山菠菜多糖对长时间大强度运动大鼠铁代谢的影响及分子机制研究

曲 申，邹晓峰，刘英伟

（吉林大学体育学院，吉林长春130024）

山菠菜多糖对长时间大强度运动大鼠铁代谢的影响及分子机制研究

曲 申，邹晓峰，刘英伟

（吉林大学体育学院，吉林长春130024）

为了探讨补充山菠菜多糖对长时间大强度运动大鼠铁代谢的影响及可能的分子机制，选取30只SD大鼠分为对照组（C组）、运动组（E组）和运动＋干预组（EI组），利用跑台运动构建长时间大强度运动大鼠模型。从跑台运动第3周起，大鼠用100 mg／kg的山菠菜提取物悬浊液每天灌服2 m l，灌服3周后测定其血清Hepcidin、TF和铁状态，实时荧光定量PCR技术检测肝脏组织中TGF-β1、BMP-2和Smad4基因表达，Western blot法检测肝脏组织中IL蛋白和JAK／STAT信号通路蛋白表达。结果：与E组相比，补充山菠菜多糖能够有效降低血清Hepcidin和TF，改善机体铁缺乏状态，差异有统计学意义（P＜0.05），补充山菠菜多糖可有效抑制TGF-β1／BMP／Smad信号通路，也可通过降低肝脏组织中IL-6蛋白表达，而抑制JAK／STAT信号通路蛋白活性，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：补充山菠菜多糖可通过抑制TGF-β1／BMP／Smad信号通路及IL-6介导的JAK／STAT信号通路而减少Hepcidin表达，改善长时间大强度运动大鼠铁缺乏状态。

山菠菜多糖；铁代谢；铁调素；TGF-β1／BMP／Smad信号通路；JAK／STAT信号通路

1 问题的提出

铁作为机体必不可少的微量营养素，在调控基因表达、蛋白合成、细胞免疫、红细胞生成、氧气运输等多种生理过程中发挥重要作用［1］。正常生理情况下，机体铁维持平衡，当体内出现铁储备不足时，直接影响机体氧气运输及能量代谢，易出现运动性疲劳，使运动耐力降低［2］。由于运动过程中，尤其是长时间大强度的运动，会有出汗、红血球溶解、胃肠道出血、血尿等伴发症，导致运动者易出现铁缺乏症。有研究指出［3］铁缺乏症在运动员（尤其是女性）中高发，从事不同项目的运动员发病率约为23%～38%，赛季期间甚至更高。铁缺乏症若不能得到很好的治疗，会引发缺铁性贫血，给运动员锻炼带来极大的危害［4］。

铁调素（Hepcidin）作为调节铁代谢的关键性因子，在维持体内铁稳态中发挥关键性调控作用。研究表明［5］抑制Hepcidin表达可促进肠道吸收铁，促使结合铁释放而改善机体缺铁状态。有研究指出［6］Smad4和JAK／STAT是调控肝细胞中Hepcidin表达的重要通路。山菠菜多糖是从山菠菜中提取的物质，具有较好的止血、补血功能，也可辅助治疗铁缺乏症，但具体作用机制尚不清楚。本研究通过构建长时间大强度运动大鼠模型，给予补充山菠菜多糖干预，观察其在改善大鼠铁缺乏症中的意义及相关分子作用机制，以期为实际工作提供基础资料。

2 材料与方法

2.1 研究材料

2.1.1 动物 4周龄雄性SD大鼠30只，体重120～140 g，均无训练运动史，购自河南省试验动物中心，合格证号SCXK（豫）2011-0003，于吉林大学实验动物中心饲养。

2.1.2 药物 研究所需山菠菜提取物（多糖含量约43%）购自西安森冉生物工程有限公司。使用时按照100 mg／kg的剂量将山菠菜提取物配制成悬浊液，现用现配。

2.1.3 试剂盒 Hepcidin ELISA试剂盒（厦门慧嘉生物科技有限公司）；转铁蛋白（TF）试剂盒（上海信裕生物科技有限公司）；血清铁（SI）检测试剂盒、不饱和铁结合力（UIBC）诊断试剂盒和总铁结合力（TIBC）测定试剂盒（上海江莱生物科技有限公司）；TGF-β1、BMP-2和Smad4及内参引物（生工生物工程（上海）股份有限公司）；Trizol总RNA提取试剂盒（美国invitrogen公司）；逆转录试剂盒和PCR试剂盒（宝生物工程（大连）有限公司）；山羊抗大鼠IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3单克隆抗体（上海依科赛生物制品有限公司）；ECL发光检测试剂盒（上海索莱宝生物科技有限公司）。

