69例慢性淋巴细胞白血病的免疫表型及骨髓象分析

曲 伟

(滨州医学院烟台附属医院输血科，山东烟台 264100)

·论 著·

69例慢性淋巴细胞白血病的免疫表型及骨髓象分析

曲 伟

(滨州医学院烟台附属医院输血科，山东烟台 264100)

目的 研究慢性淋巴白血病的免疫表型与骨髓象的特点，以期为临床诊治提供一定的参考。方法 选取2013年1月至2015年1月间入院诊治的慢性淋巴细胞白血病患者69例，应用单参数和多参数流式细胞术分析患者的免疫表型，对患者进行骨髓象及血象检查，对患者的骨髓增生度进行分析。结果 69例CLL患者中，LL/SL-MC 33例(47.83%)、CLL/PLL-MC 16例(23.19%)、TSL 9例(13.04%)、ATLL 4例(5.80%)、PLL 4例(5.80%)、HCL 3例(4.34%)。CLL患者以年龄50岁以上者居多。骨髓增生度极度活跃12例(17.39%)、明显活跃10例(14.49%)、活跃47例(68.12%)，粒红比增高17例(24.64%)、正常29例(42.03%)、降低23例(33.33%)，巨核细胞计数增高3例(4.35%)、正常30例(43.48%)、降低36例(52.17%)。69例患者全部表达CD19、CD20，阳性率为100%；其次表达CD22，阳性率为98.55%；CD23阳性率为97.10%，CD5阳性率为86.96%；所有患者均不表达CD10。结论 69例CLL患者免疫分型以混合型为多，骨髓增生度较高；免疫表型则以CD19、CD20全部表达，其次分别表达为CD22、CD23与CD5，不表达CD10。

慢性淋巴细胞白血病； 免疫表型； 骨髓象

慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)是一种原发于造血组织的低度恶性造血系统疾病，肿瘤细胞为单克隆的B淋巴细胞[1]。主要特点在于大量形态上成熟的小淋巴细胞聚集在外周血、骨髓、淋巴结和脾脏等淋巴组织中。该病早期并无特异性症状，患者多因无痛性淋巴结肿大或不明原因的淋巴细胞绝对值升高而就诊。进展期患者除脾脏及全身淋巴结肿大外，还会出现反复感染、贫血、出血、体重减轻等症状，高龄患者因合并基础病的影响，会进一步恶化病情。CLL患者预后差别较大，部分患者病情进展缓慢甚至无需治疗，部分患者在发病初期即需积极治疗[2]。早期诊断对CLL治疗方案的选择及预后的评估至关重要。现本文通过分析慢性淋巴细胞白血病的免疫表型及骨髓象，以便进一步高CLL的诊断率，指导临床用药及疗效、预后的观察。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2015年1月间入院初诊为慢性淋巴细胞白血病患者69例，均行血常规、外周血涂片、骨髓细胞形态学检查等。所有患者均知情同意。69例患者中男53例，女16例，年龄44～82岁，平均年龄65.7±6.8岁。69例患者中2例贫血，胸骨压痛47例，肝肿大26例，脾肿大51例，浅表淋巴结肿大24例。CLL的诊断与分型参照《血液病诊断及疗效标准》(第2版)。

1.2 检测试剂与仪器 流式细胞仪(FACSCalibur，美国BD公司)。单克隆抗体包括CD5、CD10、CD23、CD22、CD20、FMC7、CD19、CD38、CD11C、λ轻链、κ轻链，均购自美国BD公司。应用BD FACSDiva软件分析。

1.3 检测方法 应用单参数和多参数流式细胞术分析患者的免疫表型，对患者进行骨髓象及血象检查，对患者的骨髓增生度进行分析。

1.3.1 骨髓象及血象检测 由专业的血液科医生抽取骨髓样本，骨髓细胞学检查均由细胞学专业检验人员检验并记录骨髓象。每份标本分类200个有核细胞进行常规检查，对数据进行分析。常规作糖原染色、过氧化物酶染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色。根据《临床血液学和血液检验》(第4版)标准对骨髓细胞进行分类分析。

