型：60只SD大鼠适应性喂养1周后，按照体重，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、高剂量酸柏栀油软胶囊组、中剂量酸柏栀油软胶囊组和低剂量酸柏栀油软胶囊组，空白对照组给予正常饲料，其余各组给予高脂饲料，所有大鼠均自由饮水。4周后，采血前12h禁食自由饮水。采血时腹腔注射5%水合氯醛(0.6ml/100g剂量)麻醉，眼眶采血3ml，全自动生化分析仪测定TG、CH、HDL、LDL、T-SOD水平。

2.3干预实验：造模成功后，空白对照组继续正常饮食，模型对照组、阳性对照组、高剂量酸柏栀油软胶囊组、中级剂量酸柏栀油软胶囊组和低剂量酸柏栀油软胶囊组继续高脂饮食。空白对照组不做处理，其它各组均在上午9:00按1ml/100g 剂量灌胃，模型对照组给予生理盐水，阳性对照组给予辛伐他汀(0.3mg/100g)，高剂量组(酸柏栀油软胶囊0.45g/100g)，中剂量组(酸柏栀油软胶囊0.18g/100g)，低剂量组(酸柏栀油软胶囊0.072g/100g)。5周后，腹腔注射5%水合氯醛(0.6ml/100g)麻醉，麻醉后仰卧固定在手术台上，腹部备皮，常规消毒，打开腹腔，暴露腹主动脉，在肾脏下方约1cm处向下分离腹主动脉约1.5cm，近心端动脉夹阻断血流，远心端结扎，提起结扎线，在结扎线近心端剪一小口，沿腹主动脉向向心端插入动脉插管固定，松开动脉夹采血3ml，全自动生化分析仪检测TG、CH、HDL、LDL和T-SOD水平。

结果

1高脂饮食4周后，各组大鼠血清血脂及过氧化物歧化酶水平高脂饮食各组大鼠血浆TC、LDL-C、HDL-C水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，而血浆TG和T-SOD水平均低于对照组，差异也有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1　高脂饮食4周后各组大鼠血清血脂及超氧化物歧化酶水平

注：与正常对照组相比,*P<0.01；与模型对照组相比,△P<0.01

2酸柏栀油软胶囊对高脂血症大鼠血脂和血清总超氧化物歧化酶的影响造模成功后，分别给予辛伐他汀、高、中、低酸柏栀油软胶囊干预5周后，腹腔麻醉(麻醉方法同上)，腹主动脉采血测定各组大鼠血清中血脂及总超氧化物歧化酶水平，可见酸柏栀油软胶囊降低高脂血症大鼠血清TC、LDL-C、HDL-C)和TG水平，升高血清T-SOD，其中高剂量酸柏栀油软胶囊组降低血清TC效果好于辛伐他汀组，但差异无统计学意义(P>0.05)；高剂量酸柏栀油软胶囊组降低LDL-C和血清TG水平与辛伐他汀组相当，中剂量和低剂量酸柏栀油软胶囊组降低LDL-C和血清TG水平则不如辛伐他汀，差异也有统计学意义(P<0.01)；高剂量酸柏栀油软胶囊组升高血清T-SOD水平高于辛伐他汀组，中、低剂量酸柏栀油软胶囊组则低于辛伐他汀组，但差异无统计学意义(P>0.05)。

表2　酸柏栀油软胶囊对高脂血症大鼠血脂和血清总超氧化物歧化酶的影响

注：与正常对照组相比,*P<0.01；与模型对照组相比,△P<0.05，▲P<0.01；与阳性对照组相比,#P<0.05，□P<0.01

讨论

高脂血症是动脉粥样硬化(Atheroslerosis, AS)发生的主要危险因素之一，也是诱发心脑血管疾病的重要因素，血清中TC、TG和LDL-C含量升高， HDL-C含量降低，可导致动脉内膜损伤，血管通透性增高，加速脂质在血管内皮下沉积，诱发粥样斑块形成；而血脂升高时，氧自由基大量产生，脂质过氧化作用增强，产生大量的丙二醛(Malondialdehyde, MDA)，使SOD 活性降低，促进AS的发生和发展[5]。