2.1.4 仪器 实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）；台式低温高速离心机（德国Hettich公司）；普通型离心机（北京医用离心机厂）；Western blot实验设备（北京六一仪器厂）。

2.2 实验方法

2.2.1 动物分组 利用随机数字表将所有大鼠随机分为3组：对照组（C组）、运动组（E组）和运动＋干预组（EI组），每组各10只。分笼喂养，每笼5只，自然光照，自由饮食饮水，室温22～24℃，相对湿度45%～55%，保持笼内干燥。从第3周起，EI组大鼠每天18：00用灌胃器口腔灌服1次，每次2 m l，C组和E组均给予等量的生理盐水灌服［7］。

2.2.2 训练方案 E组和EI组大鼠连续进行6周跑台运动，坡度0，速度20 m／min，每周运动6 d，休息1 d；前2周作为适应性运动阶段，每天运动1次，后4周每天运动2次，上午和下午各1次，运动第1 d运动1 min，以后每次增加2 min，最后一天最后1次运动107 min［7］。

2.2.3 取材及指标测定 大鼠于最后1次运动后休息24 h，处死前12 h禁食，用乌拉坦（3 ml／kg）腹腔注射麻醉，达到预期麻醉效果后，经腹主动脉取血标本2份，一份于室温下静置30 min，用高速离心机于12000 rpm／min离心15 min，取血清，另一份加入含促凝剂的促凝管中，于室温下3500 rpm／min离心15 min，取血清，用于血清铁状态检测，均保存于－20℃冰箱以备检。打开大鼠胸腔，用DEPC配制的生理盐水从大鼠升主动脉快速灌流以去除肝脏内血液，将肝脏取下后用生理盐水漂洗，保存于－80℃冰箱中以备检。①大鼠血清Hepcidin和TF检测：利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中Hepcidin和运铁蛋白（Tf）浓度。②大鼠血清铁状态检测：利用ELISA法对大鼠血清SI、UIBC和TIBC浓度进行检测。③肝脏组织TGF-β1／BMP／Smad信号通路基因检测：利用实时荧光定量PCR技术对肝脏组织中TGF-β1、BMP-2和Smad4基因表达进行检测。肝脏组织研磨后，加入细胞裂解液裂解，用Trizol总RNA提取试剂盒对组织中总RNA进行提取，并检测纯度，取A260／A280≥1.80标本完成后续实验。利用逆转录试剂盒进行逆转录获得模板单链cDNA，以cDAN为模板用PCR试剂盒完成PCR。TGF-β1、BMP-2和Smad4及内参引物：TGF-β1引物：上游：5’-CTGATAGCGCTGAGTGGCTGT-3’，下游：5’-GTAGTAGACGATGGGCGATGG-3’；BMP-2引物：5’-GTCCTCAGCGAGTTTGAGTTG-3’，下游：5’-GACACCTGGCTTCTCCTCTAAGT-3’；Smad4引物：上游：5’-ACAGACAAGGTGGAGAGAGTGAG-3’，下游：5’-GTGGTACTGGTGGCATTAGACTC-3’；GAPDH内参引物：上游：5’-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3’，下游：5’-GGGGTCGTTGATGGCAACA-3’。PCR反应条件：94℃60s，92℃45s，56℃30s，74℃30s，连续进行38次循环，每个样品均设置3个平行反应复孔。用2-△△Ct法获得肝脏组织中TGF-β1、BMP-2和Smad4基因表达量。④肝脏组织IL-6蛋白和JAK／STAT信号通路蛋白检测：利用Western blot法检测肝脏中IL-6蛋白、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达。将肝脏组织研磨后，加入细胞裂解液裂解，用总蛋白提取试剂盒提取总蛋白，用BCA法对蛋白定量。取50μg总蛋白用SDS-PAGE凝胶电泳后，电转移至PVDF膜上，用含5%脱脂奶粉的TBST于4℃条件下封闭120 min，分别将各目标蛋白单克隆抗体（1：800或1：15 000）稀释后加入，4℃下孵育过夜，用TBST冲洗3次，加入HRP标记二抗（1：2000稀释），孵育4 h，用ECL发光检测试剂盒显色，利用Quantity One条带分析软件分析JIL-6、、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量。

