HPLC法测定复方对乙酰氨基酚片含量

鲁波

摘 要：目的：建立复方对乙酰氨基酚片中乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚以及咖啡因含量的具体检测方法。方法：在测定的过程中采用高效液相色谱仪，将C18当做色谱柱，将PH值为3.0的0.05M磷酸二氢钾-配比为75：25的甲醇当做流动相，检测的波长为254nm，同时在测定的过程中还要采用外标法进行测定。结果：在对3种成分进行检测之后发现，其具有非常好的线形关系，此外，在分离度方面也完全符合检测的要求。结论：采用高效液相色谱法对复方对乙酰氨基酚片的含量进行测定操作非常的简单，同时测定的结果精确性强，所以也可以将其当做复方对乙酰氨基酚片的基本检验方法。

关键词：复方对乙酰氨基酚片；HPLC法；含量测定

复方对乙酰氨基酚片是一种临床上比较常用的解热镇痛的药物，它在应用的过程中疗效非常好，同时在使用的时候也不会产生非常明显的副作用，所以在这种药物也得到了非常广泛的应用，相关标准的含量测定当中采用容量法、中和法、重氮化法以及氧化还原的方法对3种主要的成分进行测定处理在测定的时候，不同的组分之间可以形成良好的玻璃管理，同时还具备良好的线形关系，这种方法比较简单，准确性也比较强，所以也比较适合应用在本品的质量控制工作中。

1、仪器药品及试剂

SP8810液相色谱仪，CC100紫外可见光检测器，SP4270积分仪。对乙酞氨基酚对照品由中国药品生物检定所提供，乙酞水杨酸（含量99.8%），咖啡因（99.6%），以及样品均由赤峰永巨制药厂提供，甲醇、磷酸二氢钾为分析纯。

2、色谱条件

流动相：0.05M磷酸二氢钾（磷酸调pH3.0）一甲醇（75：25），流速0.8ml/min，检测波长254nm，灵敏度0.1，室温，进样量10μl。

3、实验方法

线形关系：精确称取乙酰水杨酸对照品25mg，对乙酰氨基酚对照品12mg，将其放置在容积为50ml的容量瓶当中。加入35ml的流动相，同时采用超声的方式使其充分的溶解。还要精确的称取咖啡因对照品15mg，将其放置在容积为50ml的容量瓶当中，加入流动至刻度的位置。精确量取上述对照品溶液10ml，加入适量的流动相使其到达刻度，分别取上述对照品溶液3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5ml，将其放置在容积为10ml的容量瓶当中，使用流动相将其稀释到刻度的位置，之后进行摇匀处理，取出上述10μl上述的溶液，注入HPLC，将峰面积当做纵坐标，将浓度当做横坐标开展直线方程回归分析，如表1、表2、表3所示：

回归啦试验：用药用天平精确的称取适量的对照品，将其配制成3批浓度完全不同的溶液，同时还要按照配方的要求加入辅料，将其制成试液，在过滤之后，每一种浓度都要取出3份进样，其容积为10μl，之后对平均回收率进行计算。

重现性试验：取线性关系实验的溶液5—10ml，将其连续进样5次，得出对乙酰氨基酚的RSD为0.59%，乙酰水杨酸的RSD为0.88%，咖啡因的RSD为0.71%。

稳定性试验：精确的量取上述重现性试验当中所使用的溶液，将其分别放置2、4、6、8小时，4个时间间隔对其进行实验，在实验中发现随着时间的推移，峰面积的变化并不是十分的明显。

干扰性试验：精确称取辅料适量，将其按照处方的比例配置成辅料溶液，将其进行过滤处理，取出10μl的过滤液，将其注入色谱仪中，对色谱图进行记录，40分钟之内没有出现吸收峰。

有关物质测定：根据部颁标准有关物质对游稗水杨酸检查限度，可取一定量的水杨酸对照溶液是行峰面积比较。其样品溶液在咖啡因峰前能分离水杨酸，分离度大于2。

样品测定：取出10片本品，对其进行称定，同时还要进行研细处理，，称取适量的样品，加入流动相，流动相的容积为70ml，采用超声溶解的方式加以处理，之后加入流动相，最终的容积为100ml，将其摇匀和过滤处理，取出5ml的滤液，加入流动相至10ml，将其当做样品溶液。

另取对照品对乙酞氨基酚12.6mg，乙酞水杨酸23mg，置100m1容量瓶中，加流动相70m1，振摇溶解。另取咖啡因15mg置50m1容量瓶中，加流动相溶解成50m1，摇匀，精密量取该溶液l0l加到上述100m1容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液5m1，加流动相稀释至l0ml，作为对照品溶液。分别取供试品、对照品溶液各10ml注入液相色谱仪，外标法计算含量。

取某药厂生产的复方对乙酞氨基酚片，分别用部颁标准和新建立标准检验，其含量测定结果为部颁方法：乙酞水杨酸98.6%，对乙酞氨基酚97.4%，咖啡因100.096%HPLC法：乙酞水杨酸98.9%，对乙酞氨基酚97.8%，咖啡因100.1%。

4讨论

高效液相色谱分析的流程。由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。

高效液相色谱的分离过程。开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

经过以上试验证明，该方法能够准确测定其各成分含量，与部颁法无显著差别。此方法可靠，快速方便，操作简单，结果稳定，同时也提高了分析结果的准确性和重现性。

参考文献：

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[3]杨宝翠，刘凤武，屈云萍.复方对乙酰氨基酚片制粒工艺研究[J].临床合理用药杂志.2013（07）