抗核抗体联合抗心磷脂抗体、抗精子抗体和抗β2糖蛋白I抗体检测在女性不孕不育中的价值

黄启当,李泽泳，吴晓昀，严 芳

(广东省第二人民医院：1.风湿免疫科；2.检验医学部，广东广州 510000)

·论 著·

抗核抗体联合抗心磷脂抗体、抗精子抗体和抗β2糖蛋白I抗体检测在女性不孕不育中的价值

黄启当1,李泽泳2，吴晓昀2，严 芳2

(广东省第二人民医院：1.风湿免疫科；2.检验医学部，广东广州 510000)

目的 探讨抗核抗体(ANA)联合抗心磷脂抗体(ACA)、抗精子抗体(AsAb)和抗β2糖蛋白I抗体(β2GPI)检测在女性不孕不育疾病诊断中的价值。方法 187例不孕不育女性患者为不孕不育组用间接免疫荧光法检测血清中的ANA、AsAb抗体，同时用酶联免疫吸附法检测血清中的ACA、β2GPI抗体；对80例正常生育女性作为正常组联合测定ANA、ACA、AsAb、β2GPI抗体。结果 187例不孕不育女性患者组中ANA阳性率为18.1%(34/187)，正常组为2.5%(2/80)；ACA阳性率为22.3%(43/187)，正常组为5.0%(4/80)；AsAb阳性率为18.7%(35/187)，正常组为3.8%(3/80)；β2GPI阳性率为20.3%(38/187)，正常组为3.8%(3/80)；两组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不孕不育与体内存在的ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗体有密切关系，联合检测有助于免疫性不孕不育的病因查找和提高临床诊断率。

不孕不育； 抗核抗体； 抗心磷脂抗体； 抗精子抗体； 抗β2糖蛋白I抗体

不孕不育症是指正常育龄夫妇双方在同居一年以上，有正常的性生活且没有采用任何避孕措施但未能成功怀孕。近年来，不孕不育比例呈大幅上升趋势，与西方国家不孕不育比例已比较接近[1]。引起不孕不育的原因众多，主要包括生殖器官畸形等器质性病变 、微生物感染和免疫因素三大方面。随着生殖免疫学的进步，人们逐渐认识到不孕不育和自身免疫抗体存在密切的关系[2]。研究发现免疫因素约占不孕不育病因10%～30% 以上，在不孕不育的发生、发展过程中起到了重大作用，而在众多的自身抗体中，人们往往忽略了对抗核抗体的检测。本文对187例不孕不育女性患者和80例正常生育女性进行了抗核抗体(ANA)、抗心磷脂抗体(ACA)、抗精子抗体(AsAb)和β,糖蛋白I抗体(β2GPI)抗体的联合检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年5月至2015年5月期间本院收治的 187例不孕不育女性患者，年龄21～44岁，平均31岁，所有患者均行妇产科检查，排除排卵异常、输卵管不通、外周血染色体异常、内分泌异常、生殖道畸形、男方不孕因素、感染等一系列病变状况。对照组为有正常生育史的健康女性80例，年龄18～40岁，平均29岁。

1.2 检测方法 抽取每例病例静脉血3～5 mL不做抗凝处理，2 000 r/min离心10 min，离心后分离出血清，置于-20 ℃ 冰箱保存，测定前血清经解冻并平衡至室温。ANA和AsAb抗体测定采用间接免疫荧光法(IIF)，ACA、β2GPI抗体测定采用酶联免疫吸附法(ELISA),试剂盒均由德国欧蒙医学诊断有限公司提供，仪器采用Berthold Mithras LB940微孔板多功能酶标仪以及德国EUROStar Ⅲ Plus型荧光显微镜，操作和结果判定均按试剂盒说明书严格进行。

1.3 统计学处理 采用 SPSS 10.0统计软件对数据进行处理分析，数据采用χ2检验，P<0.05时差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 187例不孕不育女性患者和80例对照组人群ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗体联合检测结果见表1。