2.3 统计处理

所有实验数据利用SPSS 21.0统计分析软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，P＜0.05差异具有统计学意义。

3 研究结果与分析

3.1 长时间大强度运动及补充山菠菜多糖对大鼠血清Hepcidin、TF和铁状态的影响

长时间大强度运动及补充山菠菜多糖多大鼠血清Hepcidin、TF和铁状态的影响见表1。Hepcidin作为维持机体铁稳态的枢纽性小分子肽类激素，主要由肝细胞合成，其作用机制［8］：一方面可通过作用于肠道刷状缘上皮细胞，增强细胞内吞作用而使铁通道蛋白被内吞降解，从而使肠道对食物中的铁吸收减少；另一方面可直接作用于肝脾单核－网状内皮细胞的铁通道蛋白而减少单核－网状内皮系统中储存铁的释放，从而减少机体铁水平。有研究指出［9］，机体中Hepcidin水平不足或出现铁通道蛋白异常时，均可导致高铁状态的产生。因此，Hepcidin异常表达常是引发铁代谢失衡的中心性环节。Tf作为一种糖蛋白，主要由肝脏产生，可与铁可逆性结合，运输铁到红细胞生成部位合成血红蛋白或运输到其他部位参与生理代谢，游离Tf增高，是体内铁缺乏的标志［10］。研究结果显示，长时间大强度运动可引起大鼠血清Hepcidin水平显著升高，而高水平的Hepcidin可抑制肠道对铁的吸收，同时减少单核－网状内皮细胞中储存铁向血清释放，从而使血清TF升高，使机体处于铁缺乏状态。

山菠菜多糖是从山菠菜叶子中提取的多糖类物质，具有健脾补血、补气止血之功效［11］。本研究结果显示，长时间大强度运动大鼠补充山菠菜多糖后，血清Hepcidin水平较长时间大强度运动组大鼠显著降低，而Hepcidin水平降低可增加小肠上皮细胞及单核－网状内皮细胞中铁通道蛋白的表达［12］，从而加速肠道对铁吸收及储存铁的释放，使血清TF水平降低，小鼠铁缺乏状态得到改善，说明补充山菠菜多糖可有效改善长时间大强度运动大鼠铁缺乏状态，与降低Hepcidin表达有关。

表1 3组大鼠血清Hepcidin、TF和铁状态比较

表1 3组大鼠血清Hepcidin、TF和铁状态比较

注：表中数据为平均值±标准差，与C组相比，*P＜0.05；与E组相比，＃P＜0.05。表2、表3同。

组别Hepcidin（μg／l）TF（nmol／l）SI（mg／l）UIBC（mg／l）TIBC（mg／l ）C组118.21±13.83 101.57±10.72 5.21±0.98 4.12±0 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 .58 9.21±1.38 E组158.72±11.64*129.84±12.31*3.06±0.31*2.71±0.42*5.69±0.61*EI组129.95±12.14*＃114.42±10.14*＃4.11±0.79*＃3.44±0.49*＃7.51±1.25*＃F 22.151 17.275 44.767 25.119 20.992 P

3.2 长时间大强度运动及补充山菠菜多糖对大鼠肝脏TGF-β1／BMP／Smad信号通路的影响

长时间大强度运动及补充山菠菜多糖对大鼠肝脏TGF-β1／BMP／Smad信号通路的影响见表2。Hepcidin作为机体铁状态重要的负性调控因子，与机体铁状态密切相关，Smad4是介导Hepcidin调控通路中的关键性上游信号因子［13］。研究表明［14］，在由Smad蛋白介导的信号通路中，TGF-β1和 BMP-2在与各自受体结合而活化后，可使Smad2和Smad3磷酸化而与Smad4结合，形成共同的复合体而调控相关基因表达发挥生物学作用。有研究指出［15］，BMP-SMADs信号通路可调控肝脏中Hepcidin表达、转录。实验结果显示，长时间大强度运动会导致TGF-β1、BMP-2和Smad4蛋白表达上调（P＜0.05）（图1），使Hepcidin表达增加，从而通过抑制小肠铁吸收、巨噬细胞铁释放及肝铁动员负性调控机体铁稳态［16］。

