小檗碱对卵白蛋白致敏豚鼠离体回肠平滑肌的影响*

仇　燚

(四川省泸州市中医医院，四川 泸州　646000)



小檗碱对卵白蛋白致敏豚鼠离体回肠平滑肌的影响*

仇燚

(四川省泸州市中医医院，四川 泸州646000)

摘要目的：研究小檗碱对卵白蛋白致敏的离体回肠平滑肌的影响。方法：采用体外离体器官实验法，观察小檗碱(20~100 μg·ml(-1))对卵白蛋白致敏豚鼠离体回肠平滑肌的影响，以及对磷酸组织胺(His)和氯化乙酰胆碱(Ach)所致豚鼠离体回肠收缩的影响。结果：小檗碱(20~100 μg·ml(-1))能明显抑制卵白蛋白致敏豚鼠离体回肠平滑肌收缩，对His和Ach所致的豚鼠离体回肠平滑肌收缩也有一定的抑制作用。结论：小檗碱对卵白蛋白致敏的豚鼠离体回肠平滑肌有明显的解痉作用。

关键词：小檗碱；豚鼠回肠平滑肌

小檗碱(Berberine)又名黄连素，是从黄连根茎中提取的生物碱。小檗碱在临床上主要利用其显著的抑菌作用来治疗细菌性痢疾和肠胃炎等疾病。有时临床上也外用于治疗一些皮肤过敏性疾病，如过敏性皮炎、婴儿湿疹等。现代药理学研究显示小檗碱的其药理作用广泛，具有抗菌、抗血小板聚集、抗心律失常、降血压、免疫抑制等作用[1]。已有的研究文献显示小檗碱对胃肠道平滑肌有一定的解痉药理活性，小檗碱对大鼠离体胃平滑肌有明显的舒张作用，可明显抑制5羟色胺所致的胃平滑肌收缩[2]，能剂量依赖的抑制His和Ach所致的家兔离体回肠平滑肌收缩，其作用机制与其钙拮抗有一定关系[3]。为进一步研究，我们采用卵白蛋白所致敏的豚鼠离体回肠平滑肌收缩模型，及组胺和乙酰胆碱所致的豚鼠离体回肠平滑肌收缩模型，探讨小檗碱对豚鼠离体回肠平滑肌的影响，现报告如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验药物

盐酸小檗碱，批号110713-200910，规格30 mg/瓶，中国药品生物制品检定所，含量97.9%。

1.1.2动物

豚鼠，英国种，一级，60只，雌雄兼用，生产许可证号：SCXK(川)2008-14，由四川省实验动物养殖场提供。

1.1.3试剂

组胺磷酸盐，规格：5 g/瓶，批号：F20100319，国药集团化学试剂公司，BR级；氯化乙酰胆碱，规格1 g/支，批号：20061130，上海三爱思试剂有限公司，CP级；卵白蛋白，含量≥98%，批号：040M7001V，Sigma公司。

1.1.4仪器

Powerlab/8sp生理记录仪，澳大利亚AD 仪器公司。

1.2方法

1.2.1卵白蛋白致敏的豚鼠离体回肠平滑肌收缩

按文献方法[4]，取体重150~200 g的健康豚鼠，于每只豚鼠两后肢各注射5%卵白蛋白生理盐水溶液0.4 ml，同时腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液1 ml。第5周取致敏的豚鼠，用铁棒猛击枕部致昏迷，立即剖开腹腔，从回盲交界处向上2 cm开始，取出回肠一段，制备成约2 cm长的肠段若干。置于盛有10 ml克氏液的浴槽中，通氧，负荷1 g，37℃平衡30 min。然后分别依次加入空白溶媒，小檗碱不同浓度进行预处理，孵育约5 min后，加卵白蛋白0.2 mg(1 mg·ml-1卵白蛋白克氏液，0.2 ml)激发离体回肠收缩。用Powerlab生理信号仪记录预处理前3 min和加入卵白蛋白后3 min的豚鼠回肠平滑肌肌条的活动曲线，计算其平均收缩幅度，并以他们之间的差值作为效应值。受试药物的药效亦可用回肠收缩幅度抑制率表示，抑制率=(1-受试药物的效应值/空白对照组的效应值)×100%。

