自体骨髓干细胞动员联合醒脑静治疗脑损伤临床研究

李志营 夏 云 郭晓鹤 杨伟科 王占伟

1)郑州市第七人民医院 郑州 450000 2)郑州市卫生学校 郑州 450005

自体骨髓干细胞动员联合醒脑静治疗脑损伤临床研究

李志营1)夏 云2)郭晓鹤1)杨伟科1)王占伟1)

1)郑州市第七人民医院 郑州 450000 2)郑州市卫生学校 郑州 450005

目的 探讨自体骨髓干细胞(BMSCs)动员联合醒脑静治疗颅脑损伤的临床疗效和安全性。方法 选取郑州市第七人民医院神经外科收治的颅脑损伤患者67例，按随机数字表分为对照组34例和观察组33例，治疗组在对照组基础上加用醒脑静联合自体BMSCs动员治疗，治疗前后采用格拉斯哥评分(GCS)和神经功能缺损评分(NIHSS)评价疗效，采用流式细胞术检测外周血CD133+/CD34+比例，观察不良反应。结果 治疗后观察组GCS评分明显升高，NIHSS评分明显降低，外周血CD34CD133占外周血单核细胞比率升高显著，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，治疗及随访期间均未出现明显不良反应。结论 自体BMSCs动员联合醒脑静可有效促进颅脑损伤患者神经损伤修复，显著改善患者神经功能。

颅脑损伤；骨髓干细胞；醒脑静

颅脑损伤(TBI)引起脑组织广泛性损害，导致其意识恢复缓慢或植物生存状态，同时常遗留有偏瘫、认知、学习及记忆功能下降等神经功能缺损症状[1]。损伤早期微环境修复与神经再生是提高颅脑损伤救治水平的重要因素。骨髓干细胞(bone marrow stem cells)以其无创性且具备干细胞向神经细胞分化的优势，在中枢神经组织损伤修复的治疗中具有广阔的应用前景[2-4]。研究发现[5]，醒脑静注射液能够有效减少氧化应激与血管炎症，减轻脑组织缺血、缺氧及再灌注损伤等，对脑损伤患者的促醒、神经修复具有重要作用。本研究主要探讨自体骨髓干细胞动员联合醒脑静治疗颅脑损伤的临床疗效和安全性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2008-06—2015-03郑州市第七人民医院神经外科收治的重型颅脑损伤患者67例，男36例，女31例；年龄18～60岁；受伤至就诊时间20～290 min，平均(38.54±11.36)min。纳入标准：(1)CT或MRI检查确诊为中、重度颅脑损伤，入院时格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale，GCS)3～8分；(2)出现意识障碍、偏瘫、言语障碍及大小便障碍等明确的神经功能缺失症状,而无心、肝、肾、肺等重大严重器质性脏器病变者；(3)治疗前收缩压<26.7 kPa，舒张压<16.0 kPa；(4)患者家属知情同意本治疗方案并签字。排除标准：(1)既往有癫痫、脑瘤或血管畸形者；(2)既往有脑血管病后遗症者；(3)妊娠或哺乳期妇女；(4)对研究药物过敏或对同类药物过敏者；(5)近2周有感染者；(6)造血系统严重原发性疾病；(7)精神病患者；(8)白细胞<4.0×109L-1，血小板<100×109L-1者；(9)凝血功能异常或有出血史者。剔除研究期间因自身疾病原因死亡或其他原因失访者。按随机数字表法将符合条件的67例患者分为2组，对照组34例，实验组33例，2组年龄、性别、GCS评分等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 治疗方法 对照组行临床常规治疗：甘露醇和甘油果糖脱水降颅压、营养神经、止血、营养支持、调控血压、抗生素预防感染、维持电解质稳定及对症支持治疗。观察组在对照组基础上给予醒脑静注射液20 mL溶于5%葡萄糖或生理盐水中静滴，1次/d，14 d一疗程，可重复应用。TBI 1周后进行自体BMSCs动员治疗，具体方案：应用动员剂重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor，rhGM-CSF)3 μg/kg皮下注射，1次/3 d，2种交替，连续21 d。

1.3 观察指标 采用GCS评分及美国国立卫生院神经功能缺损评分(national institutes of health stroke scores，NIHSS)标准评定疗效。应用流式细胞仪检测CD34+、CD133+细胞即内皮祖细胞(hematopoietic progenitor cells，EPCs)占外周血单核细胞(peripheral mononuclear cells，PMNC)的百分数。

1.4 安全性评定 每次应用动员剂前进行血常规和凝血功能检查，如果白细胞数升高<20×109L-1，可以继续注射，如果白细胞数≥20×109L-1，暂停应用；隔日复查后根据具体情况应用，定期复查肝肾功能。治疗期间密切观察患者生命体征，观察患者有无异常症状、体征。

