无核葡萄胚挽救影响因素研究

霍岩

通常情况下，根据葡萄果实内是否有种子而将其分为有核葡萄和无核葡萄。在葡萄生长发育过程中的开花结实阶段，从雌配子体发育到有性生殖过程完成的任何一个阶段出现障碍，就会形成无核果。不同阶段出现障碍形成各种类型的无核葡萄。本试验研究了不同取样时期、培养基类型及激素浓度等因素对无核葡萄自交胚挽救后代的影响，优化昆诺无核和雷明无核胚挽救体系，试验结果为无核葡萄的育种研究提供了技术支持。

1 材料与方法

不同的种子败育型无核品种，根据其授粉特性可分为两大类：一类称单性结实型，就是卵细胞不经过受精作用而直接发育成果实；另一类称假单性结实型，即种子败育型，就是虽受精，但受精后的胚很快停止发育导致无核果实产生，这种类型的品种占无核品种的85%以上，在无核葡萄胚挽救育种中即是利用这一类型作母本。

试验在抚顺县后安镇进行，供试葡萄杂交组合材料为昆诺无核×雷明无核和雷明无核×昆诺无核。花粉父本品种在开花前1天至初花期采集，花粉干燥后于4℃冰箱保存备用。作为母本的所有品种在开花前3～5天进行去雄，授粉1～2次，每组合去雄授粉10～20穗果。授粉后系标牌，标注好去雄授粉的时间及父、母本名称。以授粉后的天数作为花后天数。

将授粉后一定时期的幼果采回，果穗用纯净水反复冲洗，然后将果穗浸泡于酒精中约半分钟（酒精浓度为70%），用没有杂菌的纯净水冲洗3次，再将果穗放入0.1%升汞中浸泡8～10分钟，用无菌水漂洗3～5次，消毒后的果粒用刀切开，取出其中胚珠，接种到三角瓶中（使用100毫升三角瓶，三角瓶中装入50毫升胚发育培养基），培养60天后，将培养的胚珠横切，以发现白色胚乳的胚珠为发育胚，将发育的胚珠转入萌发培养基（1/2 MS+BA0.5 +IBA1.5+GA0.5+2%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭），30天后调查萌发成苗率。培养条件为温度（25±1）℃，光强为2000勒克斯，每天光照12～14小时。

昆诺无核×雷明无核、雷明无核×昆诺无核杂交胚珠为试材，采用L9（34）正交实验设计，接种时期：50天、60天、70天；50天、53天、56天；培养基种类： B5、ER、Nitsch；IBA浓度：1.5毫克/升、2.0毫克/升、2.5毫克/升；GA浓度：0.3毫克/升、0.5毫克/升、0.7毫克/升。每种培养基中均加入6%蔗糖、0.6%琼脂、0.1%活性炭、BA0.5。每瓶接种8～10枚胚珠，接种7～10瓶。调查胚珠发育率、萌发率。

2 结果与分析

试验结果如下表所示，可以看出各组合萌发或发育的胚珠都有一定的数量。从胚珠发育率来看，昆诺无核×雷明无核的胚珠发育率较高，在90%～97.5%，其中处理5即花后60天接种，采用ER培养基，IBA浓度为2.5毫克/升，GA浓度为0.3毫克/升时效果最好；雷明无核×昆诺无核的胚珠发育率为70%～86.25%，其中处理6即花后53天接种，采用Nitsch培养基，IBA浓度为1.5毫克/升，GA浓度为0.5毫克/升时效果最好。从胚珠萌发率来看，昆诺无核×雷明无核的胚珠发育率较高，在1.82%～38.89%，其中处理6即花后60天接种，采用Nitsch培养基，IBA浓度为1.5毫克/升，GA浓度0.5毫克/升时效果最好；雷明无核×昆诺无核的胚珠发育率为0%～8.75%，其中处理4即花后53天接种，采用B5培养基，IBA浓度为2.0毫克/升，GA浓度为0.7毫克/升时效果最好。

3 结论

试验结果得出，接种时期、培养基种类、IBA浓度及GA浓度都是影响无核葡萄胚挽救的因素，而对胚挽救影响最大的因素是接种时期。从胚珠萌发率来看，昆诺无核×雷明无核，花后60天接种，采用Nitsch培养基，IBA浓度为1.5毫克/升，GA浓度0.5毫克/升时效果最好；雷明无核×昆诺无核，花后53天接种，采用B5培养基，IBA浓度为2.0毫克/升，GA浓度为0.7毫克/升时效果最好。另外，培养基种类、接种时期及激素浓度在不同的基因型品种杂交组合下要求也不同。