1.2.2组胺、乙酰胆碱所致的豚鼠离体回肠平滑肌收缩

取禁食不禁水24 h健康豚鼠，用铁棒猛击枕部致其昏迷，立即剖开腹腔，制备离体回肠平滑肌条(方法同前)，置于盛有10 ml克氏液的浴槽中。充氧，负荷1 g，37℃保温，平衡30 min，待基线稳定后加入终浓度为2 μg·ml-1的激动剂His或10 μg·ml-1的Ach，用克氏液洗3次。待回肠恢复正常状态后，分别依次加入空白溶媒，盐酸小檗碱不同浓度进行预处理，孵育约5 min后，加入与前等剂量的His或Ach。记录预处理前3 min和加入激动剂后3 min的豚鼠回肠平滑肌肌条的活动曲线，并计算其平均收缩幅度和抑制率，方法同上。

1.3统计学处理

2结果

2.1对卵白蛋白致敏的豚鼠离体回肠平滑肌收缩活动的影响

加入小檗碱不同剂量进行预处理，其回肠平滑肌条收缩幅度效应值均明显低于空白对照组(P<0.01)，提示小檗碱(20~100 μg·ml-1)对卵白蛋白所致离体回肠平滑肌收缩有明显的拮抗作用，在80 μg·ml-1浓度下即可完全抑制卵白蛋白所致的离体回肠平滑肌收缩，见表1。

表1　小檗碱对卵白蛋白致豚鼠离体回肠平滑肌收缩的影响±SD，n=6)

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2对组胺所致的豚鼠离体回肠平滑肌收缩活动的影响

加入不同剂量的小檗碱进行预处理，其加入激动剂磷酸组胺后的回肠平滑肌条收缩幅度均低于空白对照组(P<0.05或P<0.01)，提示盐酸小檗碱在20~320 μg·ml-1浓度范围内对组胺所致离体回肠平滑肌收缩有拮抗作用。但其抑制作用不强，当终浓度达到160 μg·ml-1时，其抑制率才达到60.2%，见表2。

表2　小檗碱对组胺致豚鼠离体回肠平滑肌收缩的影响±SD，n=10)

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2对乙酰胆碱所致的豚鼠离体回肠平滑肌收缩活动的影响

由表3可见，加入不同剂量的盐酸小檗碱进行预处理，在终浓度为80~320 μg·ml-1之间的剂量，对激动剂氯化乙酰胆碱所致的离体回肠平滑肌收缩有抑制作用(P<0.05或P<0.01)，但其抑制作用也不强，当终浓度达到160 μg·ml-1时，其抑制率仅41.5%。

3讨论

本实验采用的试验模型属于IgE介导的Ⅰ型变态反应。试验模型采用卵白蛋白致敏豚鼠，致敏完成后处死豚鼠，并分离出已致敏的离体回肠平滑肌，当已致敏的豚鼠离体回肠在抗原卵白蛋白的攻击下，肥大细胞脱颗粒释放出过敏介质(主要是组胺)，使致敏的离体回肠平滑肌收缩，这称为Schultz-Dale反应。一般而言，本研究模型通常可作为抗过敏药物的初筛模型，但解痉药、局麻药及拟交感神经药物在本模型也可以得到阳性结果，有时会干扰试验结果的判断。因此在设计试验方案时，我们也同时考察了小檗碱对组胺和乙酰胆碱所致的离体回肠收缩模型的影响。从我们的试验结果来看，20 μg·ml-1的小檗碱即可产生明显的抑制作用(65.9%)，在80 μg·ml-1浓度下则可全部抑制卵白蛋白所致的致敏离体回肠平滑肌收缩。但是在组胺和乙酰胆碱所致的离体回肠收缩模型试验中，小檗碱的终浓度在80 μg·ml-1浓度时抑制作用很弱(40.9%和43.1%)，终浓度需达到320 μg·ml-1时才会产生比较明显的抑制作用(78.5%和81.5%)。试验结果提示小檗碱对卵白蛋白致敏的豚鼠离体平滑肌有明显的解痉作用，可能具有抗Ⅰ型变态反应的药理活性，值得进一步深入研究。

