宁夏吴忠地区规模化奶牛场流产牛病原血清学调查

曹思婷，郭亚男，雷元元，白晓南，马　烨，余永涛，何生虎

(宁夏大学农学院,宁夏银川 750021)



兽医临床

宁夏吴忠地区规模化奶牛场流产牛病原血清学调查

曹思婷，郭亚男，雷元元，白晓南，马烨，余永涛，何生虎*

(宁夏大学农学院,宁夏银川 750021)

摘要：为了调查宁夏吴忠地区奶牛场因传染性因素造成流产的基本情况，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对可能造成感染流产的牛传染性鼻气管炎病毒、新孢子虫、牛病毒性腹泻病毒的抗体及布鲁菌的抗原进行了血清学检测。结果显示，牛传染性鼻气管炎病毒抗体阳性率为48.84%,新孢子虫抗体阳性率为30.23%,牛病毒性腹泻病毒抗体阳性率为19.77%，布鲁菌抗原阳性率为24.42%。牛场阳性率高达100%。根据统计显示，不同妊娠胎次的奶牛流产率差异显著(P<0.05)，其中第1胎流产率与其他胎次间差异极显著(P<0.01)。不同妊娠时间的奶牛流产率差异不显著(P>0.05)。调查表明，宁夏部分奶牛场存在不同程度的牛传染性鼻气管炎病毒、新孢子虫、牛病毒性腹泻病毒和布鲁菌感染。

关键词：流产奶牛；血清学检测；牛传染性鼻气管炎；新孢子虫病；牛病毒性腹泻；布鲁菌病

奶牛流产是影响奶牛养殖业经济效益的重要因素之一，流产不但造成胎儿夭折或发育受阻，使产犊间隔扩大，增加养牛的饲料成本，而且会造成产奶量下降，严重者还可引起母牛繁殖障碍，影响后备牛的扩充。一般情况下，3%～8%的奶牛流产率属于正常现象[1]。在管理良好、无疫病流行的地区，奶牛流产率通常在2%～5%[2]。近年来随着我国规模化奶牛场数量的增多，奶牛流产率也呈逐年上升趋势。据调查，我国奶牛流产率在10%～20%左右。据国外统计，每个流产病例的平均经济损失为640美元左右[2-3]，给奶牛场带来了重大的经济损失。引起奶牛流产的原因有很多，主要分为传染性因素和非传染性因素，传染性因素占主导地位，国外研究发现达90%左右[3]，且这类流产病因繁多，症状复杂，不易确诊。因此,临床上对传染性因素造成奶牛流产的病因调查及诊断分析非常必要，且对该类流产疾病的预防和控制具有十分重要的指导意义。

为了解宁夏吴忠地区奶牛场造成流产的传染因素，对吴忠地区3个规模化奶牛场2014年4月—2015年7月期间流产的86头奶牛采集的血液样品进行传染性鼻气管炎病毒、新孢子虫、牛病毒性腹泻病毒抗体和布鲁菌抗原的血清学检测，探究造成奶牛流产的主要传染性因素，为奶牛场的疫病防控提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1检测试剂盒 牛传染性鼻气管炎病毒抗体(IBR-Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒(批号：DRE98252)、牛新孢子虫抗体(N.caninum-Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒(批号：DRE98175)、牛病毒性腹泻病毒抗体(BVD-Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒(批号：DRE98014)、牛布鲁菌病(Brucellosis)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒(批号：DRE98408)，武汉华美生物工程有限公司CUSABIO○R产品。

1.1.2主要仪器 移液器，德国Eppendorf公司产品；ST70-2微孔板恒温振荡器、TGL-18C高速台式离心机，上海安亭科学仪器公司产品；WELL WASH 4MK2洗板机，杭州米欧仪器有限公司产品；MULTISKAN MK3酶标仪，上海赛默飞世尔仪器有限公司产品。

1.2方法

1.2.1血清的收集和保存血液样品由场内兽医人员和宁夏大学农学院临床兽医学实验室工作人员采集，从流产奶牛尾静脉或颈静脉采集2 mL～4 mL血液，在室温下自然凝固 10 min～20 min，然后离心20 min(2 000 r/min～3 000 r/min)，最后吸出血清置于灭菌的小试管内，于-20 ℃保存待检。