2.2 把34例ANA阳性设为一个组别，然后分别与ACA、AsAb和β2GPI抗体阳性结果联合分析见表2。

2.3 34例ANA阳性结果核型分析见表3。

表1 ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗体联合

*：P<0.05，与对照组比较。

表2 ANA分别与ACA、AsAb和β2GPI抗体联合检测结果[n(%)]

因ANA与ACA、AsAb、β2GPI 3项中的任2项或全部3项均未同时检出阳性，故上表中未做分析。

表3 ANA核型分析[n(%),n=34]

3 讨 论

不孕不育一直是困扰着人类生殖健康的难题。随着医学的不断发展，越来越多的研究发现并证明了不孕不育的发病机制与自身免疫因素有关，自身免疫产生的自身抗体又使得机体出现了免疫反应并贯穿着生殖过程的各个环节。

目前，研究已经发现ACA 、AsAb和β2GPI抗体对于不孕不育女性患者的病因分析和临床诊断具有重要的指导意义。ACA是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体。ACA 的产生是由于免疫系统无法识别位于细胞膜脂质双层内层带负电荷的磷脂，而带负电荷的磷脂如果暴露于内层之外，就会产生抗心磷脂抗体(ACA)[3]。而当ACA与磷脂结合，通过争夺胎盘血管的磷脂受体，使胎盘血管形成血栓，导致了流产、胎盘早剥、不孕不育等一系列生殖疾病的发生。ACA 还可以结合精子的磷脂部分，使精子失去活性，不能穿透入卵，引起不孕[4]。AsAb 是最早被发现的可导致不孕不育的自身免疫性抗体。AsAb产生是由女性在有性活动的情况下所导致，据对AsAb阳性患者进行临床观察，往往都存在生殖器官及经期异常出血时性交史，还有些患者患有子宫内膜、阴道以及输卵管等生殖系统炎症。当在损伤或者感染生殖道情况下进行性生活，会导致精子抗原由女性生殖道黏膜上皮屏障，渗进上皮下，接触于女性B淋巴细胞而产生AsAb，而AsAb则直接影响受精卵着床、精卵结合以及精子正常活动等，进而导致不孕[5]。在血清或生殖道分泌物中出现AsAb，对于精子活动产生很强的抑制作用并干扰精子运行，导致精子穿透困难以及阻碍精卵相结合，使正常的受精过程无法完成。AsAb 可通过不同途径作用于受孕过程的多个环节，所以即使在精卵结合已经完成的情况下，仍然可以对胚胎发育产生影响，造成流产、死胎。β2GPI又称载脂蛋白H，由肝细胞合成,相对分子质量为50 ×103,是血浆中含量较丰富的一种单链糖蛋白。Chamley等[6]发现抗β2GPI抗体可由胎盘能产生，该抗体能抑制内源性的凝集通路及抑制血小板上的凝血酶原酶的活性，证明了β2GPI作为血栓形成的致病因出现在免疫性不孕不育疾病中。师萍等[7]探讨了β2GPI抗体与不孕不育的关系，在检测中发现β2GPI抗体在不孕不育中的阳性率约为29.4%，证实了β2GPI抗体表达异常与不孕不育有一定的相关性。本文187 例不孕不育患者中ACA阳性率约为22.3%，而对照组的阳性率仅约为5.0%；AsAb 阳性率约为18.7%，而对照组的阳性率仅约为3.8%；β2GPI抗体阳性率约为20.3%,而对照组的阳性率仅约为3.8%，差异有统计学意义(P<0.05)，这与之前学者们的研究相符合，也表明了本文能够对不孕不育的研究提供了一定的价值。