表3　小檗碱对乙酰胆碱致豚鼠离体回肠平滑肌收缩的影响±SD，n=8)

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

小檗碱在临床上可以用于治疗一些皮肤过敏性疾病[5-7]，但其机理不清。根据一些已报道的临床前药理研究文献，小檗碱治疗皮肤过敏性疾病的机理可能与其抗ⅳ型变态反应药理活性相关，如有文献报道小檗碱能抑制二硝基氟苯(DNFB)所致的迟发型变态反应(DTH){8-10}，其机制涉及到抑制IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-2 等细胞因子的产生和分泌[9]，降低T淋巴细胞和细胞外基质的黏附能力[10]。我们的研究结果显示，小檗碱对卵白蛋白致敏的豚鼠离体回肠平滑肌有较好的解痉作用，提示其治疗皮肤过敏性疾病的机理也可能涉及到抗Ⅰ型变态反应的药理作用。

参考文献

1黄才国,储钟禄,杨志铭. 黄连素药理的研究进展[J]. 药学情报通讯, 1991, 9(4): 10-12.

2谭正怀,李杭翼. 小檗碱、巴马亭及黄连总生物碱对大鼠胃条的作用比较研究[J]. 中药药理与临床, 2006, 22(3-4): 48-50.

3李乐,庄斐尔,赵东科,等. 小檗胺松弛家兔离体回肠的作用[J]. 西安医科大学学报(中文版), 1994, 15(3): 264-266.

4徐叔云 主编. 药理实验方法学(第三版)[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2005, 1411-1411.

5王淑忠,马颖,李明丽,等. 黄连素溶液联合丁酸氢化可的松软膏治疗婴儿急性湿疹[J]. 中国药师, 2013,16(11): 1721-1722.

6何春霖. 黄连素片外用治疗婴儿非渗出性湿疹37例[J]. 中国中西医结合杂志, 2008, 28(3): 251-251.

7杨秀芳,季姗姗,王雪燕. 黄连素湿敷治疗面部湿疹皮炎156例疗效观察[J]. 中国麻风皮肤病杂志, 2007, 23(5): 456-456.

8邱全瑛,谭允育,赵岩松,等. 黄柏和小檗碱对小鼠免疫功能的影响[J]. 中国病理生理杂志, 1996, 24(6): 664-664.

9吕燕宁,邱全瑛. 小檗碱对小鼠DTH及其体内几种细胞因子的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2000, 16(3): 139-141.

10杜丽蕊,何贤辉,徐丽慧,等. 小檗碱对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2005, 21(4): 418-421.

Effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig*

Qiu Yi

(LuZhou TCM Hospital of Sichuan Province, Sichuan Luzhou 646000)

AbstractObjective：To study the effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig. Methods: The effects of berberine (20~100 μg·ml-1) on the contraction of ovalabumin sensitized ileum smooth muscle strips were observed by ex vivo evaluation methods, and the effects of berberine (20~320 μg·ml-1) on the contraction of ileum smooth muscle strips induced by His/Ach were also observed. Results: Berberine (20~100 μg·ml-1) could significantly inhibited the contractility of sensitized ileum smooth muscle, and partly inhibited the contraction induced by His/Ach. Conclusion: Berberine has significant antispasmodic activity on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig.

Key Words:Berberine; Isolated ileum smooth muscle strips

(收稿日期：2015-12-14)

作者简介：仇燚，男，副主任医师，主要从事中西医结合内科临床工作，Email：qiuyihaoren@163.com。

*基金项目：泸州市卫生科技项目(编号：2005-05)