复方阿托伐他汀依折麦布胶囊的质量控制

李　晗，李继斌，邢正英，戴学文，房志仲（天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津　300070）



复方阿托伐他汀依折麦布胶囊的质量控制

李晗，李继斌，邢正英，戴学文，房志仲
（天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

摘要目的：建立复方阿托伐他汀依折麦布胶囊的质量控制方法。方法：利用HPLC法测定复方阿托伐他汀依折麦布胶囊中主药的含量与制剂的含量均匀度，色谱条件为：TIANHE誖Kromasil C(18)色谱柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.05 mol/L KH2PO4（磷酸调节pH至3.0）-乙腈（5∶45∶50）；检测波长为λ=236 nm；流速1.0 mL/min；进样量20 μL；柱温为25℃。结果：阿托伐他汀在1.12～16.8 μg/mL的浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9），依折麦布在1.14～17.1 μg/mL的浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9）；阿托伐他汀和依折麦布的平均加样回收率分别为100.58%和100.64%，RSD分别为1.18%和0.92%。结论：该HPLC测定条件和含量测定方法能够有效地测定样品的含量，且简便易行。

关键词阿托伐他汀；依折麦布；高效液相色谱法；质量控制；含量均匀度

Quality control of compound atorvastatin and ezetimibe capsule

LI Han,LI Ji-bin,XING Zheng-ying,DAI Xue-wen,FANG Zhi-zhong
（College of Pharmacy,Tianjin Medical University,Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics(Theranostics),Tianjin 300070,China）

Abstract Objective:To establish an appropriate method to determine contents of atorvastatin and ezetimibe in compound atorvastatin and ezetimibe capsule.Methods:Content and content uniformity of compound atorvastatin and ezetimibe capsule were determined by an HPLC method,in which a TIANHE誖Kromasil C18column(200 mm×4.6 mm,5 μm)was used as stationary phase and a mix of methanol-0.05 mol/L KH2PO4(adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid)-acetonitrile(5∶45∶50)was used as mobile phase.The detection wavelength was 236 nm and flow rate was 1.0 mL/min.Column temperature was set at 25℃.Results:The concentration detection of atorvastatin showed a fine linearity between 1.12-16.8 μg/mL(r=0.999 9),while the concentration detection of ezetimibe showed a fine linearity between 1.14-17.1 μg/mL(r=0.999 9);the average recoveries of atorvastatin and ezetimibe were 100.58% and 100.64%,respectively,and corresponding RSD values were 1.18% and 0.92%,respectively.Conclusion:The detection method in this study is simple and accuracy,so it is appropriate to be used in the quality control of the compound atorvastatin and ezetimibe capsule.

Key words atorvastatin；ezetimibe；HPLC；quality control；content uniformity

高脂血症是指由于脂肪代谢和运转异常导致血浆中几种类型的脂质高于正常水平的一种疾病。这几种脂质通常指血中总胆固醇（TC）和三酰甘油酯（TG）以及低密度脂蛋白（LDL－C），此外高密度脂蛋白（HDL－C）水平的降低也会导致高脂血症。近年来，随着人们生活水平的不断提高和社会压力的增大，高脂血症等血脂异常疾病的发病率也呈现出逐年上升的趋势，疾病的多发人群也不再只是集中于老年人，而是逐渐年轻化。这些疾病严重威胁着人们的健康，因此对于高脂血症的治疗刻不容缓。阿托伐他汀是一种羟甲基戊二酰辅酶A（HMG－CoA）还原酶抑制剂，与选择性胆固醇吸收抑制剂依折麦布联合应用，可分别从胆固醇的内、外源性途径对血脂水平进行调节，产生协同作用，强力降低血浆LDL-C水平，以达到最佳的调脂效果[1-3]。本课题对自制的复方阿托伐他汀依折麦布胶囊剂进行了质量控制方面的研究，摸索高效液相色谱法条件，建立检测自制制剂中两种药物的质量控制方法，确保所建立的方法准确、可靠、简便、易行。

1　材料与方法

1.1试药供试品：复方阿托伐他汀依折麦布胶囊（自制）；对照品：阿托伐他汀钙（AVAIAMJ02A，印度卡迪拉公司，批号：20121103）；依折麦布(自制，批号：20140821)；甲醇（天津市风船化学试剂科技有限公司，色谱纯）；乙腈（天津市风船化学试剂科技有限公司，色谱纯）；其它试剂均为市售分析纯；重蒸水（自制）。