1.2.2检测方法及结果判定 严格按照ELISA试剂盒说明书进行操作和结果判定。

1.2.3数据统计 应用Excel和SAS 8.2统计分析软件对数据进行统计分析。

2结果

2.1血清阳性率的检测

被检测的86份流产奶牛血清中，检出牛传染性鼻气管炎病毒抗体阳性血清42头份，阳性率为48.84%(42/86)；检出新孢子虫抗体阳性血清26头份，阳性率为30.23%(26/86)；检出牛病毒性腹泻病毒抗体阳性血清17头份，阳性率为19.77%(17/86)；检出布鲁菌抗原阳性血清21头份，阳性率为24.42%(21/86)；另外28头流产牛4种病原血清学检测结果均呈现阴性(表1)。

根据统计，被检测的86份血清，9头份IBRV和N.caninum抗体均为阳性，占检测总数10.47%；1头份IBRV和BVDV抗体均为阳性，占检测总数1.16%；5头份IBRV抗体和Brucella抗原均为阳性，占检测总数5.81%；1头份N.caninum抗体和Brucella抗原均为阳性，占检测总数1.16%；1头份IBRV、N.caninum和BVDV抗体均为阳性，占检测总数11.63%；3头份IBRV、N.caninum抗体和Brucella抗原均为阳性，占检测总数3.49%；2头份IBRV、BVDV抗体和Brucella抗原均为阳性，占检测总数2.33%；7头份IBRV、N.caninum、BVDV抗体和Brucella抗原均为阳性，占检测总数8.14%(表2)。

表1　牛传染性鼻气管炎病毒、新孢子虫、牛病毒性腹泻病毒和布鲁菌血清学检测结果

表2　多种病原合并血清阳性检测结果

注：I．IBRV抗体；N．N．caninum抗体；V．BVDV抗体；B．Brucella抗原；IN．IBRV和N．caninum血清阳性；IV．IBRV和BVDV血清阳性；IB．IBRV和Brucella血清阳性；NV．N．caninum和BVDV血清阳性；NB．N．caninum和Brucella血清阳性；VB．BVDV和Brucella血清阳性；INV．IBRV，N．caninum和BVDV血清阳性；INB．IBRV，N．caninum和Brucella血清阳性；IVB．IBRV，BVDV和Brucella血清阳性；NVB．N．caninum，BVDV和Brucella血清阳性；INVB．IBRV，N．caninum，BVDV和Brucella血清阳性。

Note：I．IBRV antibody；N．N．caninumantibody；V．BVDV antibody；B．Brucellaantigen；IN．IBRV andN．caninumpositive sera；IV．IBRV and BVDV positive sera；IB．IBRV andBrucellapositive sera；NV．N．caninumand BVDV positive sera；NB．N．caninumandBrucellapositive sera；VB．BVDV andBrucellapositive sera；INV．IBRV，N．caninumand BVDV positive sera；INB．IBRV，N．caninumandBrucellapositive sera；IVB．IBRV，BVDV andBrucellapositive sera；NVB．N．caninum，BVDV andBrucellapositive sera；INVB．IBRV，N．caninum，BVDV andBrucellapositive sera.

2.2流产情况

统计结果显示，2014年4月至2015年7月的86个流产病例中，随着胎次的增加，流产率逐渐降低，其中第1胎牛流产所占比例最多，为36.05%(31/86)。流产时妊娠时间以5个月～6个月为主，占32.56%(28/86)(图1和表3)。

图1　流产与母牛胎次的关系

项目Item妊娠天数/dDaysofpregnancy≤9091～120121～150151～180181～210≥211病例数Cases7810281914比例/%Proportion8.149.3011.6332.5622.0916.28