1.3.2 免疫表型检测 取肝素抗凝的新鲜骨髓(6 h内)，1 500 r/min离心5 min，弃去上清液，加入红细胞裂解液，混匀，裂解5 min，加入1%牛血清清蛋白磷酸盐缓冲液终止裂解。1 500 r/min离心5 min，弃去上清液，加入磷酸盐缓冲液重悬细胞[3]。显微镜下计数，调整细胞数为(0.5～1)×106/mL。应用三色流式分析方案检测细胞膜抗原。每管加入FC受体阻断剂，并取100 μL样本加不同组合抗体，同时做同型对照管，混匀，孵育20 min，溶血后上机检测分析，每管取20 000个细胞，抗原表达在淋巴细胞中≥20%为阳性。

2 结 果

2.1 检出结果 69例CLL患者中，LL/SL-MC 33例(47.83%)、CLL/PLL-MC 16例(23.19%)、TSL 9例(13.04%)、ATLL 4例(5.80%)、PLL 4例(5.80%)、HCL 3例(4.34%)。CLL的发病率随着年龄增加呈升高趋势，见表1。

表1 69例CLL患者各年龄段疾病分类构成比[n(%)]

LL/SL-MC：大小淋巴细胞混合型；CLL/PLL-MC：幼淋巴细胞混合型；TSL：典型小淋巴细胞混合型；ATLL：不典型大淋巴细胞型；PLL：幼淋巴细胞性白血病；HCL：毛细胞型白血病。

2.2 骨髓象 骨髓增生度极度活跃12例(17.39%)、明显活跃10例(14.49%)、活跃47例(68.12%)，粒红比增高17例(24.64%)、正常29例(42.03%)、降低23例(33.33%)，巨核细胞计数增高3例(4.35%)、正常30例(43.48%)、降低36例(52.17%)，详见表2。

表2 69例各型CLL患者骨髓增生度、粒红比和各系细胞比情况

2.3 免疫表型 69例患者全部表达CD19、CD20，阳性率为100%；其次表达CD22，阳性率为98.55%；CD23阳性率为97.10%，CD5阳性率为86.96%；所有患者均不表达CD10。详见表3。

表3 69例CLL患者免疫表型特点

3 讨 论

CLL是欧美发病率最高的白血病，而在亚洲国家相对少见。20世纪80年代的调查中，我国CLL仅占慢性白血病的6%[4]，但近年来该病的发病率呈上升趋势。

据统计，95%以上CLL病例起源于B淋巴细胞恶性转化和克隆增殖。并且2001年开始，世界卫生组织将CLL定义均为B细胞型，取消T细胞-CLL。CLL又细化为LL/SL-MC、CLL/PLL-MC、TSL、ATLL、PLL、HCL、混合型、毛细胞白血病变异型、浆细胞白血病等12型[5]。本次研究中以LL/SL-MC(47.83%)、CLL/PLL-MC(23.19%)居多。

3.1 骨髓象分析 细胞形态学和骨髓组织学已经成为CLL的预后标记，不典型的细胞学形态、存在核裂或幼稚的淋巴细胞与预后不良密切相关。研究发现，弥漫性骨髓浸润患者的生存期显著短于非弥漫性骨髓浸润的患者[6]。白血病淋巴细胞与正常细胞差别较大，其胞体略大、血片上易见破碎细胞、易见肌上皮细胞，核有裂隙或切迹，无核仁或不明显，核染色质不规则聚集，部分胞质丰富、无颗粒、嗜碱性，部分胞质少，可见空泡，此类淋巴细胞显著增多，约占40%。在本次研究中，骨髓增生度极度活跃17.39%、明显活跃14.49%；粒红比为(0.62～10.4)∶1，平均2.81∶1；巨核细胞计数4.35%、降低52.17%。通过骨髓象分析了解造血组织的增生情况、骨髓细胞构成比例的改变及异常细胞的有无，对提高CLL相关疾病的诊断率有重要的积极作用。