图1 3组大鼠肝脏组织中TGF-β1／BM P／Smad信号通路蛋白表达

实验中发现，在给长时间大强度运动补充山菠菜多糖后，肝脏组织中TGF-β1、BMP-2和Smad4表达量较长时间大强度运动大鼠显著降低（P＜0.05），说明补充山菠菜多糖可抑制TGF-β1、BMP-2和Smad4表达，提示山菠菜多糖可能通过抑制TGF-β1／BMP／Smad信号通路而降低肝脏组织中Hepcidin表达，从而使机体铁稳态得以恢复。

表2 3组大鼠肝脏组织中TGF-β1／BM P／Smad信号通路蛋白表达比较

表2 3组大鼠肝脏组织中TGF-β1／BM P／Smad信号通路蛋白表达比较

组别TGF-β 1.11±0.08 1.09±0.11 1.07±0.07 E组2.34±0.12*1.52±0.13*1.57±0.09*EI组1.57±0.15*＃1.32±0.12*＃1.26±0.11*＃F 407.158 24.627 65.796 P 1 mRNA BMP-2 mRNA Smad4 mRNA C组0.000 0.000 0.000

3.3 长时间大强度运动及补充山菠菜多糖对大鼠肝脏JAK／STAT信号通路的影响

长时间大强度运动及补充山菠菜多糖对大鼠肝脏JAK／STAT信号通路的影响见表3。目前，关于Hepcidin表达的调控机制研究较多，肝细胞中Hepcidin表达调控过程较为复杂，研究认为［17］，JAK／STAT、HJV-BMP／SMAD、EPOR-C／EBPα、BMP／SMAD和ERK 4条信号传导通路均参与了肝脏产生Hepcidin的过程。研究表明［18］，长时间大强度运动会诱导肝脏内质网应激和炎性损伤。本研究结果显示，E组大鼠肝脏组织中IL-6蛋白表达量显著增高，提示长时间大强度运动会导致大鼠炎性反应增强。

研究发现［19］IL-6等炎性因子可刺激Hepcidin表达。当机体处于炎症刺激状态时，IL-6会大量产生，与其受体IL-6R结合到gp130分子区域，会引发gp130二聚体化，从而使JAK激酶被活化，加速胞内STAT3磷酸化而使STAT3二聚体加速产生，STAT3二聚体又可转移至胞核，与相应区域结合而促使Hepcidin表达［20］。本研究结果显示，E组大鼠出现JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达升高（图2），说明长时间大强度运动大鼠肝脏中JAK／STAT信号通路被激活，提示长时间大强度运动导致IL-6大量表达，其通过激活JAK／STAT信号通路而增加了Hepcidin表达。刘涛方等［21］研究发现，用山菠菜汁制备酸乳具有抗炎、抗氧化的功效。本研究采用补充山菠菜多糖的方式进行干预，结果显示，补充山菠菜多糖可减少肝脏组织中IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达，提示山菠菜多糖可能通过抑制肝脏炎症反应而减少IL-6表达，从而抑制JAK／STAT信号通路激活，最终导致Hepcidin表达减少。同时，也有研究指出［22］各信号传导通路在调控肝脏组织产生Hepcidin时并不是孤立的，炎性因子IL-6介导JAK／STAT信号通路对Hepcidin的调节依赖于完整的BMP／SMAD信号通路，抑制SMAD4活性会减少IL-6对Hepcidin的上调作用。王金霞等［7］研究发现，补充山菠菜多糖可通过抑制SMAD4信号通路而减少Hepcidin表达，从而改善长时间大强度训练大鼠铁缺乏状态。我们推测，长时间大强度运动导致Hepcidin表达增加，可能是受肝组织中多条信号通路相互作用的结果，山菠菜多糖减少Hepcidin表达，亦是通过调控多条信号通路而实现的。