ANA是人类自身抗体中最重要的部分，临床大量资料已经证实，ANA与人体多种免疫性疾病密切相关，如系统性红斑狼疮、原发性胆汁性肝硬化、混合性结缔组织病、干燥综合征等，然而研究其对不孕不育的影响相对较少。虽然ANA对不孕不育不具有非常明确的特异性，它只作为自身免疫性疾病的一个总的筛查指标，但是仍然有学者在研究中报道：不育症和原发不孕者抗核抗体阳性检出率高,抗核抗体阳性妊娠者的妊娠中毒症发生率高,提示了可能是免疫学机制在影响妊娠初期而造成不孕、妨碍妊娠导致不育和引发妊娠中毒症[8]。此外，抗核抗体还与产科并发症及不良妊娠结局(如习惯性流产、妊娠期糖尿病和胎儿生长受限等)密切相关，特别是与免疫功能异常相关的习惯性流产的关系更为密切[9-10]。所以本文研究目的是想通过目前在自身免疫疾病领域中广泛使用的ANA测定，来探讨不明原因的不孕、不育(母体无临床发病)患者中与自身免疫疾病的相关性。从结果上看，187例不孕不育患者中，ANA阳性率约为18.1%，而对照组的阳性率仅约为2.5%，差异有统计学意义(P<0.05)。在34例ANA阳性不孕不育患者中，ANA合并ACA阳性约有17.6%，ANA合并AsAb阳性约有23.5%，ANA合并β2GPI阳性约有14.7%，这表明了在不孕不育患者中经常有ANA合并其他的自身抗体的存在；另一方面，在这34例ANA阳性不孕不育患者中主要为颗粒型(约占47.1%)、均质型(约占17.6%)、核仁型(约占23.5%)这3种低滴度(滴度为1∶100)的核型，这说明在不孕不育患者里可能存在着低滴度的抗核抗体

但是患者没有什么临床表现，使得临床上往往忽略掉ANA的检测。在187例不孕不育患者组检出抗体阳性里，除外ACA、AsAb和β2GPI抗体的阳性，仍然有15例即约8.0%的患者可以单独检出ANA阳性，这表明ANA的检测可以成为不孕不育的一个筛查指标。综上所述，ANA抗体的检测对不育不孕病因的分析有一定的指导意义，可为临床诊断提供很好的帮助。

综上所述，对女性不孕不育患者进行ANA、ACA、AsAb和β2GPI抗体联合检查，能够提高疾病的检出率，从而有利于从多方面多角度进行不孕不育免疫因素的考虑和分析，这对于不孕不育疾病的病因查找、临床诊断、治疗和优生优育咨询具有重要的意义。

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Value of detections of antinuclear antibody combined with anti-cardiolipin antibody,anti-sperm antibody and anti-β2-glycoprotein I antibody in female infertility

HuangQidang1,LiZeyong2,WuXiaoyun2,YanFang2

(1.DepartmentofRheumatology; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,GuangdongProvincialSecondPeople′sHospital,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Objective To investigate the value of detections of anti-nuclear antibody (ANA) combined with anti-cardiolipin antibody (ACA),anti-sperm antibody (AsAb) and anti-beta 2 glycoprotein I (β2GPI) antibody in the diagnosis of female infertility disease.Methods A total of 187 female cases of infertility(infertility group) were detected serum ANA and AsAb by the indirect immunofluorescence assay,and ACA and β2GPI antibody by the enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).ANA,ACA,AsAb and β2GPI antibody also were detected in 80 females cases of normal fertility(normal group).Results Among 187 cases of female infertility,ANA positive rate was 18.1%(34/187) and which in the normal group was 2.5%(2/80).The ACA positive rate was 22.3% (43/187) in the infertility group and 5.0%(4/80) in the normal group; the AsAb positive rate was 18.7%(35/187) in the infertility group and 3.8%(3/80) in the normal group; the β2GPI positive rate was 20.3%(38/187) in the infertility group and 3.8%(3/80) in the normal group; the differences between the two groups had statistical significance (P<0.05).Conclusion Infertility is closely correlated with the in vivo existence of ANA,ACA,AsAb and β2GPI antibody,the joint detection is conducive to find the etiology of infertility and improve the clinical diagnosis rate.

infertility; antinuclear antibody; anti-cardiolipin antibodies; antisperm antibody; anti-β2-glycoprotein I antibody

黄启当,男，主管检验技师，主要从事临床免疫学与检验研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.018 文献标识码：A 文章编号：1673-4130(2016)07-0915-03

2015-12-28)