10种杀菌剂对橡胶树白根病菌的毒力测定

贺春萍 李锐 吴伟怀 吴海理 郑肖兰 梁艳琼 郑金龙 易克贤 习金根

摘 要 为了筛选有效防治药剂，在室内采用菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂原药对橡胶树白根病菌的室内毒力。结果表明：戊唑醇、腈菌唑、丙环唑、抑霉唑、三唑酮、咪鲜胺、嘧菌酯、十三吗啉8种药剂对橡胶树白根病菌均具有较高的敏感性，抑菌效果较好，其EC50在0.017 7～6.013 6 μg/mL，其中戊唑醇的毒力最强，EC50为0.017 7 μg/mL；腈菌唑、丙环唑、抑霉唑的抑制作用较强，其EC50分别为0.027 8、0.045 6和0.077 3 μg/mL。甲基托布津抑菌效果最差，EC50为41.299 0 μg/mL。

关键词 橡胶树 ；白根病菌 ；杀菌剂 ；毒力测定

分类号 S482.2 Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.02.014

Evaluation of Ten Fungicides for Suppression of Rigidoporus lignosus

HE Chunping1） LI Rui1） WU Weihuai1） WU Haili2）

ZHENG Xiaolan1） LIANG Yanqiong1） ZHENG Jinlong1） YI Kexian1） XI Jingen1）

（1 Environment and Plant Protection Institute / Ministry of Agriculture Key Laboratory

of Integrated Pest Management on Tropical Crops / Hainan Key Laboratory for Monitoring

and Control of Tropical Agricultural Pests， CATAS， Haikou， Hainan 571101， China

2 College of Environment and Plant Protection，Hainan University， Haikou， Hainan 570228， China）

Abstract White root disease caused by Rigidoporus lignosus is a major killer of young replanted rubber in foreign countries， and is the entry plant quarantine disease in China. In order to better realize this disease and to control it， toxicity test of 10 fungicides to Rigidoporus lignosus were tested in vitro. The results showed that the toxicity of tebuconazole， mycolbutanil， propiconazole， imazalil， triadimefon， prochloraz， azoxystrobin and tridemorph were effective in reducing the mycelia growth， with EC50 in the range of 0.0177～6.0136 μg/mL； that for tebuconazole was most effective， EC50 was 0.0177 μg/mL； followed by mycolbutanil， propiconazole and imazalil. EC50 was 0.0278 μg/mL， 0.0456 μg/mL and 0.0773 μg/mL respectively. And that for thiophanate-methyl was the worst， with EC50 was 41.2990 μg/mL.

Keywords rubber tree ； Rigidoporus lignosus ； fungicide ； toxicity

橡胶树白根病[Rigidoporus lignosus（Klotzsch） Imaz.]是一种世界性病害，该病于1904年在新加坡首先发现，后在马来西亚、印尼（爪哇、苏门答腊）、泰国、印度、斯里兰卡、柬埔寨、缅甸、科特迪瓦、尼日利亚、刚果、加蓬等地发生[1]。橡胶树白根病主要为害幼龄期橡胶树[2]。在植胶前、后未进行预防处理的幼树区，其发病率可达60%[3]。橡胶树白根病是我国的进境植物检疫性病害，在东南亚橡胶植胶区曾造成过严重损失[4-5]。1983年11月，我国在海南东太农场橡胶林段中首次发现白根病，发病面积达26 hm2，因发现及时已铲除[6]，直至1992年我国才有该病危害橡胶的报道[4]。白根病菌不仅侵害橡胶树，还可侵染热带地区的许多林木、果树等作物，如柑桔、茶、椰子、胡椒、咖啡、可可、槟榔、菠萝蜜、油棕、樟树、木薯、鱼藤、竹、豆科遮荫树及覆盖作物等，至今仍是植胶国的一个极严重的问题[7]。防治橡胶树白根病一直以来主要是采取化学药剂灌根处理。国外60年代始，珀里斯[8]、马来亚橡胶研究所[9]、Tran Van Canh[10]、Gustav Hiepko[11]等对橡胶树白根病进行了防治技术方面的研究。珀里斯研究报道，化学药剂Tillex不能完全抑制橡胶树白根病菌，清除橡胶树白根病病源营养基地是处理病树的主要措施；马来亚橡胶研究所研究表明Formaac 2和Fomicide药剂可作为防治白根病的根颈保护剂；Tran和Gustav Hiepko研究表明，十三吗啉对橡胶树白根病有良好的防效。国内有关橡胶树白根病菌的室内药剂毒力测定报导甚少，仅陈照等[2]2007年测定了12种市售内吸性杀菌剂对橡胶树白根病菌的敏感性，研究结果表明，以烯效唑为主的三唑类杀菌剂对橡胶树白根病菌有较好的抑制作用。本研究为了能够寻找到更高效、安全、低成本的橡胶树白根病防治药剂，测定了10种杀菌剂原药对橡胶树白根病菌的室内毒力，了解不同杀菌剂对白根病菌的敏感性，分析不同药剂浓度对菌株菌落生长速度的影响，以便为生产上更好的预防、防治该病害提供科学的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源

