三阴型乳腺癌患者癌组织及血清转化生长因子β1检测的临床意义

丁明剑，杨文华，白杨，崔国忠，戴殿禄

(沧州市中心医院，河北沧州061000)

三阴型乳腺癌患者癌组织及血清转化生长因子β1检测的临床意义

丁明剑，杨文华，白杨，崔国忠，戴殿禄

(沧州市中心医院，河北沧州061000)

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在三阴型乳腺癌发生、发展中的作用。方法 选择三阴型乳腺癌患者80例、非三阴型乳腺癌患者40例，采用ELISA法检测血清TGF-β1水平，采用免疫组化法检测乳腺癌组织TGF-β1表达，分析TGF-β1表达与三阴型乳腺癌患者临床病理参数及预后的关系。结果 三阴型及非三阴型乳腺癌患者血清TGF-β1水平分别为(108.43±10.55)、(84.09±11.52)ng/L，二者比较P<0.05。三阴型乳腺癌患者中TGF-β1高表达42例、低表达38例，TGF-β1高表达者较低表达者腋下淋巴结转移率高、组织学分级程度低(P均<0.01)，二者年龄、绝经状态、肿瘤直径、乳腺癌家族史比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；TGF-β1高表达者5年无瘤生存率为54.76%(23/42)、低表达者为71.05%(27/38)，二者比较P<0.05。结论 三阴型乳腺癌患者TGF-β1高表达，TGF-β1的表达变化与肿瘤组织学分级及腋下淋巴结转移相关，并影响患者预后。

三阴型乳腺癌；转化生长因子β1；无瘤生存率

三阴型乳腺癌是临床常见的一种恶性肿瘤，患者发病年龄低、复发风险高，由于患者雌、孕激素受体及Her-2基因的表达均为阴性，临床上尚无针对性的内分泌治疗或靶向药物治疗方法[1]。转化生长因子β1(TGF-β1)是一种具有多种生物活性的多肽类细胞因子，在恶性肿瘤的发生、发展过程中发挥双重作用，在恶性肿瘤早期，TGF-β1诱导上皮细胞凋亡而产生抑癌作用；随着肿瘤的发展，肿瘤细胞逃逸TGF-β1的抑制作用，同时分泌大量具有活性的TGF-β1，促进肿瘤细胞的侵袭转移[2～5]。研究发现，TGF-β1高表达与胃癌[6]、肺癌[7]、结肠癌[8]、乳腺癌[9,10]等多种恶性肿瘤的发生、发展关系密切。本研究探讨TGF-β1在三阴型乳腺癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2003年6月～2008年6月沧州市中心医院经病理证实的三阴型乳腺癌患者80例，均为女性，年龄26～69岁、平均48.2岁，均无远处转移，有腋下淋巴结转移49例，有乳腺癌家族史6例，组织学分级Ⅰ～Ⅱ级42例、Ⅲ级38例。80例患者均行乳腺癌改良根治术治疗，术后均给予蒽环类及紫杉醇药物为主的化疗6～8个周期，腋下淋巴结≥3枚者(30例)行局部放射治疗。同时选取40例非三阴型乳腺癌患者，均为女性，年龄32～67岁、平均49.2岁，均无远处转移，治疗方法同三阴型乳腺癌患者。两组年龄、病情及治疗方法等均具有可比性。

1.2 血清TGF-β1水平检测 手术治疗前分别取三阴型乳腺癌及非三阴型乳腺癌患者晨起空腹静脉血5 mL，离心提取血清，采用Germany M5000酶联免疫分析仪(ELISA法)检测血清TGF-β1，通过绘制标准曲线计算血清TGF-β1水平。

1.3 乳腺癌组织TGF-β1表达检测 两组术中均留取乳腺癌组织，10%甲醛固定，4 μm厚切片。按照试剂盒说明书进行免疫组化染色。免疫组化试剂盒购自Genzyme公司。组织标本经牛奶封闭，4 ℃静置2 h，加入一抗TGF-β1(1∶2 000)于4 ℃静置24 h，加入羊抗兔二抗(1∶25)室温静置1 h。采用不加一抗的切片作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。TGF-β1阳性染色主要定位于细胞质，呈棕色弥漫或颗粒状。无阳性细胞为-，阳性细胞>0～<25%为+、25%～75%为++、>75%为+++。-、+为低表达，++、+++为高表达。比较三阴型乳腺癌TGF-β1低表达者与高表达者临床病理参数。

