糖蛋白的提取及免疫调节功能研究

郑昆

（吉林化工学院，吉林吉林132012）

糖蛋白的提取及免疫调节功能研究

郑昆

（吉林化工学院，吉林吉林132012）

验证糖蛋白生理活性及免疫调节功能以蛋清粉作为试验原料，对其进行提取及提纯处理，并通过对小鼠进行为期20d的喂养，然后分别取出脾脏及肝脏，进行胸腺指数及脾指数的SPASS分析，用来验证可溶性糖蛋白是否对免疫器官有影响；通过在小鼠尾静脉中注射中华墨汁，判断糖蛋白对小鼠非特性免疫功能的影响；通过定量溶血试验，验证可溶性糖蛋白对小鼠体液免疫功能的影响。结果表明：高剂量的糖蛋白对小鼠免疫器官无显著影响，而对机体的非特性免疫功能、机体的溶血值具有显著影响。

糖蛋白；可溶性糖；生理活性；免疫

在动植物及微生物当中糖蛋白普遍存在，并且是生物体中重要的组成部分，在细胞膜、细胞间质甚至是细胞外液中都存在糖蛋白[1]。由于糖蛋白的生理功能较为强大[2]，所以一直以来都是学术界研究的重点。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

新鲜蛋清粉，由吉林大学实验室提供；所需试剂有分析纯氯化钠、分析纯盐酸、分析纯无水乙醇、分析纯氢氧化钠和去离子水。中华墨汁，糖蛋白，小鼠（实验室喂养）

1.2 可溶性糖蛋白的提取优化方法

依据单因素试验结果，针对sevage试剂（以下简称A试剂）添加比例、sevage试剂中正丁醇和氯仿的比例、脱蛋白时间等进行正交试验见表1，然后利用多糖及蛋白质二者的含量指标对糖蛋白脱蛋白的工艺进行优化。

表1 正交试验因素变动表

1.3 可溶性糖蛋白对免疫器官的影响试验方法

对小鼠进行为期20d的喂养，然后分别取出脾脏及肝脏，进行胸腺指数及脾指数的SPASS分析，用此来验证可溶性糖蛋白是否对免疫器官有所影响。

1.4 可溶性糖蛋白对非特异性免疫功能的影响试验方法

将中华墨汁作为外来异物通过尾静脉注射到小鼠体内，这些小鼠已经喂养20d的糖蛋白，在注射完中华墨汁后分别在2min和10min时从小鼠静脉丛中进行取血，然后对血液的OD值进行测定，将小鼠处死，然后对其体重、脾脏及肝脏的重量进行测定，最后计算出吞噬指数，采用SPASS法进行结果分析。

1.5 可溶性糖蛋白对体液免疫功能的影响试验方法

将喂养了20d的小鼠使用SRBC进行免疫，免疫5d后将小鼠的脾脏细胞取出，然后用SRBC进行补体孵育，测定上清液的OD值进行测定，同样也采取SPASS法进行分析。

1.6 测定方法

可溶性糖蛋白使用考马斯亮蓝法进行含量的测定。

2 试验结果及分析

2.1 提取优化试验结果

以所测的蛋白质含量、多糖含量作为具体的衡量指标，在单因素试验的基础上，采用正交试验方法对脱蛋白的工艺进行优化，最终得到以下结论：①当在2∶1的正丁醇与氯仿混合液中添加3∶1的sevage试剂，脱蛋白的时间为30min，该试验条件下所得到的可溶性糖蛋白中蛋白质的含量是最低的，也就是说该试验条件下脱蛋白脱的是最彻底的，其蛋白质的含量大约为8%；②当在2∶1的正丁醇与氯仿混合液当中添加3∶1的sevage试剂，脱蛋白的时间为40min，该试验条件下所得到的可溶性糖蛋白中多糖的含量是最低的，也就是说该试验条件下脱蛋白的效果是最好的，其多糖的含量大约为4.6%。

2.2 可溶性糖蛋白对免疫器官的影响结果与分析

试验发现虽然喂养了糖蛋白的小鼠不管是胸腺指数还是脾指数都有了不同程度的提高，但是这种提高和对照组相比较并不是非常明显，这从侧面说明了糖蛋白对于免疫器官的影响并不是非常明显的。

2.3 可溶性糖蛋白对非特异性免疫功能的影响

从表1可以看出，与空白对照组相比，不管是低剂量、中剂量还是高剂量的糖蛋白对小鼠的吞噬指数值都有明显的影响，使其不同程度的有所提高，其中低剂量和中剂量的效果差不多，而高剂量的影响是最大的。我们知道吞噬细胞所具有的吞噬功能够反映出小鼠非特异性免疫功能，所以根据试验结果能够得出糖蛋白能够显著提高机体吞噬细胞的功能，从而使其非特异性免疫功能得到显著提高，其中高剂量的糖蛋白作用效果是最强的。

表1 糖蛋白对小鼠非特异性免疫功能的影响

2.4 可溶性糖蛋白对体液免疫功能的影响

从表2可以看出，和对照组相比，低剂量、中剂量和高剂量糖蛋白都能够对机体的溶血值产生影响，并且是正相关。这说明了糖蛋白可以影响机体的体液免疫，并且高剂量的糖蛋白度小鼠的体液免疫是最为显著的。

表2 糖蛋白对机体溶血值的影响结果

3 结论

首先对可溶性糖蛋白的提取进行了优化，然后为了对其所具有的免疫调节功能进行研究，分别用不同浓度的糖蛋白对小鼠进行为期20d的喂养，并采用不同的方法对其免疫功能进行定量测定，最后得出了高剂量的糖蛋白对小鼠免疫器官无显著影响，而对机体的非特性免疫功能、机体的溶血值具有显著影响。

[1]李琦,景浩.蛋清蛋白糖基化及其成膜性的研究[A]//中国食品科学技术学会第七届年会论文摘要集,2010.

[2]张艳.裸燕麦糖蛋白的提取纯化及抗氧化作用研究[D].保定:河北农业大学,2010.

Study on the Extraction of Glycoprotein and the Function of Immune Regulation

Zheng Kun
(Jilin Institute of Chemical Technology,Jilin Jilin 132012)

In order to verify the physiological activity and immune regulation function of glycoprotein.Test methods:the egg white powder as the test material,the extraction and purification process,and through a 20d feed on mice,and then remove the spleen and liver,thymus index and spleen index were analyzed by SPASS,to verify whether the soluble glycoprotein has effect on immune organs;the Chinese ink injection in mice in a vein,to evaluate the influence of P-glycoprotein on characteristics of immune function in mice;through quantitative hemolysis test,verify the effect of soluble glycoprotein on humoral immune function in mice.The results showed that high dose of glycoprotein had no significant effect on the immune organs of mice,but had significant effect on the immune function of the body and the hemolytic value of the body.

Glycoprotein;Soluble sugar;Physiological activity;Immunity

Q599

A

2096-0387（2016）06-0063-02

郑昆（1970-），男，吉林省吉林市人，博士，副教授，研究方向：生物化工-酶制剂。