本实验采用高脂饮食，建立高脂血症大鼠模型，经过酸柏栀油软胶囊干预，观察酸柏栀油软胶囊对高脂血症大鼠血脂和血清SOD水平影响。经过4周的高脂饲料喂养，SD大鼠血清TC、LDL和HDL水平高于对照组，而血清TG和SOD水平低于对照组，差异有统计学意义，与谢文鸿[6]、Yanagita[7]研究结果一致。王玉明等[8]研究发现，添加胆固醇饲料喂养大鼠，其肝脏胆固醇酯化酶(ACAT)和胆固醇异化的限速酶-7α-羟化酶基因表达增高，而胆固醇合成的关键酶-羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA reductase)活性明显下降，降低了高胆固醇饮食大鼠肝脏胆固醇水平，并增加(Cholesterol ester，CE)的合成，优先向分泌的极低密度脂蛋白(Very low density lipoprotein，VLDL)内填充胆固醇酯CE，相对减少了TG的充填，使肝外转移的TG减少，可能导致血液中TG降低，而肝脏内TG蓄积。血浆内高TG和高LDL水平，使大鼠体内过氧化损伤作用增强，黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶活性增加产生大量氧自由基，而体内的抗氧化系统清除大量的氧自由基，而不断消耗。因此，高脂饮食大鼠血清T-SOD水平低于对照组，说明本次实验造模成功。

高脂血症大鼠，经酸柏栀油软胶囊干预5周后，血清TC、LDL-C、HDL-C和TG水平降低，血清T-SOD水平升高；并且高剂量组降低血清TC效果好于辛伐他汀组，但差异无统计学意义；高剂量组降低LDL-C和TG作用与辛伐他汀组相当，中剂量和低剂量组则不如辛伐他汀，差异有统计学意义；高剂量组升高血清T-SOD水平高于辛伐他汀组，中、低剂量组则低于辛伐他汀组，但差异无统计学意义；高、中、低剂量酸柏栀软胶囊降低血清TC、LDL-C和TG作用，随剂量增加而增加，高剂量组效果最好，差异有统计学意义；其升高血清T-SOD作用，也随剂量增加而增加，但差异无统计学意义；而酸柏栀油软胶囊却降低血清HDL-C，且随剂量增加作用更加明显。酸柏栀油软胶囊的主要成分为油酸、亚油酸和亚麻酸等不饱和脂肪酸和维生素E[1]，其中油酸[9]属十八碳一烯酸，不饱和键的位置在甲基端的第九位，属于ω-9不饱和脂肪酸；亚油酸[10](Linoleic acid；18：2 ω-6)是人体的一种必需脂肪酸(EFA)，属于18 碳多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFA)，有两个双键，第一个双键出现在甲基端的第六位，称为ω-6多不饱和脂肪酸。亚麻酸[10](Linolenic acid，LA，C18：3)也是人体的一种必需脂肪酸(EFA)，属于18碳多不饱和脂肪酸，包含三个双键，有两个同分异构体：α-亚麻酸(ALA)和γ-亚麻酸(GLA)。α- 亚麻酸(ALA)是ω-3脂肪酸的典型代表，在人体内可以合成其他的ω-3多不饱和脂肪酸(EPA、DHA)；GLA 是ω-6 多不饱和脂肪酸，是合成花生四烯酸(Arachidonic acid，ARA)的前体；油酸作为不饱和脂肪酸的一员，能够缓解饱和脂肪酸引起的细胞毒性[11]，但是也可以引起细胞的氧化损伤与胰岛素抵抗[12-13]。多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFA)，是人体的必须营养成分之一，既能为机体提供能量，又是细胞内膜的重要组成成分，其中ω-3、ω-6多不饱和脂肪酸还可影响血脂代谢。据文献报道，ω-3型多元不饱和脂肪酸能够通过调控LDL-C受体mRNA水平而调节LDL-C受体活性；二十碳五烯酸(Eicosa pntemacnioc acid，EPA)、二十二碳六烯酸(Docosa hexaenoic acid, DHA)可使LDL-C受体活性增加，减少LDL-C受体在血液中水平，并促进LDL-C受体向HDL-C转化；同时，EPA、DHA 通过抑制羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性，减少对食物中TC的吸收，增加TC在粪便中排泄从而降低TC水平[14]。维生素E作为氧自由基和单线氧的清除剂，是机体抗氧化系统中非酶促反应体系的重要组成成分。其可能通过可通过清除活性氧自由基、抑制细胞脂质氧化、减少细胞中H2O2诱导的DNA 损伤和打断脂质过氧化链式反应、抑制核酸内切酶的活化和促进受损DNA的清除[15]等途径清除脂质过氧化自由基，升高高脂血症大鼠SOD活性。酸柏栀油软胶囊一方面通过多不饱和脂肪酸降低高血脂大鼠血清TC、 LDL和TG水平，减少了氧自由基的产生，减弱了脂质过氧化作用，使SOD活性增加；另一方面，其含有47.6%维生素E，可清除脂质过氧化自由基，升高高脂血症大鼠SOD活性；而其降低高脂血症大鼠HDL水平可能是降低TC的继发效应，即血清TC越低，机体代偿性向肝脏转移TC需要HDL就越少，体内合成的HDL也就越少。