1.2仪器高效液相色谱仪（美国Spectra -Physics）；柱温箱（Model 100，天津科贝尔公司）；色谱柱（Kromasil C18，200 mm×4.6 mm，5 μm）；Anastar色谱工作站（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；ALC-210.4电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热真空干燥箱DZG-403（天津市天宇实验仪器有限公司制造）；KQ-100B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；酸度计PHS-25（数显）pH计（上海精密科学仪器有限公司）。

1.3方法[4-7]

1.3.1色谱条件[8-10]色谱柱：TIANHE誖Kromasil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.05 mol/L KH2PO4（调节pH至3.0）-甲醇（50∶45∶5）；检测波长λ为236 nm；柱温为25℃；流速1.0 mL/min；进样量20 μL。

1.3.2溶液制备（1）对照品溶液的制备：精密称取依折麦布对照品5.7 mg与阿托伐他汀对照品5.6 mg，分别置于50 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容，摇匀得贮备液；然后分别精密量取1 mL上述贮备液，共同置于10 mL量瓶中，加入流动相溶解并定容，摇匀得对照品溶液；再分别精密量取1 mL上述贮备液，分别置于10 mL量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀则分别得到阿托伐他汀与依折麦布的单一对照品溶液。（2）供试品溶液的制备：取适量自制样品研磨均匀，精密称定51.3 mg置于25 mL量瓶中，加入适量甲醇超声，使完全溶解后，定容至刻度。取一定量的溶液离心，2 000 r/min，5 min。取上清液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，精密量取续滤液2.0 mL置于10 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，即得供试品溶液。（3）阴性对照溶液的制备：按照自制处方制得不含阿托伐他汀与依折麦布的空白制剂，根据上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

1.3.3系统适用性试验分别吸取对照品溶液和阿托伐他汀与依折麦布的单一对照品溶液以及阴性对照溶液各20 μL并进样，根据“1.3.1项下”的色谱条件进行测定并记录色谱图。

1.3.4线性关系考察[11-12]用移液管分别精密移取依折麦布/阿托伐他汀贮备液0.1/0.1、0.2/0.2、0.5/ 0.5、0.8/0.8、1.0/1.0、1.2/1.2和1.5/1.5 mL置于10 mL量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，可以得到依折麦布/阿托伐他汀浓度系列为1.14/1.12、2.28/2.24、5.7/5.6、9.12/8.96、11.4/11.2、13.68/13.44和17.1/ 16.8 μg/mL的样品溶液，分别进样，根据“1.3.1项下”的色谱条件进行测定并记录峰面积。

1.3.5精密度试验（1）日内精密度：取“1.3.2项下”所制对照品溶液，同一天内连续进样6次，按照“1.3.1项下”色谱条件进行测定，计算峰面积的RSD。（2）日间精密度：取“1.3.2项下”所制对照品溶液，连续进样6 d，按照“1.3.1项下”色谱条件进行测定，计算峰面积的RSD。

1.3.6稳定性试验取“1.3.2项下”所制对照品溶液，分别于第0、3、6、9、12和24 h进样，按照“1.3.1项下”色谱条件进行测定，计算峰面积的RSD。

1.3.7重复性试验根据“1.3.2项下”供试品溶液的制备方法对同一批样品进行处理得到样品溶液，重复进样6次，按照“1.3.1项下”色谱条件进行测定，计算峰面积的RSD。

1.3.8回收率试验精密称取9份自制样品的粉末51.3 mg置于25 mL量瓶中，分成3组，分别按照80%、100%和120%的比例加入阿托伐他汀和依折麦布对照品，按照“1.3.2项下”供试品溶液的制备方法进行处理，进样，按照“1.3.1项下”色谱条件进行含量的测定，计算回收率。

1.3.9含量测定根据“1.3.2项下”供试品溶液的制备方法对3批样品进行处理得到样品溶液，进样，按照“1.3.1项下”色谱条件进行测定，使用外标一点法计算阿托伐他汀与依折麦布的含量。

1.3.10含量均匀度的测定取1粒待测自制样品称重后研磨均匀，全部转移至100mL量瓶中，加入适量甲醇，超声至粉末全部溶解后，继续用甲醇稀释定容至刻度。取一定量的溶液离心，2 000 r/min，5 min。取上清液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，精密量取续滤液1 mL置于10 mL量瓶中，用流动相稀释定容，即制得样品溶液，进样，按照“1.3.1项下”色谱条件进行含量的测定。继续按照该方法，重复测定10粒，计算每一粒的主药含量，同时统计其均值和标准差，按照《中国药典》2010版(二部)附录XE规定[13]进行测定。