橡胶树白根病菌菌株RL-001采自云南省河口县蚂蝗堡作业区那梭队，由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所特色热作病害课题组分离、鉴定与保存。

1.1.2 供试培养基

PDA培养基。

1.1.3 供试药剂

采用菌丝生长速率法先进行供试浓度的初步筛选，在进行预试验的基础上，确定各供试药剂最低的抑制质量浓度，配制6个质量浓度梯度含毒的PDA培养基平板。供试的杀菌剂种类、生产厂家及试验浓度范围见表1。

1.2 方法

1.2.1 杀菌剂抑菌效果测定

在无菌操作台上，将各供试药剂用无菌水配制成有效成分为5 000 μg/mL的母液，然后用无菌水稀释配置成6个不同浓度梯度的供试药液。用移液枪分别吸取2 mL药液与98 mL 融化的PDA培养基（温度50℃左右）混匀，后制成系列含药平板；加入等体积无菌水为空白对照。

将在PDA平板上培养3 d的参试菌株，用灭菌的打孔器在菌落边缘打取直径7 mm的菌饼，接种于含药的PDA平板中央，28℃培养。每处理5次重复。培养72 h后，待空白对照组菌落的直径长至培养皿直径2/3时，采用十字交叉法进行测量，计算菌落直径平均值和菌丝生长的抑制率。

生长抑制率（%）=[（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.7）]×100。

将抑制率换算为机率值，药剂的浓度换算成浓度对数，以设定的药剂浓度对数为横坐标，抑制机率值为纵坐标，利用Excel 软件求出各单剂EC50、EC95、毒力回归方程、相关系数以及斜率值。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂对橡胶树白根病菌EC50值的分析

供试的杀菌剂对橡胶树白根病菌菌丝生长的强弱与药剂浓度均呈正向相关。由表2可看出，戊唑醇、腈菌唑、丙环唑、抑霉唑、三唑酮、咪鲜胺、嘧菌酯和十三吗啉对供试橡胶树白根病菌菌株RL-001的菌丝生长具有显著抑制作用，EC50值较小，分别为0.017 7 、0.027 8、0.045 6、0.077 3、0.338 8、1.140 0、2.292 0和6.013 6 μg/mL，表现较敏感。相对而言，异菌脲和甲基托布津2种药剂对菌株RL-001的菌丝生长抑制稍弱，其EC50值为13.194 8和41.299 0 μg/mL。从表中可看出，10种供试的杀菌剂对橡胶树白根病菌的毒力均存在差异，其中戊唑醇的抑菌效果最好，其次为腈菌唑。

从10种杀菌剂对橡胶树白根病菌的EC50值来看， 10种供试药剂可分为3个类群，其中以戊唑醇、腈菌唑、丙环唑、抑霉唑和三唑酮5种杀菌剂EC50值最小，都小于1 μg/mL，抑菌效果最好；咪鲜胺、嘧菌酯和十三吗啉为第二类，其EC50值均介于1～10 μg/mL，抑菌效果较好；而异菌脲和甲基托布津，其EC50值较大，介于10～50 μg/mL，抑菌效果比第一、二类弱，归为第三类。