图2 3组大鼠肝脏组织中IL-6蛋白和JAK／STAT信号通路蛋白表达

表3 3组大鼠肝脏组织中IL-6蛋白和JAK／STAT信号通路蛋白表达比较

表3 3组大鼠肝脏组织中IL-6蛋白和JAK／STAT信号通路蛋白表达比较

组别2±0.14 E组2.15±0.17*1.61±0.11*1.53±0.08*1.58±0.07*1.49±0.06*EI组1.42±0.12*＃1.24±0.14*＃1.17±0.13*＃1.79±0.11*＃1.68±0.07*＃F 165.491 40.907 44.262 35.270 56.684 P IL-6 JAK2 p-JAK2 STAT3 p-STAT3 C组1.08±0.09 1.03±0.16 1.05±0.21 1.06±0.15 1.0 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

4 结论

将山菠菜多糖作为补充，对长时间大强度运动的大鼠进行定量补充，结果显示长时间大强度运动可增加大鼠血清Hepcidin和Tf水平，使机体处于铁缺乏状态，而补充山菠菜多糖则可有效降低长时间大强度运动大鼠血清Hepcidin和Tf水平，改善机体铁缺乏状态，其机制与阻断肝组织中TGF-β1／BMP／Smad信号通路和IL-6介导的JAK／STAT信号通路而抑制Hepcidin表达有关。

［1］Peyrin-Biroulet L，Williet N，Cacoub P.Guidelines on the diagnosis and treatment of iron deficiency across indications：a systematic review［J］.Am J Clin Nutr，2015，102（6）：1585－1594.

［2］Gunawardena S，Dunlap ME.Anemia and iron deficiency in heart failure［J］.Curr Heart Fail Rep，2012，9（4）：319－327.

［3］McClung JP.Iron status and the female athlete［J］.JTrace Elem Med Biol，2012，26（2－3）：124－126.

［4］Peyrin-Biroulet L，Williet N，Cacoub P.Guidelines on the diagnosis and treatment of iron deficiency across indications：a systematic review［J］.Am J Clin Nutr，2015，102（6）：1585－1894.

［5］范斯斌，郑以州，施均.Hepcidin调控铁稳态分子机制及其靶向治疗铁代谢失衡［J］.中华血液学杂志，2015，36（11）：977－980.

［6］Foka P1，Dimitriadis A，Kyratzopoulou E，et al.A complex signaling network involving protein kinase CK2 is required for hepatitis C virus core protein-mediated modulation of the iron-regulatory Hepcidin gene expression［J］.Cell Mol Life Sci，2014，71（21）：4243－4258.

［7］王金霞，刘玉倩，常丽新，等.补充山菠菜多糖对长时间大强度运动大鼠肝SMAD4、铁调素和肾促红细胞生成素表达的影响［J］.中国运动医学杂志，2014，33（1）：47－51.

［8］Vermeulen E，Vermeersch P.Hepcidin as a biomarker for the diagnosis of iron metabolism disorders：a review［J］.Acta Clin Belg，2012，67（3）：190－197.

［9］Andrews M，Soto N，Arredondo-Olguín M.Association between ferritin and Hepcidin levels and inflammatory status in patients with type2 diabetes mellitus and obesity［J］.Nutrition，2015，31（1）：51－57.

［10］Voth B，Nagasawa DT，Pelargos PE，et al.Transferrin receptors and glioblastoma multiforme：Current findings and potential for treatment［J］.J Clin Neurosci，2015，22（7）：1071－1076.

［11］沈潘潘，常丽新，张会宜，等.响应面优化微波法提取山菠菜多糖的工艺及不同采摘期多糖含量的测定［J］.食品工业科技，2012，33（24）：334－338.

［12］Wallace DF，Harris JM，Subramaniam VN.Functional analysis and theoretical modeling of ferroportin reveals clustering of mutations according to phenotype［J］.Am J Physiol Cell Physiol，2010，298（1）：C75－84.

［13］Tang Y，Li Y，Yu H，et al.Quercetin prevents ethanol-induced iron overload by regulating Hepcidin through the BMP6／SMAD4 signaling pathway［J］.J Nutr Biochem，2014，25（6）：675－682.