3讨论

3.1关于流产的原因

引起怀孕母牛流产的病因很多，但以传染性因素为主导，如布鲁菌病、牛传染性鼻气管炎、犬新孢子虫病、牛病毒性腹泻、弓形虫病、衣原体病、牛沙门菌病、李斯特菌病、牛弯曲菌病、中山病、赤羽病等均可导致流产。86头流产牛血清检测结果显示，传染性鼻气管炎病毒、新孢子虫、病毒性腹泻病毒抗体阳性率依次为48.84%、30.23%和19.77%，布鲁菌抗原阳性率为24.42%；另外28头牛血清学检测结果均呈现阴性，流产原因未知。结果表明，宁夏吴忠地区3个奶牛场传染性鼻气管炎病毒、新孢子虫、病毒性腹泻病毒和布鲁菌这4种病原均有感染，牛场阳性率100%，是造成流产的主要原因。由于条件限制，本次仅对引起奶牛流产的4种病原进行检测，造成牛流产其他病原还有待于进一步查明。

3.1.1关于传染性鼻气管炎 牛传染性鼻气管炎是由牛疱疹病毒1型(BHV-1)引起的以牛呼吸道为主要症状的一种接触性传染病。该病呈世界分布，我国及周边国家均有报道，不仅影响奶牛产奶量，还可导致公牛繁殖障碍、孕牛流产、犊牛死亡，严重影响了养牛业的健康发展，在我国被定为二类动物疫病。该病在我国感染较为严重，部分省(区)普遍存在，朱海明等[4]对我国北京、天津、山东、河北、河南、四川、云南等7个省市的牛群IBRV的感染状况进行了调查，结果显示IBRV平均阳性率为29.45%，其中天津、山东、河南、云南4个地方的IBRV感染率达到30%以上；石冬梅等[5]报道，河南省奶牛IBRV抗体阳性率为59.29%，希尼尼根等[6]报道内蒙古地区IBRV的平均感染率率为47.62%；皮全等[7]报道，贵州省奶牛IBRV抗体总体阳性率为82.50%。此次调查显示，宁夏吴忠3个奶牛场流产牛IBRV抗体总体阳性率为48.84%，相对比朱海明等调查的我国北京、天津、山东、河北、河南、四川、云南7个省(市)的IBRV平均阳性率29.45%高，同时也是此次调查的4种传染性疫病中阳性率最高的，由此可判定IBRV是导致该3个奶牛场奶牛流产的主要的原因之一。

3.1.2关于新孢子虫病牛新孢子虫病是由犬新孢子虫引起的多种动物共患的一种原虫病，对牛危害十分严重，主要是引起孕畜流产或产死胎、弱胎，新生犊牛运动障碍、脑炎等，进而给养牛业带来巨大的经济损失。该病分布广泛，迄今为止已经有70多个国家和地区报道奶牛存在新孢子虫感染[8]，感染率在10%～ 40%之间，最高可达82%。2002年，我国学者徐雪平等[9]于2002年在新疆部分地区牛群首次检出了新孢子虫抗体阳性牛的存在，证明了我国牛群存在新孢子虫病，此后该病相继被报道，石冬梅等[10]报道了河南省奶牛犬新孢子虫的血清抗体阳性率为16.88%，闫双等[11]调查发现，新疆地区具有流产病史的奶牛的新孢子虫感染率为20.4%，邹世颖等[12]报道了我国北方六省市(山东、河北、内蒙、北京、河南、新疆)牛新孢子虫血清阳性率为8.6%，皮全等[7]报道贵州省奶牛新孢子虫抗体总体阳性率为36.67%。相比之下可看出，具有流产史的奶牛场新孢子虫抗体阳性率较高，本次新孢子虫抗体阳性检测结果(30.23%)除了比皮全等报道的贵州省新孢子虫抗体阳性检测结果(36.67%)略低外，比以上国内其他各省(市、自治区)均高，表明新孢子虫在我国各地区感染较为普遍，是导致牛流产的原因之一，应当引起奶牛场的高度重视。