2.2 杀菌剂对橡胶树白根病菌EC95值的分析

由表2可知，戊唑醇的EC95值最小，仅为1.172 1 μg/mL；其次是腈菌唑和丙环唑，EC95值分别为1.552 8和4.007 2 μg/mL，二者的EC95值均小于10 μg/mL；抑霉唑、三唑酮、异菌脲、咪鲜胺的EC95值均小于100 μg/mL，EC95值分别为13.154 8、27.636 8、48.739 8和56.127 7 μg/mL；甲基托布津、嘧菌酯和十三吗啉的EC95值均高于300 μg/mL。从EC95值来看，异菌脲的抑菌作用强于咪鲜胺、嘧菌酯、十三吗啉，其抑菌结果排序与EC95值不一致，这主要是因为各药剂回归曲线斜率不同而导致。

2.3 橡胶树白根病菌对杀菌剂的敏感性

由表2可知，供试的10种药剂毒力回归曲线的斜率值均不同。回归曲线的斜率与病菌对杀菌剂的敏感性成正比。10种杀菌剂对橡胶树白根病菌菌株RL-001的斜率大小依次为：异菌脲>甲基托布津>咪鲜胺>腈菌唑>戊唑醇>丙环唑>三唑酮>抑霉唑>十三吗啉>嘧菌酯。对该菌敏感性较大的药效是异菌脲和甲基托布津，斜率值均大于1，其中异菌脲最高，为2.898 6，表明在供试的杀菌剂中，橡胶树白根病菌对这两种药剂最敏感；其次为咪鲜胺、腈菌唑和戊唑醇；敏感性较小的药剂为嘧菌酯和十三吗啉。10种药剂斜率值的最大差异（最高斜率值/最低斜率值）为5.37倍，表明橡胶树白根病菌对10种药剂的敏感性亦存在较大差异。

3 讨论

室内毒力测定中杀菌剂EC50值和EC95值越小、斜率越大，表明病菌对药剂的灵敏度越高，即随着供试药剂质量浓度的增加，抑制率会明显增大[13]。目前橡胶树根病的防治主要是采取挖沟隔离和化学防治的手段，其中药剂防治仍然是综合防治中的重要环节。目前国外学者主要是利用石灰、硫磺粉和十三吗啉等药剂来防治橡胶树白根病，同时结合挖沟隔离、农业栽培、高温暴晒土壤等防治措施。国内从60年代始生产上一直使用十三吗啉来防治根病，但该药剂昂贵，长期单一使用防效有所下降。本研究通过对橡胶树白根病菌的毒力测定，综合分析了10种杀菌剂对白根病菌的EC50值以及毒力回归方程斜率发现，戊唑醇、腈菌唑、丙环唑、抑霉唑、三唑酮、咪鲜胺、嘧菌酯和十三吗啉虽然斜率不如异菌脲、甲基托布津大，但它们的EC50值较小；其中戊唑醇、腈菌唑、丙环唑、抑霉唑和三唑酮的EC50值均小于1 μg/mL，咪鲜胺、嘧菌酯和十三吗啉的EC50值较小，也都具有较高的活性。三唑类杀菌剂、十三吗啉以及咪鲜胺均可抑制真菌细胞膜甾醇的生物合成，嘧菌酯则可抑制真菌线粒体呼吸而发挥抑菌作用。与此同时，异菌脲和甲基托布津虽然斜率较高，但EC50值较大，抑菌活性较小。导致以上研究结果可能与药剂的不同作用机理有关。

本研究采用农药原药来进行室内毒力测定，研究结果相对客观、准确。通过室内10种杀菌剂对橡胶树白根病菌的毒力测定，初步筛选出了戊唑醇、腈菌唑、丙环唑、抑霉唑、三唑酮等三唑类杀菌剂对橡胶树白根病菌有很强的抑菌效果，这与陈照[2]、LAM[14]、HOONG[15]等研究结果相吻合，且三唑类农药价格较低，有望作为十三吗啉的替代药剂应用于橡胶树白根病的防治。

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