2　结果

2.1系统适用性试验色谱图见图1。在“1.3.1项下”的色谱条件下，两主药之间、主药与辅料之间可明显分离，互不干扰。

2.2线性关系考察结果以阿托伐他汀的峰面积（A）对浓度（C）做线性回归的标准曲线，得到线性方程为A=49 864C+2 333.3，r=0.999 9，表明阿托伐他汀在1.12～16.8 μg/mL的浓度范围内线性关系良好；以依折麦布的峰面积（A）对浓度（C）做线性回归的标准曲线，得到线性方程为A=46 607C+3 202.6，r=0.999 9，表明依折麦布在1.14～17.1 μg/mL的浓度范围内线性关系良好。

2.3精密度试验结果阿托伐他汀和依折麦布的日内精密度试验的RSD分别为0.78%和0.84%（n=6）；日间精密度试验的RSD分别为0.83%和0.53%（n=6），表明精密度良好。

2.4稳定性试验结果阿托伐他汀和依折麦布的RSD分别为0.88%和0.72%（n＝6），表明阿托伐他汀和依折麦布在24 h内稳定性良好。

图1　系统适用性试验Fig 1 System adaptability test

2.5重复性试验结果阿托伐他汀和依折麦布的RSD分别为0.29%和0.63%（n=6），表明阿托伐他汀和依折麦布重复性良好。

2.6回收率试验结果自制复方阿托伐他汀依折麦布胶囊中阿托伐他汀与依折麦布的平均加样回收率分别是100.58%和100.64%，RSD分别是1.18%和0.92%，符合要求，详细测定结果见表1、2。

2.7含量测定结果3批样品中阿托伐他汀和依折麦布的含量测定结果见表3。

表1　阿托伐他汀的回收率试验Tab 1 The recovery tests of atorvastatin

表2　依折麦布的回收率试验Tab 2 The recovery tests of ezetimibe

表3　阿托伐他汀和依折麦布的含量测定结果Tab 3 Content determination of atorvastatin and ezetimibe

2.8含量均匀度的测定结果根据测得含量计算A+1.80S，结果如下：样品中阿托伐他汀的平均标示量为105.62%，A+1.80S=7.63＜15.0；样品中依折麦布的平均标示量为105.09%，A+1.80S=8.54＜15.0。表明自制复方阿托伐他汀依折麦布胶囊中，阿托伐他汀和依折麦布的含量均匀度良好。

3　讨论

3.1色谱条件的确定经查阅相关文献[6]得到同时测定阿托伐他汀和依折麦布含量的色谱条件为：流动相0.05 mol/L KH2PO4（调节pH至3.0）-乙腈（45∶55），流速1.0 mL/min，检测波长为236 nm。将混合对照品在上述色谱条件下进行进样分析，两种主药分离度较低。调慢流速为0.8 mL/min，分离度仍没有明显改善，调回流速为1.0 mL/min，调节流动相的组成和比例，增加极性相对较小的甲醇，多次改变甲醇、乙腈和磷酸盐的比例后得到最终流动相为0.05 mol/L KH2PO4（调节pH至3.0）-甲醇-乙腈（45∶5∶50），流速为1.0 mL/min。

3.2测定波长的选择经查阅文献[6]得到同时测定阿托伐他汀和依折麦布含量时的检测波长为236 nm，而试验中对混合对照品进行紫外扫描时，得到的检测波长为246 nm。故分别在246 nm和236 nm两个波长处进行含量测定，结果显示，在236 nm时检测阿托伐他汀和依折麦布两个组份更加灵敏。因此我们选择236 nm为此HPLC法的检测波长。

3.3供试品溶液的制备方法阿托伐他汀和依折麦布水溶性均较差，而易溶于甲醇[14-16]。故本试验中用甲醇作为稀释溶液溶解药品颗粒，此时，药品稳定性好，且进样分析时色谱峰的峰形好。

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（2015-05-22收稿）

作者简介李晗（1990-），男，硕士在读，研究方向：药物制剂与质量控制研究；通信作者：房志仲，E- mail:fangzhizhong@tijmu.edu.cn。

文章编号1006－8147（2016）01-0076-04

中图分类号R927.2

文献标志码A