总之，酸柏栀油软胶囊具有降低高脂质血症大鼠血清TC、LDL、TG和升高SOD水平的作用，其具体作用机制还有待于进一步研究。

参考文献

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(收稿：2015-07-17)

Preliminary study on antioxidant activity of soft capsule of compound oil of jujube，arboruitae，and gardenia

Medical College of Yan’an University(Yan’an 716000)

Zhang ZhengxiangFu JiatingJing Donghua et al

ABSTRACTObjective:To investigate the antioxidant effects of soft capsule of compound oil of jujube，arboruitae，and gardenia. Methods: The 60 SD rats were randomly assigned to normal control group，model control group, high, medium and low SCCOJAG group and simvastatin group. A normal diet was given to the control group and a high fat diet was given to other groups. After 4 weeks，the level of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) in serum were determined by the automatic biochemical analyzer for orbital blood sampling. After the establishment of the model of hyperlipidemia rats，other groups were administered in the dose of 1ml / 100g every 9:00 a.m. according to the gavage method except for the control group; model control group was given normal saline，the positive control group received simvastatin (0.3 mg / 100g)，high dose group given SCCOJAG (0.45g/ 100g)， middle dose group given acid SCCOJAG 0.18g/100g，low dose group given SCCOJAG 0.072g/100g. After 5 weeks, the abdomen was anaesthetized with chloral hydrate, the abdominal aortic blood sampling was collected to determine the levels of plasma TG,TC,HDL,LDL and total superoxide dismutase (T-SOD).Results: After high fat diet for 4 weeks ，plasma TC,HDL and LDL levels of the rats with high fat diet were higher than those in the control group(P<0.05)，and TG levels were lower than those in the control group (P<0.05). After 5 weeks' intervention，SCCOJAG could reduce serum TC of the rats with hyperlipidemia, elevated serum levels of T-SOD (P< 0.01)；High dose group decreased low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and TG levels (P< 0.05).Conclusion: SCCOJAG can reduce the blood lipid of hyperlipidemia rats and elevated serum TSOD in rats with hyperlipidemia..

KEY WORDS@Soft capsule of compound oil of jujube , arboruitae and gardeniaHyperlipidemiasModels,animalAntioxidants Rat

【中图分类号】R392.5

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.03.004

*国家级大学生创新训练计划项目(201210719014)

延安大学专项科研基金项目(YD2008-44)

△延安大学附属医院