3.1.3关于牛病毒性腹泻牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种急性、热性的牛传染性疾病。该病的的危害主要包括犊牛腹泻、肠炎、呼吸综合征、母牛繁殖障碍及流产或产死胎、弱胎等。另外，持续感染BVDV的牛可终身排毒，感染同群其他牛。目前该病给世界养牛业造成严重经济损失。BVDV最早于1953年报道于美国[13]，现在已经遍布于世界各地。本病在我国主要是20世纪80年代以后从德国、丹麦、美国、新西兰等国家引入种源时带入的，被我国列为三类动物疫病，多年来因人们对该病的重视程度不够而导致目前呈现广泛性流行趋势。张俊杰等[14]报道北京地区规模化奶牛场牛群BVDV抗体阳性率达到94.1%；范仲鑫等[15]报道湖南省规模化奶牛场奶牛BVDV抗体阳性率为92.17%；石冬梅等[16]报道河南省奶牛BVDV感染率为53.8%；邓波等[17]报道上海地区奶牛场育成牛的BVD抗体阳率为43.3%、成年乳牛为37.8%。Zhong F等[18]对西部牛场牛群感染BVDV的情况进行了调查，平均感染率达到43.39%；张改文等[19]对山西省太原4个县区牛群进行BVDV血清学调查，检出平均阳性率为63.5%。郭芙莉[20]采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)对新疆不同地区的450份牛血清进行了BVDV抗体检测，BVDV 抗体阳性率为 36.2%。这些结果均比本次BVDV抗体阳性率(19.77%)检测结果高。

3.1.4关于布鲁菌病布鲁菌病是一种由布鲁菌引起的流行广泛、危害很大的人兽共患细菌性传染病。家畜中牛、羊、猪最常发生，感染布病的动物最常出现的临床症状是流产，产奶量下降。奶牛布鲁菌病的病原主要是牛布鲁菌，其中1型、2型或3型布鲁菌是引起奶牛流产的主要致病菌类型。布鲁菌病最早于1860年发现于地中海的马耳他岛，迄今世界上仅有四分之一的国家和地区没有报道过该病的发生和流行。人畜间发病率较高的国家和地区有土耳其、马耳他、希腊、西班牙、意大利、苏格兰等[21]。在我国，关于布鲁菌病的确切记载是从20世纪初开始的，现已在25个省(市、直辖市)流行。我国将该病列为二类动物疫病，对该病的控制标准设定为血清阳性率低于0.5%。20世纪60年代到90年代初，我国多个省市已达到人畜布鲁菌病控制标准，然而随着人们生活水平的提高，对肉类、乳制品及其他动物产品的需求量增加，使得奶业生产快速发展，奶牛养殖领域不断扩大，加之频繁引种等因素，导致该病的发病率超过控制标准的2倍以上。自2000年以来，全国兽医部门检出的布鲁菌病阳性牲畜数量逐年增加，出现流产、胎盘滞留等的患病奶牛在我国各个地区的奶牛群中也不断增多，并呈上升趋势[22]，这不仅阻碍畜牧业发展，造成严重的经济损失，而且对人类的身体健康也构成了极大的威胁。徐明举等[23]在河北张家口地区布鲁菌的血清学调查结果显示，流产奶牛的阳性率为26.24 %，王基隆等[24]于2011年—2013年采用虎红平板凝集试验对国内(黑龙江、辽宁、天津、河北、内蒙古等15个省市)的规模化奶牛养殖场进行布鲁菌的血清学调查，结果显示，虎红法检测奶牛血清布鲁菌总体阳性率为18.58%，其中具有流产史的奶牛阳性率为41.04%。本次检测的86头流产奶牛血清中布鲁菌阳性率为24.42%，比流产牛的布鲁菌血清阳性率相对较高，表明布鲁菌是导致奶牛流产的一个非常重要的因素。

3.2关于流产

生产中调查发现，IBRV感染怀孕奶牛后多数在妊娠4个月～6个月出现流产，产第1、2胎次的母牛发病较多见[4]。奶牛新孢子虫引起的流产可发生在妊娠各个阶段，但是绝大多数见于5个月～6个月[25]。BVDV感染怀孕母牛后大多在150 d发生流产、死产，也有文献报道妊娠120 d内感染流产。布鲁菌感染怀孕母牛后，多因引发胎盘炎而导致妊娠后5个月～6个月内流产，不少还会引起奶牛多次流产。本次调查的86个病例中，流产奶牛传染性鼻气管炎病毒与新孢子虫复合感染所占比例最高，占11.63%(10/86)，由此判断传染性鼻气管炎合并新孢子虫复合感染是此次调查的奶牛场流产的主要原因。另外，流产主要集中在1胎～3胎，第1胎牛流产所占比例最多，占36.05%(31/86)，其中第1胎流产率与其他胎次间差异极显著(P<0.01)，这说明初产牛流产率明显高于经产牛，这与罗玉江等[26]的调查结果奶牛在头胎最易发生流产基本一致，分析其原因可能与青年牛生殖系统发育及内分泌机能尚不健全有关。据统计显示，发生于150 d～180 d期间流产病例最多，占32.56%(28/86)，这与牛传染性鼻气管炎、新孢子虫引起奶牛流产的特点相吻合。

