低浓度甲醛对多肽和蛋白化学修饰的质谱研究

王子健 杨静波 李光谱 孙宁宁 孙万春 彭其胜 刘宁

摘 要 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI- TOF MS）和纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱（Nano-ESI -QTOF MS）技术，以标准肽段和流感病毒基质蛋白酶切肽段为模型，研究了甲醛对蛋白质和多肽主链的修饰作用。采用与实际病毒灭活过程一致的实验条件（4℃，0.025%（V/V）福尔马林（37%（w/w）甲醛溶液）处理72 h），进行甲醛与多肽的化学反应。结果表明，在实验条件下，甲醛能与标准肽段N端的氨基反应生成羟甲基加合物，再发生缩合反应生成亚胺，形成+12 Da的产物。此外，甲醛还能与标准肽段中的精氨酸、赖氨酸的侧链发生反应， 生成+12 Da的反应产物。对流感病毒基质蛋白的酶切肽段与甲醛的反应的质谱分析结果显示，多数的肽段都生成了+24 Da的产物，质量的增加来源于肽段N端氨基（+12 Da）和C端精氨酸或赖氨酸的侧链（+12 Da）的贡献。此外，还观察到有一个漏切位点的肽段生成了+36 Da的产物。本研究结果表明，在实验条件下，低浓度甲醛主要与肽段和蛋白的N 端氨基，以及精氨酸和赖氨酸侧链发生反应。本研究为分析低浓度甲醛与蛋白质的反应产物提供了有效的质谱分析方法和解谱依据。

关键词 甲醛；多肽；基质蛋白；化学修饰；质谱