3.2 免疫分型分析 细胞表面抗原是细胞分化过程中基因的表达产物，随着细胞分化的不同阶段有序的获得或消失[7]。流式细胞术可多参数、快速客观的分析细胞表面

抗原的表达，进而判断白血病的分型，其已成为诊断血液病的重要检测手段。有学者认为CD5、CD19、CD20是CLL的诊断依据。本次研究中，CD5阳性率为86.96%，CD19、CD20阳性率为100%，CD23阳性率为97.10%，不表达CD10，CD38弱表达。这与既往研究结果一致[8]。本次研究中9例CD5阴性的患者，结合骨髓细胞形态、临床表现、遗传学，诊断为不典型CLL。因此，对于CD5阴性但CD19、CD20阳性的患者，应谨慎诊断。CD5阳性表达与B细胞的激活状态有关。CD19分布于除效应B细胞外的B细胞发育的各个阶段，具促进B细胞激活的作用[9]；CD20表达于全体B细胞表面，是B细胞的鉴定标记，参与B细胞的活化与增殖分化[10]。此二者诊断CLL的灵敏度较高，但特异度差。因此，结合CD5、CD19、CD20的表达情况，综合判断。

综上所述，69例CLL患者以50岁以上为多，且以免疫分型以混合型为主；骨髓增生度较高；免疫表型则以CD19、CD20全部表达，其次分别表达为CD22、CD23与CD5，不表达CD10。

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[4]刘越坚,郭莉,邱阳，等.慢性淋巴细胞白血病免疫表型及凋亡相关蛋白分析[J].国际检验医学杂志,2013,34(1):25-26.

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[6]古丽娜·阿里甫,秦江萍,杨洁，等.慢性淋巴细胞白血病患者免疫表型特点及其与临床分期的关系[J].新疆医学,2014,44(1):23-26.

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[9]马晓露.全血细胞减少症156例骨髓象及病因分析[J].国际检验医学杂志,2011,32(4):519-520.

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Immunophenotype and bone marrow of chronic lymphocytic leukemia

QuWei

(DepartmentofBloodTransfusion,AffiliatedHospitalBinzhouMedicalCollege,Yantai,Shandong264100,China)

Objective To study the characteristics of immunophenotype and bone marrow in chronic lymphocytic leukemia (CLL) in order to provide certain reference for its clinical diagnosis and treatment.Methods A total of 69 cases of CLL in our hospital from January 2013 to January 2015 were selected.The immune 69 cases was analyzed by using the single parameter and multi-parameter flow cytometry.The bone marrow and blood examinations were performed and the myeloproliferative degree was analyzed.Results Among 69 cases of CLL,33 cases (47.83%) were LL/SL-MC,16 cases (23.19%) were CLL/PLL-MC,9 cases(13.04%) were TSL,4 cases (5.80%) were ATLL,4 cases (5.80%) were PLL and 3 cases (4.34%) were HCL.The majority of CLL cases were more than 50 years old.The myeloproliferative degree was hyperactive in 12 cases (17.39%),significantly active in 10 cases (14.49%) and active in 47 cases (68.12%); the myeloid-erythroid ratio was increased in 17 cases (24.64%),normal in 29 cases (42.03%) and reduced in 23 cases (33.33%); the megakaryocyte count was increased in 3 cases (4.35%),normal in 30 cases (43.48%) and reduced in 36 cases (52.17%).All 69 cases expressed CD19 and CD20 with the positive rate of 100%; secondly expressed CD22 with the positive rate of 98.55%; the CD23 positive rate was 97.10%,the CD5 positive rate was 86.96%; all cases did not express CD10.Conclusion The immunophenotype in 69 cases of CLL was mainly the mixed type with higher myeloproliferative degree; the immunophenotype expressed CD19 and CD20 in all cases,secondly expressed CD22 and CD23,and did not express CD10.

chronic lymphocytic leukemia; phenotype; bone marrow

曲伟，男，主管技师，主要从事医学检验、输血工作。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.012

A 文章编号：1673-4130(2016)07-0898-03

2015-11-15)