1.4 随访 三阴型乳腺癌患者均随访至2013年6月，采用电话随访与门诊复查相结合的方式，统计患者5年无瘤生存率，比较TGF-β1低表达者与高表达者5年无瘤生存率。

2 结果

2.1 血清TGF-β1水平 三阴型乳腺癌患者血清TGF-β1水平为(108.43±10.55)ng/L，非三阴型乳腺癌患者为(84.09 ±11.52)ng/L，二者比较P<0.05。

2.2 三阴型乳腺癌组织TGF-β1表达及其与患者临床病理参数间的关系 三阴型乳腺癌组织TGF-β1高表达42例、低表达38例，TGF-β1低表达者与高表达者腋下淋巴结转移、组织学分级比较差异均有统计学意义(P均<0.01)，二者年龄、绝经状态、肿瘤直径、乳腺癌家族史比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 组织三阴型乳腺癌TGF-β1表达与患者临床病理参数的关系(例)

2.3 三阴型乳腺癌TGF-β1高表达者与低表达者5年无瘤生存率 80例三阴型乳腺癌患者均完成为期63～87个月的随访，中位随访时间为68个月，TGF-β1高表达者5年无瘤生存率为54.76%(23/42)、低表达者为71.05%(27/38)，二者比较P<0.05。

3 讨论

三阴型乳腺癌指雌孕激素受体和原癌基因Her-2均为阴性的乳腺癌，占所有乳腺癌病理类型的10.0%～20.8%，具有较高的复发转移风险，预后较其他类型乳腺癌差，由于其激素受体均阴性，临床尚无有效的分子靶向治疗药物[1]。TGF-β1是由两个结构相同或相似的亚单位借二硫键连接而形成的双体结构，属于调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。TGF-β1信号通路传导在组织细胞的生长、分化、免疫调节、炎症和损伤修复等方面发挥重要作用[11]。TGF-β1信号通路失衡或发生改变可导致多种癌基因突变，促进肿瘤细胞分泌大量有活性的TGF-β1，改变肿瘤细胞外微环境，使肿瘤细胞与细胞外基质(如糖蛋白、黏蛋白)相互作用，通过肿瘤相关成纤维细胞改变上皮细胞表型，诱导血管内皮生长因子(VEGF)释放，促进血管生成，进而促进肿瘤发生、发展；抑制机体内树突状细胞(DC)、细胞毒性T细胞(CTL)、NK细胞、巨噬细胞等免疫细胞，抑制IL-2受体及其通路，促进肿瘤细胞浸润、转移[12]。

本研究中三阴型乳腺癌患者血清TGF-β1水平显著高于非三阴型乳腺癌患者，提示TGF-β1高表达可能是三阴型乳腺癌发生的促进因素，与Bhola等[13]研究结果一致。本研究中组织学分级Ⅲ级、发生腋下淋巴结转移的三阴型乳腺癌组织中TGF-β1高表达例数分别多于组织学分级Ⅰ～Ⅱ级及无腋下淋巴结转移者，与Lang等[10]研究结果一致。Bao等[14]研究发现，乳腺癌组织中TGF-β1阳性表达率愈高，其腋下淋巴结转移的数目愈多，无瘤生存时间愈短。上述结果提示，TGF-β1表达增加促进肿瘤的浸润、转移。正常组织细胞中依赖于Smad 的TGF-β1信号传导通路与Smad非依赖性的TGF-β1信号传导通路处于平衡状态，两者可以相互调节，但肿瘤细胞中这种平衡被破坏[12]。Lang等[10]发现，TGF-β1通过对uPA/PAI-1的活化转移从而参与乳腺癌的复发与转移；也有研究证实，TGF-β1介导SMAD3/SMAD4信号传导通路参与肿瘤的复发及转移[15]。本研究中TGF-β1高表达的三阴型乳腺癌患者5年无瘤生存率低于低表达者，与文献报道[16,17]一致；提示三阴型乳腺癌组织中TGF-β1表达情况可作为判断患者预后的指标之一。三阴性乳腺癌组织中TGF-β1表达量越高，其信号通路改变越明显，肿瘤恶性程度越高，越容易出现复发转移，从而影响患者预后。但是，目前TGF-β1表达上调在三阴型乳腺癌浸润、转移过程中的分子作用机制尚不明确。

总之，三阴型乳腺癌组织TGF-β1高表达，TGF-β1的表达变化与肿瘤组织学分级及腋下淋巴结转移相关，并影响患者预后，但其具体作用机制有待进一步探讨。

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