2 结果

2.1 2组GCS评分、NIHSS评分比较 2组入院时GCS评分、NIHSS评分比较差异无统计学意义(P>0.05)，治疗1 d和28 d 2组GCS评分均呈递增趋势，与治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05)，治疗14 d和28 d 观察组GCS评分高于对照组(P<0.05)。见表1。治疗14 d和28 d 2组NIHSS评分均明显降低，观察组NIHSS评分显著低于对照组(P<0.05)。见表2。

表1 2组治疗前后GCS评分比较

表2 2组治疗前后NIHSS评分比较

2.2 CD34+、CD133+细胞计数 治疗前2组外周血CD34+、CD133+细胞在MNCs中的比例差异无统计学意义(P>0.05)，治疗3周后观察组显著高于对照组(P<0.01)。见表3。

表3 2组治疗前后CD34+、CD133+占外周血

2.3 不良反应 治疗期间2组均未出现明显不良反应，观察组5例发生不同程度发热，血常规显示白细胞计数增多，其中以中性粒细胞、单核细胞升高为主，均经给予物理降温后恢复正常。2例现血小板计数有升高，凝血功能指标轻微异常，短期内恢复正常。2组无特殊异常情况发生，无肢体感觉、运动功能障碍进一步恶化，监测生命体征平稳，无精神状态异常表现等。

3 讨论

重型TBI早期原发性损伤瞬时产生，继发性脑水肿、氧化应激和神经递质水平变化及缺血再灌注损伤等一系列病理生理变化，从而导致患者昏迷时间过长，致残、致死率较高[1]。提高颅脑创伤的救治水平，最大限度降低病死率及致残率仍是当前重点之一。在受损坏境中神经组织的自身修复与再生能力极其有限，因此损伤早期调控病灶微环境与促进神经再生一直是神经科学研究领域的难题。本研究将自体BMSCs动员联合醒脑静治疗TBI患者，以期促使患者昏迷觉醒，最大程度促进受损神经功能恢复。本研究结果显示，观察组较对照组GCS评分显著提高，外周血CD34+、CDl33+细胞增多，NIHSS评分低于对照组，且均无明显不良反应，表明BMSCs动员联合醒脑静明显促进骨髓干细胞的释放，创造更适合种子细胞生存和神经环路重建的微环境，促进神经再生，促进意识恢复，协同改善TBI患者神经功能，临床应用安全。

随着干细胞研究的不断深入，干细胞动员作为一种新型的干细胞疗法越来越受关注。BMSC动员具有无创、易于操作，无需体外培养、扩充，且无伦理道德限制等优势，是较为理想的促进损伤组织修复的方式。BMSC是一异质细胞群，含有多种干细胞，包括造血干细胞、骨髓间充质干细胞、血管内皮祖细胞等，具有很强的自我更新能力、多向分化能力[2-4]。rhG-CSF/rhGM-CSF 是目前已被批准临床应用的强有力的干细胞动员剂，可有效动员骨髓中的干细胞释放进入外周血，在各种细胞因子的诱导下迁移至损伤组织并定向分化为功能完备的组织细胞，促进受损组织的再生修复，提高了干细胞移植的疗效[2-4]。研究证明，动员的干细胞可透过血脑屏障向损伤部位趋化、迁移，促进受损部位神经细胞再生，与宿主自体神经元形成突触联系并重建神经回路，分泌神经生长因子和促进血管的再生，抑制细胞凋亡，有效促进脑出血、脑缺血、颅脑损伤患者神经功能恢复，显著改善患者预后[6-8]。本研究结果显示，观察组患者外周血CD34+、CD133+细胞数明显增高，显著高于对照组(P<0.05)，表明rhG-CSF/rhGM-CSF能够动员骨髓干细胞，促进自体BMSCs的增殖，打破骨髓干细胞与基质细胞的黏附作用释放入血。

醒脑静注射液是在古方安宫牛黄丸基础上科学提取的一种水溶性静脉注射液，主要由麝香、冰片、栀子、郁金等按照中医理论严格配伍，诸药合用协同起到醒脑开窍、兴奋中枢神经功能、解毒止痛、化痰通瘀等功效。现代临床研究发现，醒脑静注射液可透过血脑屏障直接作用于中枢神经系统，能有效减轻血脑屏障破坏程度，抗氧化及降低氧化自由基作用，降颅压及减轻脑水肿等继发性损伤[5]。刘刚强等[9]发现，麝香、冰片可下调TBI大鼠脑组织AQP-4的表达，减轻创伤性脑水肿，有助于降低神经细胞的损害。戴永建等[10]报道，醒脑静降低TBI大鼠神经细胞凋亡率及抑制凋亡相关基因Caspase-3的活化，而Bcl-2表达明显升高，起到神经保护作用。Xu等[7]应用醒脑静治疗TBI大鼠，结果发现醒脑静可通过降低病理性开放的BBB的通透性，显著减轻TBI后脑水肿程度。余丹凤等[11]发现，醒脑静可减低TBI患者血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2、白细胞介素-6水平，明显提高1周内清醒率，缩短昏迷时间，提高生活质量。

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(收稿 2015-03-12)

R651.1+5

A

1673-5110(2016)07-0071-03