3.3防控措施

牛传染性鼻气管炎为接触性传染的病毒病，目前尚无特效治疗药物，可以使用疫苗预防，凡阴性牛可采取疫苗注射，阳性牛如果数量较少，可予以淘汰，如果数量多，应立即隔离，集中饲养，但疫苗不能阻止野毒感染，也不能阻止潜伏病毒的持续性感染，因此，最重要的防控措施是严格检疫，防止引入传染源和带入病毒。新孢子虫病是目前尚无治疗药物的一种寄生虫病，目前认为对养殖场内犬只的控制是控制该病的一个重要环节，而且垂直传播是本病的重要传播途径，因此，有专家建议，淘汰血清抗体阳性母牛可能是控制本病的一种重要措施。牛病毒性腹泻为病毒病，尚无有效治疗药物，考虑到国内尚无疫苗可以使用，检测并淘汰持续感染牛是控制牛病毒性腹泻的有效手段，平时预防要加强检疫，防止引入带毒牛。 布鲁菌病属于人兽共患传染病，对公众健康构成潜在的威胁，世界上有多种布鲁菌疫苗，但疫苗接种预防还存在一些问题，如传统牛布鲁菌弱毒苗均不能用于怀孕母牛、免疫接种后产生的血清反应与野毒感染相似，临床难于区分等，因此，布鲁菌病应引起人们的高度重视，严格执行兽医卫生制度，认真做好动物卫生检疫工作，加强对布鲁菌病的检疫，检出阳性患病动物及时淘汰，死于传染病或疑似传染病的动物尸体应焚烧或深埋。

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Serological Investigation on Infectious Pathogens in Abortion Cows of Large-scale Dairy Farms in Wuzhong of Ningxia

CAO Si-ting,GUO Ya-nan,LEI Yuan-yuan,BAI Xiao-nan,MA Ye,YU Yong-tao,HE Sheng-hu

(SchoolofAgriculture，NingxiaUniversity,Yinchuan,Ningxia,750021,China)

Abstract:An epidemiological survey on infectious factors causing abortion in dariy cows was carried out in the Wuzhong of Ningxia．All sera were tested for seroprevalences of infectious bovine rhinotracheitis(IBR)，neosporiasis，bovine viral diarrhea(BVD) and brucellosis that may cause abortion by the ELISA．The overall seroprevalence of IBR was 48.84%，the overall seroprevalence of neosporiasis was 30.23%，the overall seroprevalence of BVD was 19.77%，the overall seroprevalence of brucellosis was 24.42%．The seroprevalence rate of dairy cow farms was 100%．The statistic analysis showed that there was a significant difference (P<0.05) in abortion rates of different parities among that there was a extremly significant difference(P<0.01) in first parity compared with other parities,but the abortion rates had no significant difference (P>0.05)between different pregnancy time．The results showed that different degrees of infections of IBRV，Neospora caninum，BVDV and Brucella exist in part of the dairy cow farms in Ningxia．

Key words:abortion cow；serological detection；infectious bovine rhinotracheitis；neosporiasis；bovine viral diarrhea；brucellosis

文章编号:1007-5038(2016)04-0115-05

中图分类号:S857.21;S858.21

文献标识码:B

作者简介：曹思婷(1990-)，女，宁夏灵武人，硕士研究生，主要从事临床兽医诊断技术研究。*通讯作者

基金项目：宁夏科技厅重大农业技术推广项目(0315-0103)

收稿日期：2015-10-12