［14］Zhang C，Wang L，Wang H，et al.Identification and characterization of functional Smad8 and Smad4 homologues from Echinococcus granulosus［J］.Parasitol Res，2014，113（10）：3745－3757.

［15］Wu XG，Wang Y，Wu Q，et al.HFE interacts with the BMP type I receptor ALK3 to regulate Hepcidin expression［J］.Blood，2014，124（8）：1335－1343.

［16］Koenig MD，Tussing-Humphreys L，Day J，et al.Hepcidin and iron homeostasis during pregnancy［J］.Nutrients，2014，6（8）：3062－3083.

［17］常春康，张曦，肖超，等.铁调素的表达与调节机制研究进展［J］.中国实验血液学杂志，2012，20（4）：1030－1033.

［18］李娟.剧烈运动诱导小鼠肝脏内质网应激介导的炎症损伤及槲皮素的干预［D］.武汉：华中科技大学，2014.

［19］Badenhorst CE，Dawson B，Cox GR，et al.Timing of post-exercise carbohydrate ingestion：influence on IL-6 and Hepcidin responses［J］.Eur J Appl Physiol，2015，115（10）：2215－2222.

［20］Mleczko-Sanecka K，Roche F，da Silva AR，et al.Unbiased RNAi screen for Hepcidin regulators links Hepcidin suppression to proliferative Ras／RAF and nutrient-dependent mTOR signaling［J］. Blood，2014，123（10）：1574－1585.

［21］刘涛方，蔡娜娜，郭海鹏，等.山菠菜酸乳的研制及抗氧化性研究［J］.唐山师范学院学报，2014，36（2）：55－58.

［22］Qian ZM，He X，Liang T，et al.Lipopolysaccharides upregulate Hepcidin in neuron via microglia and the IL-6／STAT3 signaling pathway［J］.Mol Neurobiol，2014，50（3）：811－820.

责任编辑：郭长寿

Effect of Atriplex Hortensis Polysaccharide on Iron Metabolism in Rats During Prolonged Strenuous Exercise and Molecular Mechanism

QU Shen，ZOU Xiaofeng，LIU Yingwei
（Physical Education College，Jilin University，Changchun 130024，Jilin，China）

In order to investigate the effect of atriplex hortensis polysaccharide on iron metabolism in rats during prolonged strenuous exercise and the possible molecular mechanism.30 SD rats were divided into the control group（group C），exercise group（E group）and exercise＋intervention group（EI group）.The prolonged strenuous exercise rat models were constructed by using treadmill training.In the third week of treadmill training，the rats were gavaged by using 100 mg／kg of atriplex hortensis polysaccharide suspension 2 m l per day.The serum Hepcidin，TF and iron status were tested.The expressions of TGF-β1，BMP-2 and Smad4 genes in liver tissues were detected by using real-time PCR technology.The expressions of IL-6 protein and JAK／STAT signaling pathway proteins in liver tissue were detected by using Western bolt. The results showed that compared with the E group，supplement of atriplex hortensis polysaccharide could effectively reduce serum Hepcidin and TF and improve the body＇s iron deficiency states，which the differences were statistically significant（P＜0.05）.Supplementary atriplex hortensis polysaccharide could inhibit TGF-β1／BMP／Smad signaling pathway，and inhibit the activities of JAK／STAT signaling pathway proteins by reducing the expression of IL-6 protein in liver tissue，which the differences were statistically significant（P＜0.05）.The conclusions indicated that supplement of atriplex hortensis polysaccharide could inhibit TGF-β1／BMP／Smad signaling pathway and IL-6 mediated JAK／STAT signaling pathway to reduce the expressions of Hepcidin，so as to improve the iron deficiency states in rats during prolonged strenuous exercise.

atriplex hortensis polysaccharide；iron metabolism；hepcidin；TGF-β1／BMP／Smad signaling pathway；JAK／ STAT signaling pathway

G804.32

A

1004－0560（2016）05－0063－05

2016-08-12；

2016-09-14

吉林省发改委产业技术研究与开发项目（2016C055－3）。

曲 申（1994—），男，硕士研究生，主要研究方向为体育教学与训练。

刘英伟（1974—），男，副教授，硕士，主要研究方向为体育统计学和运动人体科学。